ما هو أساس عمل تفاعل التراص. تفاعل التراص (RA) ، آلية وطرق الإعداد. المكونات وكيفية الحصول عليها. استخدام التهاب المفاصل الروماتويدي في تشخيص الأمراض المعدية. المجهر الإلكتروني المناعي

تفاعل التراص

التراص (اللات. التلصيق- الإلتصاق (الإلتصاق) - الإلتصاق (الإتصال) بجزيئات الجسم الحاملة للمستضد (الخلايا الكاملة ، جسيمات اللاتكس ، إلخ) بجزيئات من الأجسام المضادة المحددة في وجود الإلكتروليتات ، والتي تنتهي بتكوين قشور أو رواسب (تراص) مرئية للـ بالعين المجردة. تعتمد طبيعة الرواسب على طبيعة المستضد: البكتيريا السوطية تعطي رواسب ذات قشرة كبيرة ، سوطية وعديمة الكبسولة - حبيبات دقيقة ، كبسولة - خيطية. التمييز بين التراص المباشر ، حيث يشتمل التفاعل مع أجسام مضادة معينة بشكل مباشر على مستضدات خاصة لبكتيريا أو أي خلية أخرى ، مثل كريات الدم الحمراء ؛ وغير مباشر ، أو سلبي ، حيث تكون الخلايا البكتيرية أو كريات الدم الحمراء أو جزيئات اللاتكس حاملة ليس من تلقاء نفسها ، ولكن لمولدات المضادات الأجنبية (أو الأجسام المضادة) التي يتم امتصاصها عليها لاكتشاف الأجسام المضادة (أو المستضدات) الخاصة بها. يتضمن تفاعل التراص بشكل أساسي أجسامًا مضادة تنتمي إلى فئتي IgG و IgM. تستمر على مرحلتين: أولاً ، هناك تفاعل محدد للمركز النشط للأجسام المضادة مع محدد المستضد ، ويمكن أن تحدث هذه المرحلة في غياب الإلكتروليتات ولا يصاحبها تغيرات مرئية في نظام التفاعل. تتطلب المرحلة الثانية ، وهي تكوين التراص ، وجود إلكتروليتات تقلل الشحنة الكهربائية لمجمعات المستضد + الأجسام المضادة وتسريع عملية لصقها. تنتهي هذه المرحلة بتكوين تراص.

توضع تفاعلات التراص إما على الزجاج أو على ألواح من الورق المقوى الملساء ، أو في أنابيب تراص معقمة. عادة ما تستخدم تفاعلات التراص (المباشرة والسلبية) على الزجاج كطريقة متسارعة لاكتشاف أجسام مضادة معينة في مصل المريض (على سبيل المثال ، في داء البروسيلات) أو للتحديد المصلي للعامل الممرض. في الحالة الأخيرة ، عادةً ما يتم استخدام الأمصال التشخيصية النقية (الممتزجة) جيدًا ، والتي تحتوي فقط على الأجسام المضادة أحادية المستقبل أو مجموعة مستضدات مختلفة. الميزة غير المشكوك فيها لتفاعل التراص على الزجاج هي بساطة تركيبته وحقيقة أنه يستغرق عدة دقائق أو حتى ثوانٍ ، حيث يتم استخدام كلا المكونين فيه في شكل مركّز. ومع ذلك ، فإن لها قيمة نوعية فقط وهي أقل حساسية من أنبوب الاختبار. يعطي اختبار التراص الموسع في أنابيب الاختبار نتائج أكثر دقة ، لأنه يسمح لك بتحديد المحتوى الكمي للأجسام المضادة في المصل (تعيين عيارها) ، وإذا لزم الأمر ، تسجيل حقيقة الزيادة في عيار الجسم المضاد ، والذي يحتوي على قيمة التشخيص. لإعداد التفاعل ، يتم إدخال مصل مخفف بمحلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.85٪ بطريقة معينة وحجم متساوٍ (عادةً 0.5 مل) من معلق تشخيص معياري (أو مزرعة اختبار) تحتوي على مليار بكتيريا في 1 مل في التراص. أنابيب. يتم حساب نتائج تفاعل التراص مبدئيًا بعد ساعتين من حضانة الأنابيب عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وأخيراً بعد 20-24 ساعة وفقًا لعلامتين: وجود وحجم الراسب ودرجة شفافية المادة الطافية. يتم إجراء التقييم وفقًا للنظام الرباعي. يكون التفاعل بالضرورة مصحوبًا بالتحكم في المصل والمستضد. في تلك الحالات التي يتم فيها استخدام اختبار التراص المفصل في أنبوب اختبار للتحديد المصلي للعامل الممرض ، يكون له قيمة تشخيصية إذا تم تقييم التفاعل على أنه إيجابي عندما يتم تخفيف المصل التشخيصي بنصف عياره على الأقل.

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه عند خلط محاليل المستضدات والأجسام المضادة المتماثلة ، لا يتم دائمًا ملاحظة المظاهر المرئية لتفاعل التراص. يتكون الراسب فقط عند نسب مثلى معينة لكلا مكوني التفاعل. خارج هذه الحدود ، مع وجود فائض كبير من المستضد أو الأجسام المضادة ، لا يلاحظ أي تفاعل. هذه الظاهرة تسمى "ظاهرة prozone". لوحظ في كل من تفاعل التراص وفي تفاعل الهطول. يفسر ظهور prozone في التفاعلات المناعية بحقيقة أن المستضدات المشاركة فيها ، كقاعدة عامة ، متعددة التحديدات ، والجزيئات الأجسام المضادة IgGمركزين نشطين. مع وجود فائض من الأجسام المضادة ، يتم تغطية سطح كل جسيم مستضد بجزيئات الأجسام المضادة بحيث لا تبقى مجموعات محددة حرة ، لذلك لا يمكن للمركز النشط الثاني غير المرتبط بالأجسام المضادة التفاعل مع جسيم مستضد آخر وربطها ببعضها البعض. يتم أيضًا منع تكوين تراص مرئي أو راسب مع وجود فائض من مولد الضد ، عندما لا يكون هناك موقع نشط واحد مجاني للأجسام المضادة ، وبالتالي لا يمكن تضخم معقدات المستضد + الجسم المضاد + المستضد.

في علم الأحياء الدقيقة

"تفاعل التراص وأنواعه (RA)"

يخطط:

1. مقدمة ……………………………………………………………………………………………… .. 3

2. RA على الزجاج …………………………………………………………………………………………… .4

3. أنبوب اختبار PA ……………………………………………………………………………………… .5

4. الأدب المستخدم …………………………………………………………………………… .. 7

1 المقدمة.

تفاعل المستضد الميكروبي والأجسام المضادة محدد بدقة ويتم توجيهه في جسم الحيوان لتحييد العامل الممرض وسمومه. تفاعل المستضد والأجسام المضادة في المختبر في ظل ظروف معينة مصحوب بظواهر مرئية (تراص ، ترسيب ، تحلل مناعي) ، مما يسمح باستخدام تفاعلات AG-AT ، والتي تسمى مصلية (من مصل مصل لاتيني) ، لأغراض عملية. تنتج المعامل الحيوية مستضدات وأمصال مناعية (أجسام مضادة) ذات اتجاه محدد معروف (تشخيصي). بمساعدة هذه الأمصال في التفاعلات المصلية ، من الممكن تحديد كائن دقيق غير معروف أو ، باستخدام مستضد معروف ، للكشف عن الأجسام المضادة في الجسم التي يتم تصنيعها استجابة لإدخال العامل الممرض ، وبالتالي إجراء التشخيص (التشخيص المصلي) . بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام التفاعلات المصلية لتقييم شدة الاستجابة المناعية بعد التطعيم أو الإصابة بمرض معدي.

تعتمد تفاعلات التراص ، مثل التراص غير المباشر و Coombs ، على التفاعل في المختبر بين مستضدات الجسم والأجسام المضادة وقدرة المجمعات الناتجة على الترسيب. كمستضدات في الجسم ، يتم استخدام الخلايا البكتيرية أو المستضدات القابلة للذوبان المستخرجة من الكائنات الدقيقة والممتزة على كريات الدم الناقلة: كريات الدم الحمراء وجزيئات اللاتكس وما إلى ذلك.

تتفاعل المحددات المستضدية لمولدات المضادات الجسدية على وجه التحديد مع الأجسام المضادة المتجانسة (مرحلة محددة وغير مرئية من التفاعل) ، ثم تتشكل مجمعات الأجسام المضادة للمستضد كبيرة ، ومرئية لتكتلات العين المجردة التي تترسب - تتراكم (مرحلة غير محددة ومرئية من التفاعل) . في الأشكال غير الجلدية من الميكروبات (البروسيلا) ، تتشكل المواد التراصية الحبيبية ، في سوط (Escherichia ، Salmonella) - قطن كبير ، يستقر في قاع أنبوب الاختبار على شكل مظلة مقلوبة ويمكن كسرها بسهولة عند رجها . تتفاعل المستضدات والأجسام المضادة فقط في وجود إلكتروليت (في محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.8٪). يتأثر مسار التفاعل بتركيز الملح في المنحل بالكهرباء ، وعدد الخلايا الميكروبية في المعلق ، وتركيز المصل ، ودرجة الحموضة ، ودرجة الحرارة ، وعوامل أخرى.

تفاعل التراص (ra).

التمييز بين التراص النوعي ، يعتمد السرب على تفاعل المستضد معجسم مضاد متماثل , الموجود في جسم الحيوان ، أدخل كروم هذا المستضد (التراص المناعي) ؛ غير محدد (كيميائي) ، ناشئ عن تغيرات في درجة الحموضة في البيئة ، وتركيز الشوارد ؛ يتم ملاحظة العفوية إلى ruyu عندما يتم تعليق البكتيريا (الموجودة في شكل R) في محلول ملحي وعند تسخينها ، وهو ما يرتبط بتغير في الحالة الغروانية للخلية البكتيرية. مولد المضاد , المتورط في التهاب المفاصل الروماتويدي يسمى agglutinogen ، يسمى الجسم المضاد agglutinin ، ويطلق على المادة المترسبة الناتجة اسم agglutinate. في تكوين التراص ، تكون النسبة الكمية للمستضد والأجسام المضادة (الظاهرة المثلى) مهمة. مع وجود فائض أو نقص في الأجسام المضادة ، فإن A.

تفاعل التراص (RA) هو أحد التفاعلات المناعية الأولى المستخدمة في الممارسة الميكروبيولوجية. لأول مرة (1895) استخدم F.Vidal RA لتشخيص حمى التيفود. في وقت لاحق (1897) ، استخدم أ. رايت نفس التفاعل لتشخيص داء البروسيلات في البشر. وجد التهاب المفاصل الروماتويدي أيضًا تطبيقًا في تشخيص التصلب في الدجاج ، وداء البريميات ، والإجهاض المعدي للأفراس ، وكذلك في تصنيف الثقافات غير المعروفة للميكروبات وفقًا لمصل التراص المعروف. التهاب المفاصل الروماتويدي حساس للغاية ؛ يمكنه الكشف عن 0.01 ميكروجرام من نيتروجين بروتين الجسم المضاد في 1 مل.

تم تطوير العديد من المتغيرات لتفاعل التراص ، تختلف في التنفيذ المنهجي والغرض من الدراسة.

2. رع على الزجاج.

في هذا النوع من التهاب المفاصل الروماتويدي ، يمكن اختبار كل من المصل والمستضد ، ولكن غالبًا ما يستخدم هذا المتغير لتحديد الكائنات الحية الدقيقة.

1. لتحديد الكائن الدقيق (m / o) ، يتم وضع قطرة من مصل التراص المعروف ، مثل داء السلمونيلات ، وقطرة من محلول ملحي (تحكم) بشكل منفصل على شريحة زجاجية منزوعة الدهن. ثم ، باستخدام حلقة جرثومية ، تؤخذ الكتلة البكتيرية للثقافة المدروسة من المستعمرة في طبق بتري أو من سطح MPA المائل في أنبوب اختبار ويتم تعليقها بشكل منفصل في مصل مناعي ومحلول ملحي فسيولوجي حتى يتم الحصول على معلق متجانس . تؤخذ النتيجة في الاعتبار بعد 2 ... 4 دقائق.

المحاسبة عن النتائج: يجب ألا يكون هناك تغيير في العينة الضابطة. مع التطابق المحدد للثقافة البكتيرية مع المصل المناعي ، تظهر رقائق التراص (نتيجة إيجابية) ، في غياب ظاهرة التراص ، استنتج أن الثقافة البكتيرية المدروسة لا تتوافق مع مصل المناعة.

2. سيتم النظر في الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم المدروس باستخدام مثال اختبار الورد البنغال المستخدم في التشخيص المصلي لمرض البروسيلا. يتم وضع 0.3 مل من مصل دم الحيوان المدروس و 0.03 مل من مستضد البروسيلا (خلايا البروسيلا الملطخة باللون الوردي البنغالي) على شريحة زجاجية. يتم خلط المكونات جيدًا عن طريق هز الزجاج وتؤخذ النتيجة في الاعتبار بعد 4 دقائق.

نتائج المحاسبة: مع رد فعل إيجابي ، تظهر رقائق وردية من التراص. يتم تصنيف التفاعل المصلي من هذا النوع على أنه نوعي ، حيث يمكن استخدامه للكشف عن الأجسام المضادة لمسببات الأمراض في مصل دم الحيوان ، ولكن من المستحيل تقييم محتواها الكمي.

تفاعل التراص (RA) هو التصاق وترسيب الميكروبات أو الخلايا الأخرى تحت تأثير الأجسام المضادة في وجود إلكتروليت. الراسب الناتج يسمى التراص.

يستخدم RA:

1. الكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض (التشخيص المصلي).

2. لتحديد نوع ومصل المستنبت النقي للكائنات الدقيقة المسببة للأمراض المعزولة من المريض (التنميط المصلي).

يستخدم تفاعل التراص لتحديد الأجسام المضادة في مصل الدم للمرضى ، على سبيل المثال ، حمى التيفود وحمى نظيرة التيفوئيد (تفاعل فيدال) ، الحمى المالطية (تفاعلات رايت ، هدلسون) ، التولاريميا ، داء البريميات وغيرها. أمراض معديةوكذلك تحديد العامل الممرض المعزول عن المريض (الالتهابات المعوية ، السعال الديكي ، إلخ). يستخدم RA لتحديد فصائل الدم وعامل Rh وما إلى ذلك.

يتطلب التفاعل المكونات التالية:

1. يجب أن يكون المستضد (agglutinogen) عضويًا ، أي أنه معلق للكائنات الحية الدقيقة الحية أو المقتولة (التشخيص م) أو كريات الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى. عادة ، يتم استخدام ثقافة يومية للكائنات الحية الدقيقة التي تزرع على مائل أجار. تغسل المزرعة بـ 3-4 مل من محلول متساوي التوتر ، وتنقل إلى أنبوب اختبار معقم ، ويتم تحديد الكثافة. يجب أن يكون المعلق متجانسًا ويحتوي على ما يصل إلى 3 مليارات خلية ميكروبية لكل 1 مل. استخدام معلق للميكروبات المقتولة - التشخيص - يسهل العمل (معدة في المصنع).

2. تم العثور على الأجسام المضادة (agglutinins) في مصل المريض (مع التشخيص المصلي) أو في مصل التراص (مع التنميط المصلي). يتم الحصول على الأمصال المتلصقة عن طريق تحصين الأرانب بالبكتيريا المقتولة.

تراص عياريسمى المصل أعلى تخفيف له ، حيث لا يتفاعل مع المستضد المقابل في ظل ظروف تجريبية معينة.

يمكن أن تكون الأمصال الملتصقة أصلية (غير ممتصة) وممتزة. لا تتفاعل الأمصال الأصلية في التخفيفات الصغيرة فقط مع نوع الكائنات الحية الدقيقة التي تم تحصين الحيوان بها للحصول على مصل الدم ، ولكن أيضًا مع الأنواع ذات الصلة من الكائنات الحية الدقيقة ، لأنها تحتوي على أجسام مضادة جماعية (أجسام مضادة للكائنات الدقيقة التي لها مستضدات مشتركة). يتم استخدام الأمصال الأصلية لتفاعل تراص ممتد (مع التشخيص المصلي) ، والذي يأخذ في الاعتبار ليس فقط وجود التفاعل ، ولكن أيضًا ديناميكيات الزيادة في عيار الجسم المضاد.

إذا تم استخلاص (كثف) أجسام مضادة من مصل أصلي عن طريق التفاعل مع البكتيريا ذات الصلة التي تحتوي على مستضدات جماعية ، يتم الحصول على الأمصال الممتزقة. الأمصال الممتزة يمكن أن تكون أحادية المستقبل (أو خاصة بنوع معين) ، تحتوي على أجسام مضادة لمستقبل واحد فقط للمستضد. تتكون الأمصال المتعددة التكافؤ من خليط من عدة أمصال كثيفة أو غير ممتزة. تستخدم الأمصال الممتزّة لتفاعل التراص على الزجاج.

عندما يتم تحصين الحيوانات بالبكتيريا المتحركة باستخدام مستضد H ، يتم الحصول على مصل H-agglutating يحتوي على أجسام مضادة H (على سبيل المثال ، مصل H-agglutating أحادي مستقبلات السالمونيلا). ينتج تمنيع مستضد O- مصل O- تراص يحتوي على أجسام مضادة لـ O (على سبيل المثال ، مجموعة السالمونيلا التي تمتص مصل O المتراصة ، مصل O-agglutating المضاد للكوليرا). ينتج التحصين مع مستضدات H و O الأمصال مع الأجسام المضادة H و O.

علاوة على ذلك ، تعطي O-agglutinins تراصًا دقيق الحبيبات ، وتعطي H-agglutinins راسبًا خشنًا.

3. المنحل بالكهرباء - محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪ محضر بالماء المقطر).

هناك طريقتان رئيسيتان لإعداد تفاعل التراص: التفاعل على الزجاج (يسمى أحيانًا إرشادي أو رقائقي) والتفاعل الموسع (في أنابيب الاختبار)

بيان تفاعل التراص على الزجاج. يتم وضع قطرتين من المصل وقطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر على شريحة زجاجية خالية من الدهون. يؤخذ مصل التراص التشخيصي في تخفيف واحد ، والذي ، اعتمادًا على عياره ، يكون 1:10 أو 1:25 أو 1:50 أو 1: 100. في إحدى قطرات المصل وقطرة من محلول متساوي التوتر ، يتم إدخال ثقافة الكائن الدقيق قيد الدراسة بحلقة وخلطها جيدًا. قطرة من كلوريد الصوديوم مع الكائنات الحية الدقيقة هي عنصر تحكم في المستضد ، وقطرة من المصل بدون الكائنات الحية الدقيقة هي عنصر تحكم في المصل. لا تنقل الثقافة من قطرة المصل إلى قطرة كلوريد الصوديوم. يستمر التفاعل عند درجة حرارة الغرفة لمدة 1-3 دقائق. إذا ظل التحكم في المصل واضحًا ، لوحظ تعكر منتظم في التحكم في المستضد ، وتظهر رقائق التراص في القطرة حيث يتم خلط المزرعة مع المصل ، فإن النتيجة تعتبر إيجابية. إذا كان هناك تعكر منتظم في قطرة مع المصل والمستضد ، فهذه نتيجة سلبية. يكون رد الفعل أكثر وضوحًا على خلفية مظلمة.

مصل

1. مراقبة المستضد

2. مراقبة المصل

ردود الفعل المناعية. تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد والتفاعلات مع المكونات الموصوفة. يستخدم لتحديد الكائنات الحية الدقيقة ولأغراض التشخيص أمراض معدية.

تستخدم التفاعلات المناعية في الدراسات التشخيصية والمناعة في المرضى و الأشخاص الأصحاء. لهذا الغرض ، تطبيق الطرق المصلية(من اللات. مصل - مصل و الشعارات - العقيدة) ، أي طرق دراسة الأجسام المضادة والمستضدات باستخدام تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد المحددة في مصل الدم والسوائل الأخرى ، وكذلك أنسجة الجسم.

إن اكتشاف الأجسام المضادة ضد مستضدات العامل الممرض في مصل دم المريض يجعل من الممكن تشخيص المرض. تُستخدم الدراسات المصلية أيضًا لتحديد المستضدات الميكروبية ، والمواد النشطة بيولوجيًا المختلفة ، ومجموعات الدم ، ومستضدات الأنسجة والأورام ، والمجمعات المناعية ، ومستقبلات الخلايا ، إلخ.

عندما يتم عزل ميكروب من مريض ، يتم التعرف على العامل الممرض من خلال دراسة خصائصه المستضدية باستخدام الأمصال التشخيصية المناعية ، أي مصل الدم للحيوانات المفرطة المناعة التي تحتوي على أجسام مضادة محددة. هذا ما يسمى تحديد المصليالكائنات الدقيقة.

تستخدم على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة والمناعة ، التراص ، الترسيب ، تفاعلات المعادلة ، التفاعلات التي تنطوي على مكمل ، باستخدام الأجسام المضادة والمضادات الموصوفة (المناعية الإشعاعية ، الإنزيم المناعي ، طرق التألق المناعي). تختلف التفاعلات المدرجة في التأثير المسجل وتقنية الإعداد ، ومع ذلك ، فكلها أساسية. عربات على تفاعل تفاعل مستضد مع جسم مضاد وتستخدم للكشف عن كل من الأجسام المضادة والمستضدات. تتميز تفاعلات المناعة بحساسية وخصوصية عالية.

فيما يلي مبادئ ومخططات التفاعلات الرئيسية للتشخيص المناعي. تم تقديم تقنية مفصلة لإعداد ردود الفعل في. إرشادات عملية للتشخيص المناعي.

تفاعل التراص - RA(من اللات. aggluti- ناتيو- الترابط) - تفاعل بسيط تقوم فيه الأجسام المضادة بربط مستضدات الجسم (البكتيريا ، كريات الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى ، الجسيمات غير القابلة للذوبان مع المستضدات الممتصة عليها ، وكذلك التكتلات الجزيئية). يحدث في وجود الشوارد ، على سبيل المثال ، عند إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يتم استخدام أنواع مختلفة من تفاعل التراص: ممتد ، تقريبي ، غير مباشر ، إلخ. يتجلى تفاعل التراص من خلال تكوين رقائق أو رواسب

يستخدم RA من أجل:

تحديد الأجسام المضادة في مصل الدم للمرضى ، على سبيل المثال ، داء البروسيلات (تفاعلات رايت وهيدلسون) وحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال) وأمراض معدية أخرى ؛

تحديد العامل الممرض المعزول عن المريض.

تحديد فصائل الدم باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد خيفيات كرات الدم الحمراء.

لتحديد الأجسام المضادة للمريض وضعتفاعل التراص الممتد:إضافة إلى تخفيف مصل دم المريض التشخيص(تعليق الميكروبات المقتولة) وبعد عدة ساعات من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، لوحظ أعلى تخفيف في المصل (عيار مصل) ، حيث حدث التراص ، أي تشكل راسب.

تعتمد طبيعة ومعدل التراص على نوع المستضد والأجسام المضادة. مثال على ذلك هو تفاعل التشخيص (مستضدات O و R) مع أجسام مضادة محددة. تفاعل التراص مع O- التشخيص(البكتيريا تقتل بالحرارة ، وتحتفظ بالحرارة يا مستضد)يحدث في شكل تراص دقيق الحبيبات. يكون تفاعل التراص مع H-Diagnosticum (البكتيريا التي تقتلها الفورمالين ، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي القابل للحرارة) خشن الحبيبات ويستمر بشكل أسرع.

إذا كان من الضروري تحديد العامل الممرض المعزول عن المريض ، ضع توجيه تفاعل التراص ،باستخدام الأجسام المضادة التشخيصية (مصل التراص) ، أي يتم إجراء التنميط المصلي للعامل الممرض. يتم إجراء تفاعل تقريبي على شريحة زجاجية. إلى قطرة من مصل التراص التشخيصي بتخفيف 1:10 أو 1:20 أضف ثقافة نقية من العامل الممرض المعزول عن المريض. يتم وضع عنصر تحكم في مكان قريب: بدلاً من المصل ، يتم وضع قطرة من محلول كلوريد الصوديوم. عندما تظهر الرواسب النضرة في قطرة مع مصل وميكروبات ، فإنهم يضعون تفاعل تراص واسع النطاقفي أنابيب الاختبار مع تخفيفات متزايدة من مصل التراص ، والتي تضاف إليها 2-3 قطرات من تعليق العامل الممرض. يؤخذ التراص في الاعتبار من خلال كمية الرواسب ودرجة توضيح السائل. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا لوحظ التراص في تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي. في الوقت نفسه ، يتم أخذ الضوابط في الاعتبار: يجب أن يكون المصل المخفف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر شفافًا ، ويجب أن يكون تعليق الميكروبات في نفس المحلول عكرًا بشكل موحد ، بدون رواسب.

يمكن أن تلتصق البكتيريا المختلفة ذات الصلة بنفس مصل التراص التشخيصي ، مما يجعل التعرف عليها أمرًا صعبًا. لذلك استمتع الأمصال التراصية الممتصة ،التي تمت إزالة الأجسام المضادة التفاعلية التبادلية منها عن طريق الامتزاز بواسطة البكتيريا ذات الصلة. في مثل هذه الأمصال ، تبقى الأجسام المضادة الخاصة بهذه البكتيريا فقط. تم اقتراح تحضير مصل التراص التشخيصي أحادي المستقبل بهذه الطريقة من قبل A. Castellani (1902).

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RNHA ، RPHA) يعتمد على استخدام كريات الدم الحمراء مع المستضدات أو الأجسام المضادة الممتصة على السطح ، والتي يؤدي تفاعلها مع الأجسام المضادة المقابلة أو مستضدات مصل الدم للكرة إلى التصاق كريات الدم الحمراء ببعضها والسقوط في قاع أنبوب الاختبار أو الخلية فيشكل الرواسب الصدفي (الشكل 13.2). في رد فعل عنيفتستقر كريات الدم الحمراء على شكل "زر". عادة ، يتم الكشف عن الأجسام المضادة في RNHA باستخدام مستضد تشخيص كريات الدم الحمراء ، وهو عبارة عن كريات حمراء مع كثف على الالمستضدات لهم. في بعض الأحيان نستخدم تشخيصات الجسم المضاد لكريات الدم الحمراء ، والتي يتم فيها امتصاص الأجسام المضادة. على سبيل المثال ، يمكن الكشف عن توكسين البوتولينوم عن طريق إضافة البوتولينوم التشخيصي للجسم المضاد لكريات الدم الحمراء (يسمى هذا التفاعل رد فعل التراص الدموي العكسي غير المباشر- رونجا). يستخدم RNHA لتشخيص الأمراض المعدية ، وتحديد هرمون موجهة الغدد التناسلية فيالبول أثناء فترة الحمل ، للكشف عن فرط الحساسية تجاه أدويةوالهرمونات وفي بعض الحالات الأخرى.

تفاعل التخثر . يتم تحديد الخلايا الممرضة باستخدام المكورات العنقودية ، المعالجة مسبقًا بمصل التشخيص المناعي. بروتين يحتوي على المكورات العنقودية لكن،وجود انجذاب لإف سي - شظية من الغلوبولين المناعي ، لا تمتص على وجه التحديد الأجسام المضادة للميكروبات ، والتي تتفاعل بعد ذلك مع المراكز النشطة مع الميكروبات المقابلة المعزولة من المرضى. نتيجة للتجلط ، يتم تكوين رقائق تتكون من المكورات العنقودية والأجسام المضادة التشخيصية في المصل والميكروب الذي يتم تحديده.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) يقوم على الحصار ، قمع مستضدات الفيروسات بواسطة الأجسام المضادة للمصل المناعي ، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء (الشكل 13.3). يستخدم RTHA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية ، والتي يمكن للعوامل المسببة لها (الأنفلونزا ، والحصبة ، والحصبة الألمانية ، والتهاب الدماغ الذي ينتقل عن طريق القراد ، وما إلى ذلك) أن تتراكم في كريات الدم الحمراء للحيوانات المختلفة.

تفاعل التراص لتحديد فصائل الدم يستخدم لتأسيس نظام ABO (انظر القسم 10.1.4.1) باستخدام تراص كريات الدم الحمراء بأجسام مضادة للمصل المناعي ضد مستضدات فصائل الدم A (II) ، B (III). الضوابط هي: مصل خال من الأجسام المضادة ، أي مصل AB (GU)فصائل الدم المستضدات الموجودة في كريات الدم الحمراء من المجموعات A (II) ، B (III). لا يحتوي التحكم السلبي على مستضدات ، أي يتم استخدام المجموعة 0 (I) كريات الدم الحمراء.

في تفاعلات التراص لتحديد عامل Rh(انظر القسم 10.1.4.1) استخدم الأمصال المضادة لـ Rh (سلسلتان مختلفتان على الأقل). في وجود مستضد Rh على غشاء كريات الدم الحمراء المدروسة ، يحدث تراص هذه الخلايا. تعمل كريات الدم الحمراء المعيارية ذات العامل الريصي الإيجابي والسلبي لجميع مجموعات الدم كعناصر تحكم.

تفاعل التراص لتحديد الأجسام المضادة لمضاد Rhesus ( رد فعل غير مباشركومبس)يستخدم في المرضى الذين يعانون من انحلال الدم داخل الأوعية الدموية. في بعض هؤلاء المرضى ، تم العثور على أجسام مضادة لمضاد Rhesus ، وهي غير مكتملة ، أحادية التكافؤ. يتفاعلون على وجه التحديد مع كريات الدم الحمراء إيجابية العامل الريصي ، لكن لا تسبب تراصهم. يتم تحديد وجود مثل هذه الأجسام المضادة غير المكتملة في تفاعل كومبس غير المباشر. للقيام بذلك ، يتم إضافة مصل مضاد الجلوبيولين (الأجسام المضادة ضد الغلوبولين المناعي البشري) إلى نظام الأجسام المضادة لـ Rh + كريات الدم الحمراء الموجبة للعامل الريصي ، والتي تسبب تراص كريات الدم الحمراء (الشكل 13.4). باستخدام تفاعل كومبس ، يتم تشخيص الحالات المرضية المرتبطة بالتحلل داخل الأوعية الدموية للكريات الحمراء ذات المنشأ المناعي ، على سبيل المثال ، مرض الانحلالي عند الوليد: تتحد كريات الدم الحمراء لجنين موجب عامل الريسوس مع أجسام مضادة غير مكتملة لعامل الريزوس المنتشر في الدم ، والذي يعبر المشيمة من أم سلبي عامل ريسس.

ردود الفعل هطول الأمطار

معادلة الترسيب - RP (مناللات. برايسي بيتو- راسب ،) هو تكوين وترسيب مركب من مستضد جزيئي قابل للذوبان مع أجسام مضادة في شكل تعكر ، يسمى ترسب.يتكون عن طريق خلط المستضدات والأجسام المضادة بكميات مكافئة ؛ فائض واحد منهم يقلل من مستوى تكوين مجمع المناعة.

وضع تفاعلات الترسيب في أنابيب الاختبار (رد فعل حلقة هطول الأمطار) ،في المواد الهلامية ، وسائط المغذيات ، إلخ. تستخدم على نطاق واسع أنواع مختلفة من تفاعل الترسيب في هلام شبه سائل من أجار أو أغاروز: الانتشار المناعي المزدوج وفقًا لـ Ouchterlony. الانتشار المناعي الشعاعي ، الرحلان الكهربي المناعيوإلخ.

رد فعل حلقة هطول الأمطار . يتم إجراء التفاعل في أنابيب ترسيب ضيقة مع مصل مناعي ، حيث يتم وضع مستضد قابل للذوبان في طبقات. مع النسبة المثلى للمستضد والأجسام المضادة ، تتشكل حلقة مترسبة معتمة عند حدود هذين المحلين (الشكل 13.5). لا يؤثر الفائض من المستضد على نتيجة تفاعل ترسيب الحلقة بسبب الانتشار التدريجي للكواشف إلى حدود السائل. إذا تم استخدام المستخلصات المائية المغلية والمفلترة للأعضاء أو الأنسجة كمستضدات في تفاعل ترسيب الحلقة ، عندئذٍ يسمى هذا التفاعل تفاعل الترسيب الحراري الثالث (تفاعل أسكولي ،مع الجمرة الخبيثة /

رد فعل Oukhteruni مزدوج الانتشار المناعي . لإعداد التفاعل ، يُسكب هلام الأجار المذاب في طبقة رقيقة على لوح زجاجي ، وبعد أن يصلب ، يتم قطع ثقوب بحجم 2-3 مم فيه. يتم وضع المستضدات والأمصال المناعية بشكل منفصل في هذه الآبار ، والتي تنتشر تجاه بعضها البعض. عند نقطة الالتقاء بنسب مكافئة ، فإنها تشكل راسبًا على شكل شريط أبيض. في الأنظمة متعددة المكونات ، تظهر عدة خطوط من الرواسب بين الآبار ذات المستضدات المختلفة والأجسام المضادة في الدم ؛ بالنسبة للمستضدات المتطابقة ، تندمج الخطوط المترسبة ؛ بالنسبة لغير المتطابقين ، فإنها تتقاطع (الشكل 13.6).

رد فعل الانتشار المناعي الشعاعي . يُسكب المصل المناعي مع هلام الأجار المنصهر بالتساوي على الزجاج. بعد التصلب في الهلام ، يتم عمل الآبار التي يوضع فيها المستضد في تخفيفات مختلفة. ينتشر المستضد في الهلام ، ويشكل مناطق الترسيب الحلقية حول الآبار مع الأجسام المضادة (الشكل 13.7). يتناسب قطر حلقة الترسيب مع تركيز المستضد. يستخدم التفاعل لتحديد مستويات الدم من الغلوبولين المناعي من مختلف الفئات ، ومكونات النظام التكميلي ، إلخ.

الرحلان المناعي- مزيج من طريقة الرحلان الكهربي والترسيب المناعي: يتم إدخال خليط من المستضدات في آبار الهلام ويفصل في الهلام باستخدام الرحلان الكهربي. بعد ذلك ، بالتوازي مع مناطق الرحلان الكهربائي ، يتم إدخال مصل مناعي في الأخدود ، حيث تتشكل الأجسام المضادة ، المنتشرة في الهلام ، عند نقطة التقاء مستضد خط الترسيب.

تفاعل التلبد(حسب رامون) (من اللات. الندف-رقائق الصوف) - ظهور براق أو كتلة ندفية (ترسيب مناعي) في أنبوب اختبار أثناء تفاعل مضاد السموم أو مضادات السموم. يتم استخدامه لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم أو الذيفان.

المجهر الإلكتروني المناعي- الفحص المجهري الإلكتروني للميكروبات ، والفيروسات في كثير من الأحيان ، ومعالجتها بالأجسام المضادة المناسبة. الفيروسات التي يتم علاجها بمصل المناعة من تكتلات المناعة (الرواسب الدقيقة). يتم تكوين "كورولا" من الأجسام المضادة حول الفيريونات ، على النقيض من حمض الفوسفوتونجستيك أو غيره من المستحضرات الإلكترونية الكثيفة بصريًا.

ردود الفعل التي تنطوي على مكمل

ردود الفعل التي تنطوي على مكملبناءً على تنشيط المكمل بواسطة مركب مضاد - مستضد (تفاعل تثبيت مكمل ، انحلال دم شعاعي ، إلخ).

تفاعل التثبيت التكميلي (RSK) تكمن في حقيقة أنه عندما تتطابق مع بعضها البعض ، فإن المستضدات والأجسام المضادة تشكل معقدًا مناعيًا ، والذي ، من خلالإف سي - جزء من الأجسام المضادة ينضم إلى المكمل (C) ، أي يحدث الارتباط التكميلي مع مركب مضاد لجسم مضاد. إذا لم يتم تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، فإن المكمل يظل خاليًا (الشكل 13.8). يتم تنفيذ RSK على مرحلتين: المرحلة الأولى - حضانة خليط يحتوي على ثلاثة مكونات للمستضد + الجسم المضاد + المكمل ؛ المرحلة الثانية (المؤشر) - الكشف عن المكمل الحر في الخليط عن طريق إضافة نظام انحلالي يتكون من كريات الدم الحمراء في الأغنام ومصل انحلالي يحتوي على أجسام مضادة لها. في المرحلة الأولى من التفاعل ، أثناء تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، يحدث ارتباط مكمل ، ثم في المرحلة الثانية ، لن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء المحسوسة بالأجسام المضادة ؛ رد الفعل إيجابي. إذا كان المستضد والجسم المضاد لا يتوافقان مع بعضهما البعض (لا يوجد مستضد أو جسم مضاد في عينة الاختبار) ، فإن المكمل يظل حراً وفي المرحلة الثانية سينضم إلى معقد الأجسام المضادة لخلايا الدم الحمراء ، مما يتسبب في انحلال الدم ؛ رد الفعل سلبي.

يستخدم RSK لتشخيص العديد من الأمراض المعدية ، وخاصة مرض الزهري (تفاعل واسرمان).

تفاعل انحلال الدم الشعاعي (RRH ) توضع في آبار هلام أجار تحتوي على كريات الدم الحمراء ومكملات. بعد إضافة المصل الانحلالي (الأجسام المضادة ضد كريات الدم الحمراء الكبش) إلى آبار الهلام ، يتم تشكيل منطقة انحلال الدم حولها (نتيجة الانتشار الشعاعي للأجسام المضادة). وبالتالي ، من الممكن تحديد نشاط المصل التكميلي والانحلالي ، وكذلك الأجسام المضادة في مصل الدم لمرضى الأنفلونزا والحصبة الألمانية والتهاب الدماغ الذي ينقله القراد. للقيام بذلك ، يتم امتصاص المستضدات المقابلة للفيروس على كريات الدم الحمراء ، ويضاف مصل دم المريض إلى آبار الهلام المحتوي على كريات الدم الحمراء. تتفاعل الأجسام المضادة للفيروسات مع المستضدات الفيروسية الممتصة على كريات الدم الحمراء بعد ذلك

ترتبط المكونات المكملة بهذا المركب ، مما يؤدي إلى انحلال الدم.

تفاعل الالتصاق المناعي (RIP ) يعتمد على تنشيط النظام التكميلي بواسطة مستضدات الجسم (البكتيريا والفيروسات) المعالجة بمصل المناعة. نتيجة لذلك ، يتم تكوين مكون مكمل ثالث نشط (C3b) ، والذي يرتبط بمستضد الجسم كجزء من المجمع المناعي. على كريات الدم الحمراء والصفائح الدموية والبلاعم ، توجد مستقبلات لـ C3b ، ونتيجة لذلك ، عندما تختلط هذه الخلايا مع المجمعات المناعية التي تحمل C3b ، فإنها تتحد وتتراكم.

تفاعل التعادل

الأجسام المضادة في مصل الدم قادرة على تحييد التأثير الضار للميكروبات أو سمومها على الخلايا والأنسجة الحساسة ، والذي يرتبط بحصار المستضدات الميكروبية بواسطة الأجسام المضادة ، أي تحييد. تفاعل التعادليتم إجراء (RN) عن طريق إدخال خليط من المستضد والأجسام المضادة في الحيوانات أو في كائنات اختبار حساسة (مزرعة الخلية ، الأجنة). في حالة عدم وجود التأثير الضار للكائنات الحية الدقيقة أو مستضداتها والسموم في الحيوانات وكائنات الاختبار ، فإنهم يتحدثون عن التأثير المعادل للمصل المناعي ، وبالتالي ، خصوصية التفاعل بين معقد الأجسام المضادة للمستضد (الشكل 13.9).

تفاعل التألق المناعي - RIF (طريقة Koons)

هناك ثلاثة أنواع رئيسية من الطريقة: مباشرة ، غير مباشرة (الشكل 13.10) ، مع تكملة. رد فعل Koons هو طريقة تشخيص سريعة للكشف عن المستضدات الميكروبية أو الكشف عن الأجسام المضادة.

طريقة RIF المباشرة يعتمد على حقيقة أن مستضدات الأنسجة أو الميكروبات المعالجة بمصل مناعي بأجسام مضادة تحمل علامات الفلوروكرومات قادرة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية لمجهر الفلورسنت.

تتوهج البكتيريا الموجودة في اللطاخة ، والتي تُعالج بمصل إنارة ، على طول محيط الخلية في شكل حد أخضر.

طريقة RIF غير المباشرة هو التعرف على مركب الجسم المضاد للمستضد باستخدام مصل مضاد الغلوبولين (الجسم المضاد) المسمى بالفلوروكروم. للقيام بذلك ، يتم علاج مسحات من الميكروبات المعلقة بأجسام مضادة من مصل تشخيص الأرانب المضاد للميكروبات. ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير المرتبطة بالمستضدات الميكروبية ، ويتم الكشف عن الأجسام المضادة المتبقية على الميكروبات عن طريق معالجة اللطاخة بمضاد الغلوبولين (مضاد للأرانب) المسمى بالفلوروكرومات. نتيجة لذلك ، يتم تكوين ميكروب معقد + أجسام مضادة للأرانب المضادة للميكروبات + أجسام مضادة للأرانب تحمل علامة الفلوروكروم. لوحظ هذا المركب في مجهر الفلورسنت ، كما في الطريقة المباشرة.

طريقة ELISA أو التحليل (ELISA)

إليسا -الكشف عن المستضدات باستخدام الأجسام المضادة المقابلة المرتبطة بإنزيم وضع العلامات (الفجل البيروكسيديز ، بيتا جالاكتوزيداز أو الفوسفاتاز القلوي). بعد أن يتم دمج المستضد مع الأمصال المناعية المسمى بالإنزيم ، تتم إضافة الركيزة / الكروموجين إلى الخليط. يتم شق الركيزة بواسطة الإنزيم ، ويتغير لون منتج التفاعل - كثافة اللون تتناسب طرديًا مع عدد جزيئات المستضد والأجسام المضادة المرتبطة.

المرحلة الصلبة إليسا - النوع الأكثر شيوعًا للاختبار المناعي ، عندما يتم امتصاص أحد مكونات الاستجابة المناعية (مستضد أو أجسام مضادة) على مادة حاملة صلبة ، على سبيل المثال ، في آبار ألواح البوليسترين

عند تحديد الأجسام المضادة ، يتم إضافة مصل دم المريض ، ومصل مضاد الغلوبولين المسمى بالإنزيم ، والركيزة (الكروموجين) للإنزيم بشكل تسلسلي إلى آبار الصفائح مع المستضد الممتص.

في كل مرة بعد إضافة المكون التالي ، تتم إزالة الكواشف غير المقيدة من الآبار عن طريق الغسيل الشامل. في نتيجة إيجابيةيتغير لون محلول الكروموجين. يمكن تحسس حامل المرحلة الصلبة ليس فقط بمولد ضد ، ولكن أيضًا بالأجسام المضادة. بعد ذلك ، يتم إدخال المستضد المطلوب في الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة ، ويضاف المصل المناعي ضد المستضد المسمى بالإنزيم ، ثم يضاف الركيزة للإنزيم.

إليسا التنافسية . يتنافس المستضد المستهدف والمستضد المسمى بالإنزيم مع بعضهما البعض لربط كمية محدودة من الأجسام المضادة المناعية في المصل. اختبار آخر هو الأجسام المضادة التي تبحث عنها

والأجسام المضادة الموصوفة تتنافس مع بعضها البعض للحصول على المستضدات.

الطريقة الإشعاعية المناعية أو التحليل (RIA)

طريقة حساسة للغاية تعتمد على تفاعل الجسم المضاد للمستضد باستخدام مولدات الضد أو الأجسام المضادة الموصوفة بالنويدات المشعة (125 J ، 14 C ، 3 H ، 51 Cr ، إلخ). بعد تفاعلهم ، يتم فصل المركب المناعي المشع الناتج ويتم تحديد نشاطه الإشعاعي في العداد المناسب (إشعاع بيتا أو جاما):

كثافة الإشعاع تتناسب طرديا مع عدد جزيئات المستضد والجسم المضاد المرتبطة.

في نسخة المرحلة الصلبة من ريا يتم امتصاص أحد مكونات التفاعل (مستضد أو أجسام مضادة) على مادة حاملة صلبة ، على سبيل المثال ، في آبار مصفوفات البوليسترين الدقيقة. نسخة أخرى من الطريقة هي ريا تنافسية.يتنافس المستضد المستهدف والمستضد المسمى بالنويدات المشعة مع بعضهما البعض لربط كمية محدودة من الأجسام المضادة في المصل المناعي. يستخدم هذا الخيار لتحديد كمية المستضد في مادة الاختبار.

يستخدم RIA للكشف عن المستضدات الميكروبية ، وتحديد الهرمونات ، والإنزيمات ، المواد الطبيةوالغلوبولين المناعي ، وكذلك المواد الأخرى الموجودة في مادة الاختبار بتركيزات طفيفة - 10 ~ | 0 -I0 ~ 12 جم / لتر. تمثل الطريقة خطرًا بيئيًا معينًا.

مناعي

مناعي (IB)- طريقة حساسة للغاية تعتمد على مزيج من الرحلان الكهربائي و ELISA أو RIA.

يتم عزل المستضد باستخدام هلام البولي أكريلاميد الكهربائي ، ثم يتم نقله (النشاف - من اللغة الإنجليزية. لطخة, بقعة) من الجل على الورق المنشط أو غشاء النيتروسليلوز وتم تطويره بواسطة ELISA. تنتج الشركات مثل هذه الشرائط مع "البقع"

المستضدات. يتم وضع مصل المريض على هذه الشرائط. ثم ، بعد الحضانة ، يتم غسل المريض من الأجسام المضادة غير المقيدة للمريض ويتم تطبيق المصل ضد الغلوبولين المناعي البشري ، المسمى بالإنزيم. يتم الكشف عن المستضد المعقد + الجسم المضاد للمريض + الجسم المضاد ضد Ig البشري المتكون على الشريط عن طريق إضافة ركيزة / كروموجين يتغير لونه تحت تأثير الإنزيم (الشكل 13.12).

يستخدم IB كطريقة تشخيص لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية ، إلخ.

التراص هو تراص وترسيب الميكروبات أو الخلايا الأخرى تحت تأثير الأجسام المضادة في وجود إلكتروليت (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).تسمى مجموعات البكتيريا اللزجة (الخلايا) التراص. المكونات التالية مطلوبة لتفاعل التراص:

1. الأجسام المضادة (agglutinins) الموجودة في مصل حيوان مريض أو مناعي.

2. المستضد - تعليق للميكروبات الحية أو المقتولة ، كريات الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى.

3. محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (0.9٪).

يستخدم تفاعل التراص للتشخيص المصلي لحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال) ، الحمى المالطية (تفاعل رايت وهدلسون) ، التولاريميا ، إلخ. في هذه الحالة ، مصل المريض هو الجسم المضاد ، والميكروب المعروف هو المستضد. عندما يتم التعرف على الميكروبات أو الخلايا الأخرى ، فإن تعليقها يعمل كمستضد ، ويعمل مصل مناعي معروف كجسم مضاد. يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع للتشخيص الالتهابات المعوية، السعال الديكي ، إلخ.

طرق تصنيف RA

تقريبي RA على الزجاج

نشر RA

(طريقة الحجم)

تفاعل التخثر

توسيع RA على الزجاج (تحديد المصلي)

تفاعل التراص على الزجاج.يتم وضع قطرتين من مصل معين (كثف) وقطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر على شريحة زجاجية خالية من الدهون. يتم تخفيف الأمصال غير الممتزجة مسبقًا بنسبة 1: 5 - 1: 100. يجب وضع قطرات على الزجاج بحيث يكون هناك مسافة بينهما. يُفرك المزرعة جيدًا بحلقة أو ماصة على كوب ، ثم تُضاف إلى قطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر وإحدى قطرات المصل ، مع التحريك في كل منهما حتى يتم تكوين تعليق متجانس. انخفاض المصل بدون الزرع هو التحكم في المصل.

انتباه!لا ينبغي نقل مزرعة المصل إلى قطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، وهو عنصر تحكم مستضد. يستمر التفاعل عند درجة حرارة الغرفة لمدة 1-3 دقائق. إذا ظل التحكم في المصل شفافًا ، لوحظ وجود تعكر منتظم في التحكم في المستضد ، وتظهر رقائق التراص على خلفية سائل صافٍ في القطرة حيث يتم خلط المزرعة مع مصل الدم ، تعتبر نتيجة التفاعل إيجابية.

الفسيولوجية التشخيصية

مصل + محلول ثقافة + ثقافة

تفاعل التراص الممتد (الطريقة الحجمية).يتم تحضير التخفيفات المصلية في تخفيفات متتالية ، وغالبًا ما تكون ذات شقين. الطريقة تسمى بالجملة. لتحديد عيار الجسم المضاد في مصل الدم ، خذ 6 أنابيب اختبار. صب 1 مل من التخفيف الأولي للمصل 1:50 في الأنبوب الأول وأضف 1 مل من محلول ملحي فسيولوجي لجميع الأنابيب الستة باستخدام ماصة متدرجة. في أنبوب الاختبار الأول ، يتم الحصول على تخفيف 1: 100 من المصل بحجم 2 مل. من أنبوب الاختبار الأول ، انقل 1 مل إلى أنبوب الاختبار الثاني ، حيث يصبح التخفيف 1: 200. لذلك قم بعمل سلسلة من التخفيفات التسلسلية للمصل في أول 5 أنابيب اختبار (1: 100 ، 1: 200 ، 1: 400 ، 1: 800 ، 1: 1600). صب 1 مل من الأنبوب الخامس في محلول المطهر. أضف قطرتين من التشخيص إلى جميع الأنابيب الستة. الأنبوب السادس عبارة عن مزرعة تحكم ، لأنه يحتوي فقط على محلول ملحي وتشخيصي.

مثل هذا التحكم ضروري لاستبعاد تراص الثقافة العفوية. يتم اهتزاز أنابيب الاختبار ووضعها في منظم حرارة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين ، ثم تترك لمدة يوم في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يتم تسجيل نتائج تفاعل التراص. عند إعداد تفاعل تراص مع مصل الأطفال في الأشهر الأولى من العمر ، بسبب الدونية الوظيفية لتكوين الأجسام المضادة ، من الضروري تحديد عيار الأجسام المضادة المنخفضة ، والتي يتم أخذها في الاعتبار عند تمييع المصل. يستغرق التخفيف الأولي للمصل 1:25. في أنبوب الاختبار الأول ، يتم الحصول على تخفيف بنسبة 1:50 ، ثم 1: 100 ، وهكذا.

مع النتيجة الإيجابية للتفاعل ، تظهر الخلايا اللزجة على شكل حبيبات أو رقائق في أنابيب الاختبار على خلفية سائل صافٍ.يستقر التراص تدريجياً في القاع على شكل "مظلة" ، ويصبح السائل فوق الرواسب صافياً. التحكم في مولد الضد عكر بشكل موحد.

حسب طبيعة الرواسب ، يتم تمييز التراص دقيق الحبيبات والخشنة (الشبيهة بالرقائق). يتم الحصول على تراص دقيق الحبيبات عند العمل مع O-sera. الحبيبات الخشنة - أثناء تفاعل الميكروبات المتحركة مع السوط H-sera. إنه يأتي أسرع من الحبيبات الدقيقة ، والرواسب الناتجة فضفاضة للغاية ويمكن كسرها بسهولة.

يتم التعبير عن شدة التفاعل على النحو التالي:

استقرت جميع الخلايا ، السائل الموجود في أنبوب الاختبار شفاف تمامًا. نتيجة رد الفعل إيجابية بشكل حاد.

الرواسب أقل ، لا يوجد استنارة كاملة للسائل. نتيجة رد الفعل إيجابية.

الرواسب أقل ، السائل أكثر عكرًا. نتيجة رد الفعل مشكوك فيها.

يوجد في قاع الأنبوب رواسب غير مهمة ، السائل عكر. نتيجة رد فعل مشكوك فيه.

لا توجد رواسب ، السائل متعكر بشكل متساوٍ ، كما هو الحال في التحكم في المستضد. نتيجة سلبيةتفاعلات