Реакция кумбса отрицательная. Методика определения групп крови. Гемолитическая болезнь новорожденного

В последние годы среди пациентов различного возраста увеличилось количество заболеваний крови и для их диагностики используются различные методы и средства. Проба Кумбса является клиническим исследованием крови, и цель ее проведения заключается в выявлении в организме определенных , представляющих угрозу для здоровья человека.

Может произойти приклеивание антител к и результатом этого может стать нарушение состояния иммунной системы. Прямая проба Кумбса представляет собой антиглобулиновый тест, который проводится для выявления антител, прикрепившихся к поверхности эритроцитов.

Обычно специалисты прибегают к проведению теста на антитела в следующих ситуациях:

Необходимость переливания крови. Из курса школьной анатомии известно, что у человека может быть одна из четырех групп крови. Проведение антиглобулинового теста позволяет определить возможность переливания крови в другой организм. Говорить о том, что пациент может стать донором для переливания можно лишь в том случае, если его кровь соответствует типу больного, то есть в ней присутствуют одинаковые антигены. В том случае, если у пациента и донора существует различие антигенов, то это может привести к тому, что произойдет разрушение иммунной системой перелитых клеток. Результатом этого может стать развитие тяжелых заболеваний и осложнений, и даже летальный исход. Именно по этой причине важную роль придается поиску нужного типа крови при появлении необходимости ее переливания.
Определение риска резус-сенсибилизации. Современная медицина определяет резус как антиген, а его полным определением является понятие «резус-фактор». Благодаря тесту Кумбса удается диагностировать присутствие антител к резус-фактору в крови женщин во время . В том случае, если будущая мамочка имеет отрицательный резус-фактор, а отец положительный, то будущий ребенок может унаследовать любой из них. При выявлении у будущего ребенка положительного резус-фактора повышается опасность развития резус-сенсибилизации — это процесс смешения крови и матери во время беременности или родовой деятельности.

В том случае, если наблюдается несовместимость группы матери и ребенка, то иммунная система женского организма начинает воспринимать плод как чужеродный предмет и оказывает на него всевозможную атаку. Результатом этого может стать развитие тяжелой патологии у ребенка, которая получила название эритробластоза. В некоторых случаях при отсутствии эффективного лечения наблюдается гибель плода в утробе матери либо сразу же после его рождения.

В некоторых случаях проба Кумбса проводится с целью выявления аутоиммунной гемолитической .

Такое заболевание встречается довольно редко и проявляется в образовании к антигенам эритроцитов своего собственного организма.

Специалисты выделяют две разновидности проб Кумбса, каждая из которых применяется для определенных целей.

Прямая проба. Прямая проба в медицинской практике еще называется прямой антиглобулиновый тест и с его помощью удается диагностировать антитела, прикрепленные к поверхности . В некоторых случаях производство таких антител в организме человека происходит как результат прогрессирования различных либо приема таких лекарственных препаратов, как:

Хинидин
Метилдоп
Прокаинамид

Опасность таких антител кроется в том, что они могут становиться причиной развития и оказывать разрушающее воздействие на . Иногда к проведению теста Кумбса прибегают в том случае, когда необходимо выявить причины развития таких патологий, как анемия и .

У нормой считается отрицательная реакция пробы Кумбса.

Непрямая проба. Часто специалисты прибегают к проведению непрямой пробы Кумбса, которая имеет второе название «непрямой антиглобулиновый тест». Основной целью такого является выявление антител к эритроцитам, которые присутствуют в сыворотке крови. Благодаря такой пробе удается определить, совпадает ли кровь донора с кровью пациента при необходимости ее переливания. Такой анализ является своеобразной пробой на совместимость и благодаря его проведению удается избежать развития неблагоприятной реакции на донорскую кровь.

Обычно такое исследование рекомендуется проходить женщинам во время . У некоторых мамочек в организме могут присутствовать антитела определенного класса, способные проникать через плаценту в кровь будущего ребенка. Результатом такого процесса может стать гемолитическая болезнь плода, а также развитие различных во время беременности.

Подготовка к процедуре и ее проведение

Обычно к проведению процедуры не требуется какая-либо специальная подготовка, а провести можно совершенно в любое время.

Подготовка к диагностике включает в себя следующие моменты:

в том случае, если анализ будет проводиться у новорожденного, то родителям следует объяснить, что с его помощью удастся диагностировать гемолитическое заболевание
при присутствии подозрения на развитие у пациента гемолитической болезни ему необходимо разъяснить, что проведение такого анализа поможет определить причины ее развития
подготовка к анализу не требует каких-либо ограничений в еде и режиме питания
при проведении анализа у новорожденного, следует сообщить родителям о том, что понадобится забор крови из вены, а также уточнить время проведения процедуры
необходимо известить пациента о том, что во время наложения жгута и забора крови могут возникать неприятные ощущения
прием лекарственных препаратов может искажать результаты пробы Кумбса, поэтому за некоторое время до ее проведения их следует отменить

При проведении прямой пробы Кумбса из вены с помощью шприца берется кровь. Перед началом проведения процедуры выполняется тщательная дезинфекция места прокола, а после забора материала для исследования налаживается вата либо стерильная марля. В том случае, если анализ проводится у новорожденных, то кровь берется из пуповины.

При появлении гематомы после забора крови назначается прилаживание согревающих компрессов на место прокола. После проведения процедуры пациент может возобновить прием лекарственных препаратов.

В лаборатории проводится очищение полученной крови и параллельно с этим выполняется отделение красных кровяных телец.

Специалистом проводиться исследование образца с использованием различных реагентов сыворотки и Кумбса, противопоставляемых глобулину человека. В том случае если не происходит слипания эритроцитов и не развивается агглютинации, то можно говорить о положительном результате.

Во время проведения могут возникать следующие осложнения:

развитие из места забора крови во время исследования
головная боль, головокружения либо обморок
развитие кровоизлияния под кожные покровы
при плохой антимикробной обработке кожных покровов в месте инъекции повышается риск проникновения инфекции в организм

Результаты исследования

Расшифровка — возможные заболевания

У здорового человека в организме отсутствуют антитела к , то есть в норме их не должно быть. В том случае, если проведенное исследование покажет положительную пробу, то это может обозначать присутствие в организме антител на красных кровяных клетках.

Результатом такого патологического состояния может стать разрушение эритроцитов, и обычно оно развивается:

при системной
при микоплазменной инфекции
при инфекционном мононуклеозе
при гемолитическом заболевании новорожденных
при медикаментозной гемолитической анемии
при лимфолейкозе хронического характера
при аутоиммунной гемолитической анемии
при несовместимости крови плода и матери

Прямая проба Кумбса часто назначается женщинам во время беременности для определения совместимости крови матери и плода. В том случае, если наблюдается несовместимость материнского организма и будущего ребенка по эритроцитарным агентам, то повышается опасность развития гемолитического заболевания новорожденного.

Резус-положительный ребенок у резус-отрицательной женщины становится причиной развития резус-конфликта.

При такой патологии происходит разрушение эритроцитов будущего ребенка антирезусными телами материнского организма. Попадая в женский организм, красные кровяные тельца плода оказывают стимулирующее действие на иммунную систему матери, и результатом этого становится производство антител к ребенку.

Полезное видео — гемолитические анемии.

Образование в материнском организме таких приводит к агглютинационному тромбозу капилляров и ишемическому некрозу плодных тканей. В результате гемолиза эритроцитов и распада гемоглобина наблюдается образование токсического непрямого в организме плода. Резкое снижение содержания эритроцитов у плода по причине их гемолиз приводит к развитию у ребенка такого заболевания, как анемия.

Низкий уровень и высокая концентрация билирубина значительно осложняют течение болезни. Во время беременности диагностируется множество таких осложнений как:

угроза выкидыша
развитие кровотечения
гестозы
малокровие
преждевременная родовая деятельность

Антирезусные тела защищают мать, но в то же время представляют серьезную угрозу для развивающегося плода. Благодаря проведению пробы Кумбса удается вовремя диагностировать такое патологическое состояние женского организма и назначить своевременное лечение. Кроме этого, такой анализ помогает выявлять различные заболевания крови, прогрессирование которых могут привести к смерти пациента.

Из множества существующих антигенов в медицинской практике наибольшее значение уделяется трем типам агглютиногенов крови. Одним из них является тип ответственный за проявление резус-фактора: если он присутствует на мембране эритроцита, диагностируют Rh+ группу крови, если отсутствует - Rh-. Если в состав резус-отрицательной крови попадают эритроциты с агглютиногенами Rh+, организм запускает реакцию иммунного ответа и начинает вырабатывать антитела к этому антигену, что становится причиной патологических состояний.

СПРАВКА! Резус-фактор — сложная многокомпонентная система из нескольких десятков антигенов. Наиболее часто встречаемые из них — агглютиногены типа D (85% случаев), а также E и C.

Пробу Кумбса проводят только при наличии прямых показаний. Общий список причин для назначения пробы Кумбса:

планирование и ведение беременности (родители имеют разный Rh);
донорство и подготовка к переливанию крови (несовпадение крови по Rh не менее губительно, чем несовпадение по системе АВ0);
планируемое хирургическое вмешательство (на случай восполнения кровопотери с помощью переливания крови);
диагностика гемолитических болезней.

Более конкретные показания зависит от типа проводимого исследования.

Прямая проба Кумбса

Прямой тест позволяет обнаружить антитела на поверхности эритроцитов. Это необходимо для диагностики уже имеющихся гемолитических патологий :

аутоиммунных (эритроциты и гемоглобин разрушаются в результате атаки антител собственного организма);
медикаментозных (патологический процесс запускает прием некоторых лекарственных препаратов типа хинидина или прокаинамида);
посттрансфузионных (при несовпадении группы крови при переливании), а также в виде резус-конфликта при беременности (эритробластоз новорожденных).

СПРАВКА! Гемолитическая анемия - заболевание, связанное с преждевременным разрушением эритроцитов в результате гемолиза, что приводит к недостаточному насыщению крови кислородом и гипоксии головного мозга и/или внутренних органов.

Гемолиз кровяных элементов наблюдается при онкологических, инфекционных, ревматических заболеваниях, поэтому прямая проба Кумбса может использоваться как дополнительное средство диагностики патологического состояния. При этом стоит помнить: отрицательное значение анализа не исключает вероятность гемолиза, а является поводом для дополнительного обследования.

Непрямая проба Кумбса

Непрямая проба чаще применяется для предотвращения патологических ситуаций. Она помогает выявить антитела в плазме крови, что необходимо для оценки совместимости при переливании и диагностики рисков резус-конфликта во время беременности.

Более 80% людей имеют положительный резус-фактор (Rh+), соответственно, чуть менее 20% являются резус-отрицательными. Если у Rh- матери развивается Rh+ ребенок, ее организм начинает вырабатывать антитела, атакующие эритроциты плода, провоцируя гемолиз.

С учетом того, что процент “разнорезусных” браков достигает 12-15%, риск гемолитической болезни новорожденных должен быть велик, но в реальности лишь в 1 из 25 подобных случаев у женщин наблюдается явление сенсибилизации (на 200 успешных родов 1 пример гемолитической патологии). Частично это обусловлено тем, что первый резус-положительный ребенок обычно не вызывает открытой агрессии организма матери; подавляющее количество случаев приходится на второго и последующих детей. Действует тот же принцип, что и при обычной сенсибилизации к тому или иному аллергену.

При первом контакте реакции не происходит. Организм только знакомится с новым для него антигеном, вырабатывая антитела класса IgМ, которые отвечают за быстрый иммунный ответ, но редко проникают через плацентарный барьер в кровь ребенка. Все патологические реакции проявляются при повторной “встрече”, когда в организме начинают вырабатываться антитела класса IgG, легко проникающие в кровоток плода, запуская процесс гемолиза.

Непрямая проба Кумбса при беременности позволяет обнаружить наличие антител в организме матери и вовремя выявить начальную стадию сенсибилизации. Положительный ответ, требует постановки на учет с ежемесячным исследованием титра антител и обязательной госпитализацией за 3-4 недели до родов.

СПРАВКА! Несовместимость по резус-фактору на состоянии матери никак не сказывается, гемолитическая болезнь развивается только у ребенка. В тяжелых случаях и при отсутствии своевременной реакции плод может погибнуть еще в утробе или сразу после рождения.

Подготовка к процедуре и ее проведение

Для диагностики используют венозную кровь. Специальная длительная подготовка к проведению пробы Кумбса не требуется. Старайтесь соблюдать стандартный набор правил перед взятием крови из вены на анализ:

за 3 суток откажитесь от алкоголя, медикаментозных препаратов (по возможности);
последний прием пищи планируйте на позже, чем за 8 часов до взятия крови на анализ;
за 1 час откажитесь от курения, физических, умственных и эмоциональных нагрузок;
перед процедурой выпейте стакан чистой негазированной воды.

Метод исследования основан на реакции гемагглютинации.

При проведении прямой пробы на образец крови воздействуют заранее заготовленной антиглобулиновой сывороткой с известными показателями, выдерживают смесь некоторое время и проверяют на предмет агглютинатов, которые образуются при наличии на эритроцитах антител. Уровень содержания агглютинатов диагностируют с помощью агглютинирующего титра.

Непрямая проба Кумбса имеет сходную методику, но более сложную последовательность действий. В отделенную сыворотку крови вводят антигенные эритроциты (с резус-фактором) и только после этих манипуляций добавляют антиглобулиновую сыворотку для диагностики и титра агглютинатов.

Результаты исследования

В норме и прямая, и непрямая проба Кумбса должны давать отрицательный результат:

отрицательная прямая проба свидетельствует о том, что специфические антитела к резус-фактору, связанные с эритроцитами, в крови отсутствуют и не могут являться причиной гемолиза
отрицательная непрямая проба показывает, что свободные антитела к резус-фактору в плазме крови также отсутствуют; факт свидетельствует о совместимости крови донора с кровью реципиента (или крови матери и ребенка) по резус-фактору.

Положительная проба Кумбса говорит о факте резус-сенсибилизации организма, что является главной причиной резус-конфликта в случае переливания крови или при вынашивании ребенка с иным резус-статусом. В этом случае результаты сохраняются неизменными в течение 3-х месяцев (срок жизни эритроцитов). Если причиной стала аутоиммунная гемолитическая анемия, то положительная проба может преследовать пациента на протяжении нескольких лет (в ряде случаев - всю жизнь).

СПРАВКА! Антиглобулиновый тест отличается высокой чувствительностью, но имеет малую информативность. Он не регистрирует активность гемолитического процесса, не определяет тип антитела и не в состоянии выявить причину патологии. Для получения более полной картины, лечащий врач обязательно назначает дополнительные исследования (микроскопию крови, общий и биохимический анализ, ревмопробы, СОЭ, уровень железа и ферритина).

Степень сенсибилизации может иметь качественное выражение (от «+» до «++++») или количественное - в виде титра:

1:2 - низкое значение, не представляет опасности;
1:4 - 1:8 - начало развития иммунологической реакции; не представляет опасности, но требует постоянного контроля;
1:16 -1:1024 - яркая форма сенсибилизации, следует незамедлительно принять меры.

Причиной положительной пробы могут стать:

переливание нетипированной крови (или с ошибкой типирования), когда резус-фактор донора и реципиента не совпадают;
резус-конфликт при беременности (если состав антигенов крови у отца и матери не совпадают);
аутоиммунная гемолитическая анемия - как врожденная (первичная), так и вторичная, которая является следствием некоторых болезней (синдрома Эванса, инфекционной пневмонии, сифилиса, холодовой гемоглобинурии, лимфомы);
медикаментозная гемолитическая реакция.

Ни одна из вышеперечисленных проблем не может быть решена пациентом без врачебной помощи. Во всех случаях потребуется срочная консультация, постановка на учет или экстренная госпитализация.

ВНИМАНИЕ! В редких случаях возможна ложноположительная проба Кумбса. Причиной этого могут стать частые переливания крови, а также ряд заболеваний: ревматоидные артриты, красная волчанка, саркоидозы. Также это явление может наблюдаться после удаления селезенки, а также при нарушении хода реакции (частые встряхивания содержимого, наличие загрязняющих примесей).

Принцип антиглобулинового . Антиэритроцитные антитела неполного типа и молекулы комплемента (С), находящиеся на поверхности эритроцитов выявимы - прямой тест - их агглютинацией в контакте с животной сывороткой, содержащей антитела на человеческий антиглобулин (антиглобулиновая сыворотка). Свободные в сыворотке неполные антитела выявляются - косвенный тест - их закреплением на смеси нормальных эритроцитов группы 0, все антигены которых принадлежат известной резус-системе, далее агглютинируемые под воздействием антиглобулиновой сыворотки.

Материалы, реагенты антиглобулинового теста Кумбса : пробирки на 10/100 мл; градуированные пипетки на 1, 2 мл; пастеровские пипетки; штативы; предметные нешлифованные стекла; 8,5‰ раствор NaCl; эритроциты. Эритроциты больного, равно как и принадлежащие к группе 0 получим из свежеотобранной крови на противосвертывающем веществе (раствор ЭДТА).

Эритроциты группы 0 отобрать с таким расчетом, чтобы они исходили от лиц в норме и содержали все антигены резус-системы . Их можно сохранять до 7 дней в аутологической плазме, при температуре + 4°С. В случае отсутствия эритроцитов группы 0, известной антигенной мозаики, можно использовать смесь эритроцитов группы 0, резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.

Сыворотка больного должна быть свежеотобранной.

Антиглобулиновая сыворотка производится институтом им. д-ра И. Кантакузино, выпускается в лиофилизированном виде в содержащих 1 мл ампулах. После растворения сыворотку хранить при температуре -20°С.

Техника антиглобулинового теста Кумбса :
а) Прямой тест Кумбса : эритроциты больного промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl.
На несколько предметных стекол нанести по крупной капле из разведений антиглобулиновой сыворотки, а рядом - по маленькой капле из осадка эритроцитов больного; перемешать капли углом стекла. Приготовленный материал оставить на столе 5 мин., затем исследовать на наличие агглютинатов. В случае положительного результата определить максимальный агглютинирующий титр.

б) Косвенный тест Кумбса : эритроциты группы 0, резусположительные и резус-отрицательные промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl и подвергнуть воздействию сыворотки больного из расчета 2 капли эритроцитов на 8-10 капель сыворотки, затем, в течение 60 мин., провести инкубацию при температуре 37°С. После этого снова трижды промыть эритроциты и воздействовать на них антиглобулиновой сывороткой, по указаниям для прямого теста Кумбса.

Когда речь идет о холодовых активных антителах сенсибилизацию эритроцитов группы 0 провести 60 мин. при температуре + 4°С.

Примечание : 1) Не проводить прямой тест Кумбса на эритроцитах, сохраненных один или несколько дней при температуре + 4°С или комнатной температуре, поскольку результаты могут оказаться ложноположительными за счет фиксации имеющихся в нормальной сыворотке непол ных, активных на холоде антител. 2) В случаях выраженной гиперпротеинемии промывать эритроциты 4-5 раз и проверить отсутствие сывороточных белков в последней промывной жидкости, с помощью сулфосалициловой кислоты.

Возможный остаток 2 мкг IgG/мл в эритроцитном осадке может нейтрализовать антиглобулиновую сыворотку . Тест Кумбса можно проводить и с помощью моноспецифических анти-IgG, -IgM, -IgA -С3 и -С4 сывороток в целях уточнения вида, находящихся на поверхности эритроцитов глуболин, например, у страдающих аутоиммунной гемолитической анемией.

Гемолитические анемии , вызванные аутоиммунными телами, которые направлены против собственных эритроцитов, точно не выяснены. Однако предполагается, что какие-то факторы (например, вирус, ненормальный белок) так изменяют эритроциты, что организм воспринимает их уже «как нечто чуждое» и вступает с ними в борьбу с помощью антител. По другой теории, направленные против эритроцитов антитела возникают почти случайно в процессе образования ненормальных белковых тел плазмы при некоторых болезнях. Такие белковые тела, точно так же «случайно», могут дать реакции, которые можно использовать для постановки диагноза (например, вирусная пневмония, как известно, дает положительную реакцию Вассермана, положительную реакцию Пауль - Буннеля и реакцию холодовой агглютинации).

Имеются два главных типа аутоантител при гемолитических анемиях, а именно: тепловые антитела (реагируют при 37°) и холодовые антитела (реактивная способность которых усиливается по мере приближения температуры к нулю). Тепловые антитела встречаются чаще Холодовых. Dacie нашел, что тепловые гемолизины встречаются в 2 раза чаще, чем холодовые. Гемолизины и агглютинины не являются принципиально различными антителами: они различаются только характером их действия. Агглютинины агглютинируют эритроциты, а гемолизины делают их более подверженными сложному процессу гемолиза (комплемент!). Аутоантитела, фиксируясь на эритроцитах, образуют комплекс эритроцит - глобин. Этот комплекс выявляется с помощью антиглобиновой пробы Кумбса.

Проба Кумбса проводится с сывороткой Кумбса, для приготовления которой сенсибилизируют кролика сывороткой человека, против которой в сыворотке кролика образуются антитела. При действии такой сенсибилизированной сыворотки на эритроциты человека наступает их агглютинация, если рецепторы эритроцитов заняты блокирующими антителами. Так как эти блокирующие антитела происходят из сыворотки человека, они дают агглютинацию с сывороткой кролика, сенсибилизированной к плазме человека и содержащей преципитины. Эта реакция названа пробой Кумбса; для гемолитической анемии на почве аутоиммунных тел (Lo tit) она почти специфична (подробности см. у Maier).

В общем при гемолитических анемиях с первичным нарушением эритроцитов проба Кумбса отрицательна, а при приобретенных - положительна. Однако из этого правила имеются некоторые исключения: ложноположительная проба Кумбса найдена при кризах конституциональных гемолитических анемий, а в слабой степени - также иногда после спленэктомии, при ревматическом полиартрите, саркоидозе, после частых переливаний крови и при системной красной волчанке. Естественно, что при приобретенных гемолитических анемиях без образования аутоиммунных тел она отрицательна.

Гемолитические анемии , вызванные аутоиммунными телами, можно подразделить на:
а) острые, подострые и хронические формы, а также на
б) идиопатические с неизвестной этиологией и в) симптоматические [вирусная пневмония (только холодовые агглютинины), хронический лимфатический лейкоз, ретикулосаркома, лимфосаркома, системная красная волчанка (преимущественно тепловые, реже холодовые агглютинины), сифилис (холодовые агглютинины), опухоли яичников (Miescher с сотрудниками)).
в) симптоматические [вирусная пневмония (только холодовые агглютинины), хронический лимфатический лейкоз, ретикулосаркома, лимфосаркома, системная красная волчанка (преимущественно тепловые, реже холодовые агглютинины), сифилис (холодовые агглютинины), опухоли яичников (Miescher с сотрудниками)).

Клиника гемолитических анемий , развивающихся под действием аутоиммунных тел, очень разнообразна, и вряд ли поэтому можно нарисовать их общую клиническую картину. Поражаются лица всех возрастов и обоих полов равномерно. Все же идиопатические формы как будто чаще наблюдаются у женщин (Sacks и Workman).

Клиническая картина идиопатической формы изменяется в зависимости от тяжести заболевания. В хронических случаях начало постепенно, болезнь тянется многие годы с частыми обострениями. Тяжесть анемии различна в зависимости от степени гемолиза. Наблюдаются падения гемоглобина до 10%, в других случаях гемоглобин длительно удерживается на 50-60%. Интенсивность ретикулоцитоза и желтушной окраски кожи и сыворотки соответствует степени гемолиза. Билирубин в моче находят очень редко, так как он не проходит через почки, но гемоглобинурия наблюдается. Селезенка в хронических случаях чаще увеличена и может даже достигать очень значительных размеров, в других же случаях она еще прощупывается. Печень редко когда не увеличена.

В крови в большинстве случаев наблюдается макроцитоз, в острых стадиях также много микроцитов, редко отсутствуют нормобластоз и полихромазия, лейкоцитоз может достигать 30 000, тромбоциты в норме. В некоторых случаях, однако, имеется выраженная тромбоцитопения. Evans объясняет эти случаи одновременным наличием антител против тромбоцитов, так что налицо имеются одновременно гемолитическая анемия и тромбоцитопения на почве действия аутоиммунных тел- синдром Эванса (Evans). Осмотическая резистентность слегка понижена, но не в такой степени и не так постоянно, как при конституциональной шаровидноклеточной анемии. Проба на устойчивость к нагреванию (Hegglin- Maier) после 6 часов также может дать незначительный гемолиз (собственное наблюдение), но меньшей степени, чем лри анемии Маркиафава. В моче находят также гемосидерин (собственное наблюдение).

Тест Кумбса

Тест Кумбса – антиглобулиновая проба, направленная на выявление в резус-отрицательной крови неполных антиэритроцитарных антител к резус-фактору – специфическому белку, который находится на поверхности эритроцитов резус-положительной крови. Существует два вида данного теста: прямой – выявление антител на поверхности эритроцитов, непрямой – выявление антител в сыворотке крови. Прямая проба осуществляется при диагностике и мониторинге лечения заболеваний крови: гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденных и других. Непрямая проба выполняется для оценки совместимости крови донора и реципиента при переливании, а также для определения наличия и риска резус-конфликта при планировании и ведении беременности. Материалом для теста Кумбса является венозная кровь, исследование проводится методами на основе реакции агглютинации. В норме обе пробы дают отрицательный результат. Анализ выполняется в течение одного дня.

Тест Кумбса – клиническое исследование резус-отрицательной крови, направленное на обнаружение антител к резус-фактору. Проба используется для выявления риска развития резус-конфликта и гемолитических реакций. У каждого человека поверхность эритроцитов содержит определенный набор антигенов или агглютиногенов – соединений различной природы, по наличию или отсутствию которых судят о группе крови и резус-факторе. Существует множество видов антигенов, в медицинской практике наибольшее практическое значение имеют агглютиногены A и B, определяющие группу крови, и агглютиноген D – резус-фактор. При положительном резус-факторе на внешней мембране эритроцитов определяются антигены D, при отрицательном – нет.

Тест Кумбса, который также называют антиглобулиновой пробой, направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешении крови плода и беременной, при гемотрансфузиях, проведенных без предварительного типирования крови. Тест Кумбса существует в двух вариантах – прямой и непрямой. При выполнении прямого теста Кумбса выявляются антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов. Исследование используется для установления причины гемолитической реакции. Непрямой тест Кумбса направлен на выявление антиэритроцитарных антител в плазме крови. Он необходим для определения совместимости крови донора и реципиента или матери и плода, позволяет предупредить развитие резус-конфликта и последующего гемолиза эритроцитов.

Кровь для проведения обоих вариантов теста Кумбса берется из вены. Анализ выполняется методом агглютинации с использованием антиглобулиновой сыворотки. Результаты исследования находят применение в гематологии при выявлении причин гемолитических реакций, в хирургии и реаниматологии при проведении гемотрансфузий, в акушерстве и гинекологии при мониторинге беременностей у женщин с резус-отрицательной кровью.

Показания

Прямой тест Кумбса, выявляющий антитела, закрепленные на поверхности эритроцитов, назначается при гемолитических реакциях (разрушении эритроцитов) различного происхождения. Исследование показано при первичной аутоиммунной гемолитической анемии, посттрансфузионной гемолитической анемии, гемолитической болезни новорожденного, гемолизе эритроцитов, вызванном аутоиммунными, опухолевыми или инфекционными заболеваниями, а также приемом лекарственных средств, например, хинидина, метилдопы, прокаинамида. Непрямой тест Кумбса, определяющий антитела в плазме крови, используется для предупреждения развития резус-конфликта. Он показан пациентам при подготовке к гемотрансфузиям, а также беременным с отрицательным резус-фактором при условии, что будущий отец ребенка имеет положительный резус-фактор.

С целью определения резус-совместимости тест Кумбса не назначается пациентам с резус-положительной кровью. В этих случаях на поверхности эритроцитов уже имеются антигены, выработка антител не может быть спровоцирована гемотрансфузией или попаданием крови плода в кровоток беременной. Также исследование не показано беременным женщинам, если оба родителя имеют отрицательный резус-фактор – передающийся по наследству рецессивный признак. Ребенок в таких парах всегда имеет резус-отрицательную кровь, иммунологический конфликт с матерью невозможен. При гемолитических патологиях антиглобулиновая проба не используется с целью контроля успешности терапии, так как результаты не отражают активность процесса разрушения эритроцитов.

Ограничением теста Кумбса является трудоемкость процедуры исследования – для получения достоверных результатов необходимо соблюдение температурных и временных режимов, правил подготовки реагентов и биоматериала. К преимуществам теста Кумбса относится его высокая чувствительность. При гемолитической анемии результаты этого анализа остаются положительными, даже если показатели гемоглобина, билирубина и ретикулоцитов нормализуются.

Подготовка к анализу и забор материала

Материалом для выполнения теста Кумбса является венозная кровь. Специальных требований ко времени проведения процедуры забора крови и к подготовке пациента нет. Как и при любом исследовании рекомендуется выдержать перерыв после приема пищи не менее 4 часов, а в последние 30 минут отказаться от курения, физических нагрузок, избегать эмоционального напряжения. Также стоит заранее обсудить с врачом необходимость отмены принимаемых лекарств – некоторые препараты могут исказить результаты теста Кумбса. Кровь берут с помощью шприца из локтевой вены, реже из вены на тыльной стороне кисти. В течение нескольких часов материал доставляется в лабораторию.

При выполнении прямого теста Кумбса к сыворотке крови пациента добавляется антиглобулиновая сыворотка. Через некоторое время смесь исследуется на наличие агглютинатов – они образуются, если на эритроцитах есть антитела. При положительном результате определяется агглютинирующий титр. Непрямой тест Кумбса состоит из большего количества этапов. Сначала антитела, находящиеся в сыворотке, в ходе инкубации фиксируются на введенных эритроцитах. Затем к образцу добавляется антиглобулиновая сыворотка, через некоторое время определяется наличие и титр агглютинатов. Сроки выполнения анализа – 1 день.

Нормальные результаты

В норме результат прямой теста Кумбса отрицательный (-). Это означает, что в крови нет антител, связанных с эритроцитами, и они не могут быть причиной гемолиза. Нормальный результат непрямого теста Кумбса тоже отрицательный (-), то есть антитела к резус-фактору в плазме крови отсутствуют. При подготовке к гемотрансфузии для реципиента это означает совместимость с кровью донора, при мониторинге беременности – отсутствие резус-сенсибилизации матери, низкий риск развития иммунологического конфликта. Физиологические факторы, такие как особенности питания или физической активности, не могут повлиять на результат пробы. Поэтому если результат положительный, необходима консультация врача.

Диагностическое значение анализа

Положительный результат теста Кумбса выражается качественно, от (+) до (++++), либо количественно, титрами от 1:16 до 1:256. Определение концентрации антител на эритроцитах и в сыворотке крови выполняется в обоих видах пробы. При положительном результате прямого теста Кумбса на внешней мембране эритроцитов выявляются антитела, которые приводят к разрушению этих клеток крови. Причиной может стать переливание крови без предварительного типирования – посттрансфузионная гемолитическая реакция, а также эритробластоз новорожденного, гемолитическая реакция вследствие применения лекарств, первичная или вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия. Вторичное разрушение эритроцитов может быть вызвано системной красной волчанкой, синдромом Эванса, макроглобулинемией Вальденстрема, пароксизмальной холодовой гемоглобинурией, хроническим лимфолейкозом, лимфомой, инфекционным мононуклеозом, сифилисом, микоплазменной пневмонией.

Положительный результат непрямого теста Кумбса указывает на наличие в плазме антител к резус-фактору. На практике это означает, что произошла резус-сенсибилизация, существует возможность развития резус-конфликта после вливания крови донора, во время беременности. Для предупреждения осложнений беременности женщины с положительным результатом теста Кумбса ставятся на специальный учет.

Лечение отклонений от нормы

Тест Кумбса относится к изосерологическим исследованиям. Его результаты позволяют выявить гемолитическую реакцию, а также определить совместимость крови донора и реципиента, матери и плода, чтобы предупредить развитие резус-конфликта. Если результат пробы положительный, то необходимо обратиться за консультацией к лечащему врачу – акушеру-гинекологу, гематологу, хирургу.