Pozitivna Coombsova reakcija. Kakšen je namen Coombsovega testa? Odkrivanje "toplotnih" protiteles

Na površini eritrocitov je veliko število antigeni. Glede na vrsto teh antigenov ločimo krvne skupine, najbolj raziskane skupine so ABO, Rh, Kell, Duffy in številne druge.

Povprečna cena na vašem območju: 2645 od 2645 ... do 2645

1 laboratorij izvaja to analizo na vašem območju

Opis študije

Priprava na študij: Krv vzamemo iz vene in nato z naravno koagulacijo ali s precipitacijo fibrinogena pridobimo serum (krvno plazmo brez fibrinogena). Material, ki se preučuje: Odvzem krvi

Na površini eritrocitov je veliko število antigenov. Glede na vrsto teh antigenov ločimo krvne skupine, najbolj raziskane skupine so ABO, Rh, Kell, Duffy in številni drugi sistemi. Običajno so v krvi protitelesa proti antigenom druge skupine, vendar med transfuzijo krvi, nosečnostjo, avtoimunske bolezni in drugi, se odkrijejo protitelesa proti njihovim antigenom Nepopolna protitelesa proti eritrocitom

Metoda

Indirektna Coombsova reakcija temelji na ugotavljanju aglutinacije (zlepljenja) eritrocitov, ki imajo na površini nepopolna protitelesa, kar se pojavi ob dodatku antiglobulinskega seruma.

V prvi fazi se v eno epruveto dodajo donorske eritrocite (O(I) skupina, Rh+) ​​in testni serum. Če so v testiranem serumu prisotna nepopolna protitelesa proti eritrocitom, jih fiksiramo na površini eritrocitov darovalca.

V drugi fazi se na steklo nanesejo eritrociti darovalca s protitelesi (če obstajajo) in standardni antiglobulinski serum s protitelesi proti človeškim imunoglobulinom. Če so na prvi stopnji protitelesa proti eritrocitom fiksirana na površini eritrocitov, se ob dodajanju standardnega seruma eritrociti zlepijo zaradi interakcije protiteles.

Referenčne vrednosti - norma
(indirektna Coombsova reakcija (antiglobulinski test, dokaz nepopolnih protiteles proti eritrocitom), kri)

Podatki o referenčnih vrednostih indikatorjev, kot tudi sama sestava indikatorjev, vključenih v analizo, se lahko nekoliko razlikujejo glede na laboratorij!

Norma:

Običajno ne sme biti protiteles proti lastnim eritrocitom, pri nastavitvi Coombsove reakcije ne pride do agregacije eritrocitov.

Indikacije

Študija humoralne specifične imunosti v primeru suma na avtoimunske reakcije v telesu, Rh-konflikt med materjo in plodom, določanje združljivosti krvi darovalca in prejemnika

Naraščajoče vrednosti (pozitiven rezultat)

Protitelesa proti eritrocitom najdemo, ko:

1. Avtoimunska hemolitična anemija

2. Hemolitična bolezen novorojenčka

3. Sistemske bolezni vezivnega tkiva

4. Kronični aktivni hepatitis itd.

Protitelesa ki se nahaja na površini eritrocitov, je lahko tako v statičnem kot v prostem stanju krvna plazma. Glede na stanje protiteles se izvede neposredna ali posredna Coombsova reakcija. Če obstaja razlog za domnevo, da so protitelesa fiksirana na površini rdečih krvnih celic, se izvede neposredni Coombsov test. V tem primeru test poteka v eni fazi - se doda antiglobulinski serum. Če so na površini rdečih krvničk prisotna nepopolna protitelesa, aglutinacija eritrocitov.

Posredna reakcija

Posredna Coombsova reakcija poteka v dveh korakih. Najprej je treba umetno izvajati preobčutljivost eritrocitov. Da bi to naredili, se eritrociti in krvni serum inkubirajo, kar povzroči fiksacijo protiteles na površini eritrocitov. Po tem se izvede druga faza Coombsovega testa - dodajanje antiglobulinskega seruma.

reakcija padavin - RP (iz lat. praecipilo oboriti) je nastajanje in obarjanje kompleksa topnega molekularnega antigena s protitelesi v obliki motnosti, t.i. oborina. Nastane z mešanjem antigenov in protiteles v enakih količinah, presežek enega od njih zmanjša stopnjo tvorbe imunskega kompleksa. Reakcija obarjanja se postavi v epruvete (reakcija obarjanja obroča), v gele, hranilne medije itd. Različice reakcije obarjanja v poltekočem gelu agarja ali agaroze se pogosto uporabljajo, dvojna imunodifuzija po Ouchterlony, radijeva imunodifuzija, imunoelektroforeza in itd.

HLA tipizacija- študija glavnega humanega histokompatibilnega kompleksa - kompleksa HLA. Ta tvorba vključuje regijo genov na kromosomu 6, ki kodirajo antigene HLA, ki sodelujejo pri različnih imunskih odzivih.

Naloge pri HLA tipizacija so lahko zelo različni - biološka identifikacija (tip HLA se deduje skupaj s starševskimi geni), določanje nagnjenosti k različnim boleznim, izbira darovalcev za presaditev organov - v tem primeru se primerjajo rezultati HLA tipizacije tkiv darovalca in prejemnika. S pomočjo tipizacije HLA ugotavljamo, kako podobna ali različna sta si zakonca glede antigenov tkivne kompatibilnosti za diagnosticiranje primerov neplodnosti.

Tipizacija HLA predlaga Analiza polimorfizma HLA in se izvaja z dvema metodama - serološko in molekularno genetsko. Klasična serološka metoda HLA tipizacije temelji na mikrolimfocitotoksičnem testu, molekularna metoda pa na PCR (verižna reakcija s polimerazo).

Serološki HLA tipizacija izvajajo na izoliranih celičnih populacijah. Antigene glavnega histokompatibilnega kompleksa prenašajo predvsem limfociti. Zato se kot glavni nosilci antigenov razreda I uporablja suspenzija limfocitov T, za določanje antigenov HLA razreda II pa suspenzija limfocitov B. Za izolacijo želenih celičnih populacij iz polne krvi se uporablja centrifugiranje ali imunomagnetno ločevanje. Menijo, da lahko prva metoda privede do lažno pozitivnih podatkov, saj v tem primeru nekatere celice umrejo. Druga metoda je priznana kot bolj specifična - medtem ko več kot 95% celic ostane sposobnih za preživetje.

Toda osnova za uprizoritev limfocitotoksični test HLA tipizacija je specifičen serum, ki vsebuje protitelesa proti različnim alelnim različicam HLA antigenov I in II razreda. Serološki test vam omogoča, da določite tip HLA tako, da preučite, kateri od serumov reagira z limfociti in kateri ne.

Če pride do reakcije med celicami in serumom, se na površini celice tvori kompleks antigen-protitelo. Po dodatku raztopine, ki vsebuje komplement, pride do lize in celične smrti. Serološki test tipizacije HLA se oceni s fluorescenčno mikroskopijo za oceno pozitivnih (rdeča fluorescenca) in negativnih (zelena fluorescenca) reakcij ali s fazno kontrastno mikroskopijo za barvanje jeder odmrlih celic. Rezultat tipizacije HLA je izpeljan ob upoštevanju specifičnosti reagiranih serumov in navzkrižno reagirajočih skupin antigenov, intenzivnosti reakcije citotoksičnosti.

Slabosti seroloških HLA tipizacija so prisotnost navzkrižnih reakcij, šibka afiniteta protiteles ali nizka izraženost antigenov HLA, odsotnost beljakovinskih produktov v številnih genih HLA.

Sodobnejše, molekularne metode HLA tipizacija uporabljajo se že standardizirani sintetični vzorci, ki ne reagirajo z antigeni na površini levkocitov, ampak z DNK in neposredno kažejo, kateri antigeni so prisotni v vzorcu. Molekularne metode ne zahtevajo živih levkocitov, preučiti je mogoče katero koli človeško celico, za delovanje je dovolj že nekaj mikrolitrov krvi ali pa se omejimo na strganje iz ustne sluznice.

Molekularna genetika HLA tipizacija uporablja metodo PCR, katere prvi korak je pridobitev čiste genomske DNK (iz polne krvi, suspenzije levkocitov, tkiv).

Nato se vzorec DNK kopira – pomnoži v epruveti s primerji (kratka enoverižna DNK), specifičnimi za določen lokus HLA. Konci vsakega para primerjev morajo biti strogo komplementarni edinstvenemu zaporedju, ki ustreza določenemu alelu, sicer ne pride do pomnoževanja.

Po PCR se med ponavljajočim kopiranjem pridobi veliko število fragmentov DNA, ki jih je mogoče vizualno oceniti. Da bi to naredili, se reakcijske mešanice podvržejo elektrolizi ali hibridizaciji in s programom ali tabelo se ugotovi, ali je prišlo do posebnega pomnoževanja. Rezultat tipizacije HLA je predstavljen v obliki celovitega poročila na ravni genov in alelov. Zaradi standardizacije uporabljenih vzorcev je molekularna HLA tipizacija natančneje serološko. Poleg tega zagotavlja več informacij (več novih alelov DNK) in višjo stopnjo podrobnosti, saj omogoča identifikacijo ne le antigenov, ampak tudi samih alelov, ki določajo, kateri antigen je prisoten v celici.

reakcija imunske lize. Reakcija temelji na sposobnosti specifičnih protiteles, da tvorijo imunske komplekse s celicami, vključno z eritrociti, bakterijami, kar vodi do aktivacije sistema komplementa po klasični poti in celične lize. Od reakcij imunske lize se najpogosteje uporablja reakcija hemolize in redkeje reakcija bakteriolize (predvsem pri diferenciaciji kolere in koleri podobnih vibrijev).

reakcija hemolize. Pod vplivom reakcije s protitelesi v prisotnosti komplementa se motna suspenzija eritrocitov spremeni v svetlo rdečo prozorno tekočino - "lak kri" zaradi sproščanja hemoglobina. Pri postavljanju diagnostične reakcije vezave komplementa (RCC) se kot indikator uporablja reakcija hemolize: za testiranje prisotnosti ali odsotnosti (vezave) prostega komplementa.

Lokalna reakcija hemolize v gelu(Jernejeva reakcija) je ena od različic reakcije hemolize. Omogoča vam določitev števila celic, ki tvorijo protitelesa. Število celic, ki izločajo protitelesa - hemolizine, je določeno s številom hemoliznih plakov, ki se pojavijo v agarskem gelu, ki vsebuje eritrocite, celično suspenzijo proučevanega limfoidnega tkiva in komplement.

Metoda imunofluorescence

(RIF, imunofluorescenčna reakcija) - metoda za odkrivanje specifičnih Ag (Ab) z uporabo Ab (Ag), konjugiranih s fluorokromom. Ima visoko občutljivost in specifičnost. Uporablja se pri ekspresnih okužbah z d-ki. bolezni (identifikacija povzročitelja v raziskovalnem materialu), kot tudi za določanje protiteles in površinskih receptorjev ter markerjev levkocitov (imunofenotipizacija) in drugih celic. Neposredna I. m. sestoji iz obdelave odseka tkiva ali brisa iz patološkega materiala ali mikrobnega to-ry s-coy, ki vsebuje specifična protitelesa, konjugirana s fluorokromom; zdravilo speremo, da odstranimo nevezana protitelesa in pregledamo pod fluorescenčnim mikroskopom. V pozitivnih primerih se svetleči imunski kompleks pojavi na obodu predmeta. Nadzor je potreben za izključitev nespecifične luminescence. pri posredno. Njim. v prvi fazi obdelamo tkivni izrez ali bris z nefluorescentnim specifičnim sredstvom, v drugi fazi pa z luminiscenčnim sredstvom proti -globulinom tiste živali, ki smo jo nanesli v prvi fazi. V pozitivnem primeru nastane svetlobni kompleks, ki ga sestavljajo Ar, Am proti njemu in Am proti Atu (metoda sendviča). Poleg luminiscenčnega mikroskopa, da se upošteva RIF med fenotipizacijo celic, laserski sortirnik celic .

pretočna citometrija- metoda optičnega merjenja parametrov celice, njenih organelov in procesov, ki se v njej pojavljajo.

Tehnika je sestavljena iz zaznavanja sipanja svetlobe iz laserskega žarka, ko celica prehaja skozi njega v tekočem curku, stopnja razpršenosti svetlobe pa omogoča, da dobite predstavo o velikosti in strukturi celice. Poleg tega analiza upošteva stopnjo fluorescence kemičnih spojin, ki sestavljajo celico (avtofluorescenca) ali vnesenih v vzorec pred pretočno citometrijo.

Celična suspenzija, predhodno označena s fluorescentnimi monoklonskimi protitelesi ali fluorescentnimi barvili, vstopi v tok tekočine, ki poteka skozi pretočno celico. Pogoji so izbrani tako, da se celice vrstijo ena za drugo zaradi t.i. hidrodinamično fokusiranje curka v curku. V trenutku, ko celica prečka laserski žarek, detektorji zabeležijo:

sipanje svetlobe pod majhnimi koti (od 1° do 10°) ( ta lastnost uporablja se za določanje velikosti celice).

sipanje svetlobe pod kotom 90 ° (omogoča presojo razmerja jedro / citoplazma, pa tudi heterogenost in granularnost celic).

intenzivnost fluorescence v več fluorescenčnih kanalih (od 2 do 18-20) - omogoča določitev subpopulacijske sestave celične suspenzije itd.

- antiglobulinski test, namenjen odkrivanju v Rh-negativni krvi nepopolnih antieritrocitnih protiteles proti Rh faktorju - specifičnemu proteinu, ki se nahaja na površini eritrocitov Rh-pozitivne krvi. Obstajata dve vrsti tega testa: neposredno - odkrivanje protiteles na površini rdečih krvničk, posredno - odkrivanje protiteles v krvnem serumu. Direkten test se izvaja pri diagnostiki in spremljanju zdravljenja krvnih bolezni: hemolitična anemija, hemolitična bolezen novorojenčki in drugi. Posredni test se izvede za oceno združljivosti krvi darovalca in prejemnika med transfuzijo ter za določitev prisotnosti in tveganja Rh konflikta pri načrtovanju in vodenju nosečnosti. Material za Coombsov test je deoksigenirano kri, študija se izvaja z metodami, ki temeljijo na reakciji aglutinacije. Običajno dajeta oba vzorca negativen rezultat. Analiza se izvede v enem dnevu.

Coombsov test - klinično preskušanje Rh-negativna kri, namenjena odkrivanju protiteles proti Rh faktorju. Test se uporablja za ugotavljanje tveganja za nastanek Rhesus konflikta in hemolitičnih reakcij. Pri vsaki osebi površina eritrocitov vsebuje določen niz antigenov ali aglutinogenov - spojin različne narave, katerih prisotnost ali odsotnost se uporablja za presojo krvne skupine in Rh faktorja. Obstaja veliko vrst antigenov, v medicinski praksi pa sta najpomembnejša aglutinogena A in B, ki določata krvno skupino, ter aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorjem se antigeni D odkrijejo na zunanji membrani eritrocitov, z negativnim - ne.

Coombsov test, imenovan tudi antiglobulinski test, je namenjen ugotavljanju nepopolnih antieritrocitnih protiteles proti sistemu Rh faktorja v krvi. Protitelesa proti Rh faktorju so specifični imunoglobulini, ki nastanejo v Rh negativni krvi, ko vanjo vstopijo eritrociti z aglutinogeni D. To se lahko zgodi pri mešanju krvi ploda in nosečnice, pri transfuzijah krvi brez predhodnega določanja krvne skupine. Coombsov test obstaja v dveh različicah - neposredni in posredni. Pri izvajanju neposrednega Coombsovega testa se protitelesa zaznajo pritrjena na površino rdečih krvnih celic. Študija se uporablja za določitev vzroka hemolitične reakcije. Indirektni Coombsov test je namenjen odkrivanju protiteles proti eritrocitom v krvni plazmi. Treba je določiti združljivost krvi darovalca in prejemnika ali matere in ploda, pomaga preprečiti razvoj Rhesus konflikta in posledično hemolizo rdečih krvnih celic.

Krv za obe različici Coombsovega testa se vzame iz vene. Analiza se izvaja z metodo aglutinacije z uporabo antiglobulinskega seruma. Rezultati študije se uporabljajo v hematologiji pri ugotavljanju vzrokov hemolitičnih reakcij, v kirurgiji in oživljanju med transfuzijo krvi, v porodništvu in ginekologiji pri spremljanju nosečnosti pri ženskah z Rh negativno krvjo.

Indikacije

Direktni Coombsov test, ki odkriva protitelesa, pritrjena na površino rdečih krvnih celic, je predpisan za hemolitične reakcije (uničenje rdečih krvničk) različnega izvora. Študija je indicirana za primarno avtoimunsko hemolitično anemijo, posttransfuzijsko hemolitično anemijo, hemolitično bolezen novorojenčka, hemolizo rdečih krvničk, ki jo povzroča avtoimunska, tumorska ali nalezljive bolezni, kot tudi prejemanje zdravila na primer kinidin, metildopa, prokainamid. Indirektni Coombsov test, ki zazna protitelesa v krvni plazmi, se uporablja za preprečevanje razvoja Rhesus konflikta. Indicirano je za bolnike, ki se pripravljajo na transfuzijo krvi, pa tudi za nosečnice z negativnim Rh faktorjem, pod pogojem, da ima bodoči oče otroka pozitiven Rh faktor.

Za določitev združljivosti Rh se Coombsov test ne izvaja pri bolnikih z Rh pozitivno krvjo. V teh primerih so na površini rdečih krvničk že antigeni, nastajanja protiteles ne moremo sprožiti s transfuzijo krvi ali vdorom krvi ploda v krvni obtok nosečnice. Prav tako študija ni indicirana za nosečnice, če imata oba starša negativen Rh faktor, dedno recesivno lastnost. Otrok v takšnih parih ima vedno Rh negativno kri, imunološki konflikt z materjo je nemogoč. Pri hemolitičnih patologijah se antiglobulinski test ne uporablja za spremljanje uspešnosti terapije, saj rezultati ne odražajo aktivnosti procesa uničenja eritrocitov.

Omejitev Coombsovega testa je zapletenost raziskovalnega postopka - za pridobitev zanesljivih rezultatov je potrebno upoštevati temperaturne in časovne pogoje, pravila za pripravo reagentov in biomateriala. Prednost Coombsovega testa je njegova visoka občutljivost. Pri hemolitični anemiji ostanejo rezultati tega testa pozitivni, tudi če se hemoglobin, bilirubin in retikulociti normalizirajo.

Priprava na analizo in zbiranje materiala

Material za izvedbo Coombsovega testa je venska kri. Za čas postopka odvzema krvi in ​​pripravo pacienta ni posebnih zahtev. Kot pri vsaki študiji je priporočljivo, da si po jedi vzamete vsaj 4-urni odmor, v zadnjih 30 minutah pa prenehate kaditi, telesna aktivnost izogibajte se čustvenemu stresu. Prav tako je vredno vnaprej razpravljati s svojim zdravnikom o potrebi po prenehanju jemanja zdravil - nekatera zdravila lahko izkrivljajo rezultate Coombsovega testa. Kri se odvzame z brizgo iz kubitalne vene, redkeje iz vene na zadnji strani roke. V nekaj urah je material dostavljen v laboratorij.

Pri izvajanju neposrednega Coombsovega testa pacientovemu krvnemu serumu dodamo antiglobulinski serum. Po določenem času se mešanica pregleda na prisotnost aglutinatov - nastanejo, če so protitelesa na rdečih krvnih celicah. S pozitivnim rezultatom se določi aglutinacijski titer. Indirektni Coombsov test je sestavljen iz več korakov. Najprej se protitelesa, prisotna v serumu, med inkubacijo fiksirajo na vbrizgane eritrocite. Nato vzorcu dodamo antiglobulinski serum, čez nekaj časa določimo prisotnost in titer aglutinatov. Obdobje analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Običajno je rezultat neposrednega Coombsovega testa negativen (-). To pomeni, da v krvi ni protiteles, povezanih z rdečimi krvnimi celicami, in ne morejo biti vzrok za hemolizo. Normalen rezultat posredni Coombsov test je tudi negativen (-), to pomeni, da v krvni plazmi ni protiteles proti faktorju Rh. Pri pripravi na transfuzijo krvi za prejemnika to pomeni združljivost s krvjo darovalca, med spremljanjem nosečnosti - odsotnost Rh senzibilizacije matere, majhno tveganje za nastanek imunološkega konflikta. Fiziološki dejavniki, kot so prehranjevalne navade ali telesna aktivnost, ne morejo vplivati ​​na rezultat testa. Če je rezultat pozitiven, je torej potrebno posvetovanje z zdravnikom.

Diagnostična vrednost analize

Pozitiven rezultat Coombsovega testa je izražen kvalitativno, od (+) do (++++), ali kvantitativno, v titrih od 1:16 do 1:256. Določanje koncentracije protiteles na eritrocitih in v krvnem serumu izvajamo v obeh vrstah vzorcev. Pri pozitivnem rezultatu neposrednega Coombsovega testa se na zunanji membrani rdečih krvničk odkrijejo protitelesa, ki povzročijo uničenje teh krvnih celic. Vzrok je lahko transfuzija krvi brez predhodne tipizacije - potransfuzijska hemolitična reakcija, pa tudi neonatalna eritroblastoza, hemolitična reakcija zaradi uporabe zdravil, primarna ali sekundarna avtoimunska hemolitična anemija. Sekundarno uničenje eritrocitov lahko povzročijo sistemski eritematozni lupus, Evansov sindrom, Waldenströmova makroglobulinemija, paroksizmalna hladna hemoglobinurija, kronična limfocitna levkemija, limfom, infekcijska mononukleoza, sifilis, mikoplazmalna pljučnica.

Pozitiven rezultat indirektnega Coombsovega testa kaže na prisotnost protiteles proti faktorju Rh v plazmi. V praksi to pomeni, da je prišlo do Rh senzibilizacije, obstaja možnost razvoja Rh konflikta po infuziji krvi darovalca med nosečnostjo. Za preprečevanje zapletov v nosečnosti pri ženskah z pozitiven rezultat Coombsov test se da na poseben račun.

Zdravljenje odstopanj od norme

Coombsov test se nanaša na izoserološke študije. Njegovi rezultati omogočajo identifikacijo hemolitične reakcije, pa tudi določitev združljivosti krvi darovalca in prejemnika, matere in ploda, da se prepreči razvoj Rhesus konflikta. Če je rezultat testa pozitiven, je potrebno poiskati nasvet lečečega zdravnika - porodničarja-ginekologa, hematologa, kirurga.

Aglutinacijska reakcija za določanje anti-Rhesus protiteles (indirektna Coombsova reakcija)uporabiti pri bolnikih z intravaskularno hemolizo. Pri nekaterih od teh bolnikov najdemo protitelesa proti rezusu, ki so nepopolna, monovalentna. Posebej interagirajo z Rh-pozitivnimi eritrociti, vendar ne povzročajo njihove aglutinacije. Prisotnost takšnih nepopolnih protiteles ugotavljamo v indirektni Coombsovi reakciji. Za to se sistemu anti-Rh protitelesa + Rh-pozitivni eritrociti doda antiglobulinski serum (protitelesa proti človeškim imunoglobulinom), kar povzroči aglutinacijo eritrocitov. Z uporabo Coombsove reakcije se diagnosticirajo patološka stanja, povezana z intravaskularno lizo eritrocitov imunskega izvora, na primer hemolitična bolezen novorojenčka: eritrociti Rh-pozitivnega ploda se združijo z nepopolnimi protitelesi proti Rh faktorju, ki kroži v krvi, ki prečka posteljica Rh-negativne matere.

Mehanizem. Težave pri odkrivanju nepopolnih (monovalentnih) protiteles so posledica dejstva, da ta protitelesa, ko se vežejo na epitope specifičnega antigena, ne tvorijo mrežaste strukture, reakcije med antigeni in protitelesi pa ne zaznamo z aglutinacijo, precipitacijo oz. drugi testi. Za identifikacijo nastalih kompleksov antigen-protitelo je treba uporabiti dodatne testne sisteme. Za odkrivanje nepopolnih protiteles, na primer proti Rh antigenu eritrocitov v krvnem serumu nosečnice, se reakcija izvede v dveh stopnjah: 1) eritrociti, ki vsebujejo Rh antigen, se dodajo dvakratnim razredčitvam testnega seruma. in hranimo pri 37 ° C eno uro; 2) eritrocitom, temeljito opranim po prvi stopnji, dodamo kunčji antihumani antiglobulinski serum (v predhodno titrirani delovni razredčini). Po inkubaciji 30 minut pri 37 °C se rezultati ocenijo glede na prisotnost hemaglutinacije (pozitivna reakcija). Potrebno je nadzorovati sestavine reakcije: 1) antiglobulinski serum + eritrociti, očitno senzibilizirani s specifičnimi protitelesi; 2) eritrociti, obdelani z normalnim serumom + antiglobulinski serum; 3) Rh negativni eritrociti obdelani s testnim serumom + antiglobulinski serum.

50. Reakcija pasivne hemaglutinacije. Mehanizem. Komponente. Aplikacija.

Reakcija indirektne (pasivne) hemaglutinacije(RNGA, RPGA) temelji na uporabi eritrocitov (ali lateksa) z adsorbiranimi antigeni ali protitelesi na njihovi površini, katerih interakcija z ustreznimi protitelesi ali antigeni krvnega seruma bolnikov povzroči, da se eritrociti zlepijo in izpadejo na dno. cev ali celica v obliki nazobčane usedline.

Komponente. Za proizvodnjo RNHA se lahko uporabijo eritrociti ovc, konj, zajcev, kokoši, miši, ljudi in drugih, ki jih poberejo za prihodnjo uporabo, obdelajo s formalinom ali glutaraldehidom. Adsorpcijska sposobnost eritrocitov se poveča, če jih obdelamo z raztopinami tanina ali kromovega klorida.

Kot antigeni v RNGA lahko služijo polisaharidni antigeni mikroorganizmov, izvlečki bakterijskih cepiv, antigeni virusov in rikecij ter druge snovi.

Eritrocite, senzibilizirane z AG, imenujemo eritrocitni diagnostiki. Za pripravo eritrocitnega diagnostika se najpogosteje uporabljajo ovčji eritrociti, ki imajo visoko adsorbcijsko aktivnost.

Aplikacija. RNHA se uporablja za diagnosticiranje nalezljivih bolezni, določanje gonadotropnega hormona v urinu ob ugotovitvi nosečnosti, za odkrivanje preobčutljivosti na zdravila, hormone in v nekaterih drugih primerih.

Mehanizem. Indirektni hemaglutinacijski test (RIHA) ima veliko večjo občutljivost in specifičnost kot aglutinacijski test. Uporablja se za identifikacijo patogena po njegovi antigenski strukturi ali za indikacijo in identifikacijo bakterijskih produktov - toksinov v proučevanem patološkem materialu. V skladu s tem se uporabljajo standardni (komercialni) diagnostiki eritrocitnih protiteles, pridobljeni z adsorpcijo specifičnih protiteles na površino taniziranih (s taninom obdelanih) eritrocitov. Zaporedne razredčitve preskusnega materiala pripravimo v vdolbinicah plastičnih plošč. Nato v vsako vdolbinico dodamo enak volumen 3 % suspenzije eritrocitov, napolnjenih s protitelesi. Če je potrebno, reakcijo postavimo vzporedno v več vrstic vdolbinic z eritrociti, napolnjenimi s protitelesi različnih skupin specifičnosti.

Po 2 urah inkubacije pri 37 ° C se rezultati upoštevajo z oceno videza usedline eritrocitov (brez stresanja): z negativno reakcijo se na dnu pojavi oborina v obliki kompaktnega diska ali obroča. vodnjak, s pozitivno reakcijo, značilen čipkast sediment eritrocitov, tanek film z neravnimi robovi.

Coombsov test je metoda laboratorijske raziskave nastane z vplivanjem na hemaglutinacijo. Temelji na občutljivosti protiteles na imunoglobuline in encimske elemente ter njihovi sposobnosti aglutinacije eritrocitov, prevlečenih s C3 ali Lg.

Neposredna diagnoza Coombsa

Uporablja se za odkrivanje protiteles ali komponent komplementa, nameščenih na zunanji strani celic. Neposredni Coombsov test se izvede po naslednjih korakih.

Uporaba takega testa

Neposredna Coombsova diagnoza se uporablja v nekaterih primerih, kot so:

• učinki transfuzije;
• avtoimunska hemoliza;
• z zdravili povzročena hemolitična anemija.

Indirektni Coombsov test

Ta diagnostika omogoča odkrivanje protiteles proti celicam v serumu, ki je praviloma inkubiran z eritrociti darovalca tipa 0, nato pa se opravi neposredni test. Uporabite posredno Coombsovo diagnostiko v naslednjih primerih:

Kako se pripraviti na analizo

Obstaja nekaj pravil za pripravo na anketo.

1. Če je bolnik novorojenček, se morajo starši zavedati, da bo testiranje pomagalo diagnosticirati ONH ( hemolitična bolezen novorojenčki).
2. Če ima bolnik sum na hemolitično anemijo, mu je treba razložiti, da mu bo analiza omogočila ugotoviti, ali je to posledica zaščitnih motenj, zdravil ali drugih dejavnikov.
3. Coombsov test, neposredni in posredni, ne predstavlja nobenih prehranskih ali dietnih omejitev.
4. Pacienta je treba obvestiti, da mu bodo za preiskavo vzeli kri iz vene, in mu povedati, kdaj točno bo venepunkcija opravljena.
5. Prav tako vas je treba opozoriti na verjetnost nelagodja med povijanjem roke in samim postopkom.
6. Zdravila, ki lahko vplivajo na rezultat vzorca, je treba opustiti.

Ta zdravila vključujejo:

• "streptomicin";
• "Metildopa";
• "Prokainamid";
• sulfonamidi;
• "Melfalan";
• "Kinidin";
• "Rifampin";
• "Izoniazid";
• cefalosporini;
• "Hidralazin";
• "Klorpromazin";
• "Levodopa";
• "Tetraciklin";
• "difenilhidantoin";
• "Etosuksimid";
• "Penicilin";
• mefenaminska kislina.

Vzorčenje krvi se opravi zjutraj na prazen želodec.

Kako poteka dogodek

Coombsov test se izvaja v naslednjem vrstnem redu:

1. Pri diagnostiki pri odraslem bolniku se po venepunkciji odvzame kri v epruvete z EDTA (etilendiamintetraacetat).
2. Novorojenčku vzamemo kri iz popkovine v čašo z EDTA.
3. Območje vboda pritisnemo z vatirano palčko, dokler se krvavitev ne ustavi.
4. Ko se na mestu vene punkcije pojavi modrica, so predpisani topli obkladki.
5. Po odvzemu krvi se lahko bolnik vrne k jemanju odtegnitvenih zdravil.
6. Starše novorojenčka je treba obvestiti, da bo morda potrebna sekundarna analiza za spremljanje dinamike anemije.

Prednosti Coombsovega testa

Takšna študija ima nekaj prednosti, in sicer:

Slabosti analize

Pozitivni Coombsov test je precej težavna metoda pregleda, kar kaže na značilno natančnost izvedbe. Pri njegovi uporabi lahko naletite na določene težave, zlasti v zvezi z interpretacijo šibko pozitivnih vplivov.

Ugotovljeno je bilo, da so lahko napačne negativne ali šibko pozitivne reakcije pri izdelavi Coombsovih vzorcev posledica nezadovoljivega aktivnega pranja celic, oslabitve antiglobulinskega reagenta s serumskimi ostanki, pa tudi spojin z nemastnim videzom, na katerih antiglobulin se lahko fiksira in izgubi svojo učinkovitost.

Coombsov test ima še eno pomanjkljivost - nizko stabilnost antiglobulinskega reagenta, katerega pridobivanje in shranjevanje ima individualne značilnosti, kar prav tako otežuje numerično oceno učinka antiglobulinskega seruma na hemaglutinacijo.

Bolezni, ki jih je mogoče odkriti med študijo

Coombsova diagnostika omogoča odkrivanje nekaterih vrst bolezni, kot so:

• hemolitična slabost pri novorojenčkih;
• različne transfuzijske reakcije;
• avtoimunska hemoliza;
• zdravilna hemolitična anemija.

Do danes Coombsov test velja za precej priljubljen sistem krvnega testa pri odraslih in novorojenčkih. Omogoča prepoznavanje številnih različnih bolezni.