Coombsova reakcija je negativna. Metoda za določanje krvnih skupin. Hemolitična bolezen novorojenčka

AT Zadnja leta med bolniki različnih starosti se je povečalo število krvnih bolezni in za njihovo diagnozo se uporabljajo različne metode in sredstva. Coombsov test je klinični krvni test, katerega namen je identificirati določene organizme, ki ogrožajo zdravje ljudi.

Protitelesa se lahko držijo in rezultat je lahko kršitev stanja imunskega sistema. Neposredni Coombsov test je antiglobulinski test, ki se izvaja za odkrivanje protiteles, pritrjenih na površino rdečih krvnih celic.

Običajno se strokovnjaki zatečejo k testu protiteles v naslednjih primerih:

Potreba po transfuziji krvi. Iz šolskega tečaja anatomije je znano, da ima lahko oseba eno od štirih krvnih skupin. Izvajanje antiglobulinskega testa vam omogoča, da ugotovite možnost transfuzije krvi v drug organizem. Lahko rečemo, da lahko bolnik postane darovalec za transfuzijo le, če njegova kri ustreza tipu bolnika, to je, da vsebuje enake antigene. V primeru, da imata pacient in darovalec razlike v antigenih, lahko to privede do uničenja transfundiranih celic s strani imunskega sistema. Posledica tega je lahko razvoj resnih bolezni in zapletov ter celo smrt. Zato je pomembna vloga pri iskanju prave vrste krvi, ko jo je treba transfuzirati.
Ugotavljanje tveganja za Rh senzibilizacijo. Sodobna medicina opredeljuje Rh kot antigen, njegova popolna definicija pa je koncept "Rh faktor". Zahvaljujoč Coombsovemu testu je mogoče diagnosticirati prisotnost protiteles proti Rh faktorju v krvi žensk med. V primeru, da ima bodoča mati negativen Rh faktor, oče pa pozitiven, potem bodoči otrok lahko podeduje katerega od njih. Če se pri nerojenem otroku odkrije pozitiven Rh faktor, se poveča tveganje za nastanek Rh senzibilizacije - to je proces mešanja krvi in matere med nosečnostjo ali porodom.

V primeru, da obstaja nezdružljivost med skupino matere in otroka, potem imunski sistem žensko telo začne plod dojemati kot tujek in nanj izvaja vse vrste napadov. Posledica tega je lahko razvoj hude patologije pri otroku, ki se imenuje eritroblastoza. V nekaterih primerih v odsotnosti učinkovito zdravljenje smrt ploda nastopi v maternici ali takoj po rojstvu.

V nekaterih primerih se Coombsov test izvaja za odkrivanje avtoimunskih hemolitikov.

Takšna bolezen je precej redka in se kaže v tvorbi eritrocitnih antigenov lastnega telesa.

Strokovnjaki razlikujejo dve vrsti Coombsovih vzorcev, od katerih se vsak uporablja za posebne namene.

Neposredni test. Direktni test v medicinski praksi imenujemo tudi direktni antiglobulinski test in z njegovo pomočjo je mogoče diagnosticirati protitelesa, pritrjena na površino. V nekaterih primerih se proizvodnja takšnih protiteles v človeškem telesu pojavi kot posledica napredovanja različnih ali vnosa takih zdravila, kako:

kinidin
metildop
prokainamid

Nevarnost takšnih protiteles je v tem, da lahko povzročijo razvoj in imajo uničujoč učinek na. Včasih se uporabi Coombsov test, ko je treba ugotoviti vzroke za razvoj patologij, kot sta anemija in.

Negativen Coombsov test velja za normalno.

Indirektni test. Pogosto se strokovnjaki zatečejo k izvajanju posrednega Coombsovega testa, ki ima drugo ime "posredni antiglobulinski test". Glavni namen tega je odkrivanje protiteles proti rdečim krvnim celicam, ki so prisotna v krvnem serumu. Zahvaljujoč temu testu je mogoče ugotoviti, ali se krv darovalca ujema s krvjo pacienta, če jo je treba transfuzirati. Takšna analiza je nekakšen test združljivosti in zahvaljujoč njeni izvedbi se je mogoče izogniti razvoju neželene reakcije na kri darovalca.

Običajno se takšna študija priporoča ženskam med. Nekatere matere imajo lahko v telesu protitelesa določenega razreda, ki lahko prehajajo skozi placento v kri nerojenega otroka. Posledica takega procesa je lahko hemolitična bolezen ploda, pa tudi razvoj različnih med nosečnostjo.

Priprava na postopek in njegovo izvedbo

Običajno postopek ne zahteva nobenega posebno usposabljanje in se lahko izvede kadar koli.

Priprava na diagnostiko vključuje naslednje točke:

v primeru, da bo analiza opravljena pri novorojenčku, je treba staršem pojasniti, da bo z njeno pomočjo mogoče diagnosticirati hemolitično bolezen
če obstaja sum na razvoj hemolitične bolezni pri bolniku, mu je treba pojasniti, da bo taka analiza pomagala ugotoviti vzroke za njen razvoj
priprava na analizo ne zahteva nobenih omejitev v hrani in prehrani
pri izvajanju analize pri novorojenčku je treba starše obvestiti, da bo potreben odvzem krvi iz vene, in pojasniti čas postopka
pacienta je treba obvestiti, da se lahko med namestitvijo podveze in odvzemom krvi pojavi nelagodje
jemanje zdravil lahko izkrivlja rezultate Coombsovega testa, zato jih je treba preklicati nekaj časa pred izvedbo

Pri izvajanju neposrednega Coombsovega testa se kri vzame iz vene z brizgo. Pred začetkom postopka se opravi temeljita dezinfekcija mesta vboda, po odvzemu materiala za raziskave pa se prilagodi vata ali sterilna gaza. V primeru, da se analiza izvaja pri novorojenčkih, se kri odvzame iz popkovine.

Ko se po odvzemu krvi pojavi hematom, se na mesto vboda položijo ogrevalni obkladki. Po posegu lahko bolnik nadaljuje z jemanjem zdravil.

V laboratoriju dobljeno kri prečistijo in vzporedno izvajajo ločevanje rdečih krvničk.

Vzorec pregleda specialist z različnimi serumskimi in Coombsovimi reagenti, v nasprotju s humanim globulinom. V primeru, da se eritrociti ne držijo skupaj in se ne razvije aglutinacija, potem lahko govorimo o pozitivnem rezultatu.

Med postopkom se lahko pojavijo naslednji zapleti:

razvoj od mesta odvzema krvi med študijo
glavobol, omotica ali omedlevica
razvoj krvavitve pod kožo
s slabo protimikrobno obdelavo kože na mestu injiciranja se poveča tveganje za okužbo v telesu

Rezultati raziskav

Dekodiranje - možne bolezni

pri zdrava oseba v telesu ni protiteles, torej jih običajno ne bi smelo biti. V primeru, da študija pokaže pozitiven test, lahko to kaže na prisotnost protiteles proti rdečim krvnim celicam v telesu.

Posledica takšnega patološkega stanja je lahko uničenje rdečih krvnih celic in običajno se razvije:

s sistemskim
z okužbo z mikoplazmo
z infekcijsko mononukleozo
pri hemolitični bolezni novorojenčka
s hemolitično anemijo zaradi zdravil
s kronično limfocitno levkemijo
z avtoimunsko hemolitično anemijo
z nezdružljivostjo krvi ploda in matere

Neposredni Coombsov test se pogosto daje ženskam med nosečnostjo za ugotavljanje združljivosti krvi matere in ploda. V primeru nezdružljivosti materinega telesa in nerojenega otroka glede učinkovin eritrocitov obstaja tveganje za nastanek hemolitična bolezen novorojenček.

Rh-pozitiven otrok pri Rh-negativni ženski povzroči razvoj Rh-konflikta.

S takšno patologijo pride do uničenja eritrocitov nerojenega otroka s strani anti-rezusnih teles materinega telesa. Ko pridejo v žensko telo, fetalne rdeče krvne celice spodbudno vplivajo na materin imunski sistem, rezultat pa je proizvodnja protiteles proti otroku.

Koristen video - hemolitična anemija.

Njihov nastanek v materinem telesu vodi do aglutinacijske tromboze kapilar in ishemične nekroze plodovih tkiv. Zaradi hemolize eritrocitov in razgradnje hemoglobina opazimo nastanek toksičnih posrednih snovi v telesu ploda. Močno zmanjšanje vsebnosti rdečih krvnih celic v plodu zaradi njihove hemolize vodi do razvoja bolezni, kot je anemija pri otroku.

Nizke ravni in visoke koncentracije bilirubina znatno otežijo potek bolezni. Med nosečnostjo se diagnosticirajo številni zapleti, kot so:

nevarnost spontanega splava
razvoj krvavitve
preeklampsija
slabokrvnost
prezgodnji porod

Anti-rezusna telesa ščitijo mater, hkrati pa resno ogrožajo razvoj ploda. Zahvaljujoč Coombsovemu testu je mogoče pravočasno diagnosticirati takšno patološko stanje ženskega telesa in predpisati pravočasno zdravljenje. Poleg tega takšna analiza pomaga prepoznati različne krvne bolezni, katerih napredovanje lahko privede do smrti bolnika.

Od številnih obstoječih antigenov v medicinski praksi najvišjo vrednost dajemo trem vrstam krvnih aglutinogenov. Eden od njih je tip, ki je odgovoren za manifestacijo faktorja Rh: če je prisoten na membrani eritrocitov, se diagnosticira krvna skupina Rh +, če je odsoten - Rh-. Če v sestavo Rh-negativne krvi vstopijo eritrociti z Rh + aglutinogeni, telo sproži imunski odziv in začne proizvajati protitelesa proti temu antigenu, kar povzroči patološka stanja.

REFERENCA! Rh faktor je kompleksen večkomponentni sistem več deset antigenov. Najpogostejši med njimi so aglutinogeni tipa D (85% primerov), pa tudi E in C.

Coombsov test se izvaja le ob prisotnosti neposrednih indikacij. Splošni seznam razlogov za predpisovanje Coombsovega testa:

načrtovanje in vodenje nosečnosti (starši imajo različne Rh);
darovanje in priprava na transfuzijo krvi (neujemanje Rh krvi ni nič manj škodljivo kot neujemanje v sistemu AB0);
načrtovano kirurški poseg(v primeru nadomestitve izgube krvi s transfuzijo krvi);
diagnoza hemolitičnih bolezni.

Natančnejše indikacije so odvisne od vrste študije, ki se izvaja.

Neposredni Coombsov test

Neposredni test odkrije protitelesa na površini rdečih krvničk. To je potrebno za diagnozo obstoječega hemolitične patologije:

avtoimunski (eritrociti in hemoglobin se uničijo kot posledica napada lastnih protiteles telesa);
zdravila (patološki proces sproži vnos nekaterih zdravil, kot sta kinidin ali prokainamid);
po transfuziji (z neusklajenostjo krvne skupine med transfuzijo), pa tudi v obliki Rh konflikta med nosečnostjo (eritroblastoza novorojenčkov).

REFERENCA! Hemolitična anemija je bolezen, povezana s prezgodnjim uničenjem rdečih krvnih celic zaradi hemolize, kar vodi do nezadostne nasičenosti krvi s kisikom in hipoksije možganov in / ali notranjih organov.

Hemolizo krvnih elementov opazimo pri onkoloških, infekcijskih, revmatičnih boleznih, zato se neposredni Coombsov test lahko uporablja kot dodatno sredstvo za diagnosticiranje patološkega stanja. Hkrati je vredno zapomniti: negativna vrednost analize ne izključuje možnosti hemolize, ampak je razlog za dodaten pregled.

Indirektni Coombsov test

Za preprečevanje patoloških situacij se pogosteje uporablja posredni test. Pomaga pri odkrivanju protiteles v krvni plazmi, kar je potrebno za oceno združljivosti transfuzije in diagnosticiranje tveganj Rh konflikta med nosečnostjo.

Več kot 80% ljudi ima pozitiven Rh faktor (Rh +), manj kot 20% pa je Rh negativnih. Če Rh- mati razvije Rh+ otroka, njeno telo začne proizvajati protitelesa, ki napadajo fetalne rdeče krvne celice in povzročajo hemolizo.

Ob upoštevanju dejstva, da odstotek zakonskih zvez z "različnim rezusom" doseže 12-15%, bi moralo biti tveganje za hemolitično bolezen novorojenčka visoko, v resnici pa le v 1 od 25 takih primerov pri ženskah pojav opazimo preobčutljivost (za 200 uspešnih porodov, 1 primer hemolitične patologije). To je deloma posledica dejstva, da prvi Rh-pozitivni otrok običajno ne povzroči odprte agresije materinega telesa; velika večina primerov se pojavi pri drugem in naslednjih otrocih. Velja enako načelo kot pri konvencionalni senzibilizaciji na določen alergen.

Ob prvem stiku ne pride do reakcije. Telo se le seznani z novim antigenom zanj, proizvaja protitelesa razreda IgM, ki so odgovorna za hiter imunski odziv, vendar redko prodrejo skozi placentno pregrado v otrokovo kri. Vse patološke reakcije se manifestirajo ob ponovnem "srečanju", ko se v telesu začnejo proizvajati protitelesa razreda IgG, ki zlahka prodrejo v fetalni krvni obtok in začnejo proces hemolize.

Indirektni Coombsov test med nosečnostjo omogoča odkrivanje prisotnosti protiteles v materinem telesu in pravočasno prepoznavanje začetni fazi preobčutljivost. Pozitiven odgovor zahteva registracijo z mesečno študijo titra protiteles in obvezno hospitalizacijo 3-4 tedne pred porodom.

REFERENCA! Nezdružljivost faktorja Rh na noben način ne vpliva na stanje matere, hemolitična bolezen se razvije le pri otroku. V hudih primerih in brez pravočasnega odziva lahko plod odmre že v maternici ali takoj po porodu.

Priprava na postopek in njegovo izvedbo

Za diagnozo se uporablja venska kri. Posebna dolgotrajna priprava na Coombsov test ni potrebna. Pred odvzemom krvi iz vene za analizo poskusite upoštevati standardna pravila:

opustite alkohol za 3 dni, zdravila(če je možno);
načrtujte zadnji obrok pozneje kot 8 ur pred odvzemom krvi za analizo;
opustite kajenje, fizični, duševni in čustveni stres v 1 uri;
Pred postopkom popijte kozarec čiste negazirane vode.

Raziskovalna metoda temelji na reakciji hemaglutinacije.

Pri izvajanju neposrednega testa vzorec krvi izpostavimo vnaprej pripravljenemu antiglobulinskemu serumu z znanimi indikatorji, zmes nekaj časa hranimo in preverimo aglutinate, ki nastanejo ob prisotnosti protiteles na eritrocitih. Raven aglutinatov se diagnosticira z uporabo aglutinacijskega titra.

Indirektni test Coombs ima podobno tehniko, vendar bolj zapleteno zaporedje dejanj. V ločen krvni serum vnesemo antigene eritrocite (z Rh faktorjem) in šele po teh manipulacijah dodamo antiglobulinski serum za diagnozo in titer aglutinatov.

Rezultati raziskav

Običajno tako neposredno kot posredni Coombsov test bi moral dati negativen rezultat:

negativen neposredni test kaže, da v krvi ni specifičnih protiteles proti Rh faktorju, povezanih z rdečimi krvnimi celicami, in ne morejo biti vzrok za hemolizo
negativen indirektni test pokaže, da tudi v krvni plazmi ni prostih protiteles proti Rh faktorju; dejstvo kaže na združljivost krvi darovalca s krvjo prejemnika (ali krvjo matere in otroka) glede na Rh faktor.

Pozitiven Coombsov test kaže na Rh senzibilizacijo telesa, kar je glavni razlog Rh konflikt v primeru transfuzije krvi ali pri nošenju otroka z drugačnim Rh statusom. V tem primeru rezultati ostanejo nespremenjeni 3 mesece (življenjska doba eritrocitov). Če je vzrok postala avtoimunska hemolitična anemija, lahko pozitiven test bolnika preganja več let (v nekaterih primerih vse življenje).

REFERENCA! Antiglobulinski test je zelo občutljiv, vendar ima malo informacij. Ne registrira aktivnosti hemolitičnega procesa, ne določa vrste protiteles in ne more ugotoviti vzroka patologije. Da bi dobili popolnejšo sliko, lečeči zdravnik nujno predpiše dodatne študije (mikroskopija krvi, splošna in biokemična analiza, revmatski testi, ESR, raven železa in feritina).

Stopnja preobčutljivosti ima lahko kvalitativni izraz (od "+" do "++++") ali kvantitativno - v obliki napisa:

1: 2 - nizka vrednost, ne predstavlja nevarnosti;
1:4 - 1:8 - začetek razvoja imunološke reakcije; ne predstavlja nevarnosti, vendar zahteva stalno spremljanje;
1:16 -1:1024 - svetla oblika preobčutljivosti, ukrepati je treba takoj.

Razlog za pozitiven test je lahko:

transfuzija netipizirane krvi (ali z napako pri tipkanju), ko se Rh faktor darovalca in prejemnika ne ujemata;
Rhesus konflikt med nosečnostjo (če se sestava krvnih antigenov pri očetu in materi ne ujema);
avtoimunska hemolitična anemija - prirojena (primarna) in sekundarna, ki je posledica nekaterih bolezni (Evansov sindrom, infekcijska pljučnica, sifilis, hladna hemoglobinurija, limfom);
hemolitična reakcija na zdravilo.

Nobene od naštetih težav bolnik ne more rešiti brez zdravniške pomoči. V vseh primerih bo potrebno nujno posvetovanje, registracija ali nujna hospitalizacija.

POZOR! V redkih primerih je možen lažno pozitiven Coombsov test. Razlog za to so lahko pogoste transfuzije krvi, pa tudi številne bolezni: revmatoidni artritis, eritematozni lupus, sarkoidoza. Tudi ta pojav lahko opazimo po odstranitvi vranice, pa tudi v primeru kršitve poteka reakcije (pogosto tresenje vsebine, prisotnost kontaminantov).

Načelo antiglobulina. Delna antieritrocitna protitelesa in molekule komplementa (C), ki se nahajajo na površini eritrocitov, se zaznajo - neposredni test - z njihovo aglutinacijo v stiku z živalskim serumom, ki vsebuje protitelesa proti humanemu antiglobulinu (antiglobulinski serum). Nepopolna protitelesa prosta v serumu dokazujemo - indirektni test - tako, da jih fiksiramo na mešanico normalnih eritrocitov skupine 0, katerih vsi antigeni pripadajo znanemu Rh sistemu, nato aglutiniramo pod vplivom antiglobulinskega seruma.

Materiali, reagenti za antiglobulinski Coombsov test: 10/100 ml tube; graduirane pipete za 1,2 ml; Pasteurjeve pipete; stojala; predmet nepolirana očala; 8,5‰ raztopina NaCl; eritrocitov. Eritrocite pacienta, pa tudi tiste, ki spadajo v skupino 0, bomo pridobili iz sveže odvzete krvi na antikoagulantni učinkovini (raztopina EDTA).

Izberite eritrocite skupine 0 tako, da izvirajo iz normalnih posameznikov in vsebujejo vse Antigeni sistema Rh. Shranjujemo jih lahko do 7 dni v avtologni plazmi pri +4°C. Če ni eritrocitov skupine 0, znanega antigenskega mozaika, lahko uporabimo mešanico eritrocitov skupine 0, Rh pozitivnih in Rh negativnih eritrocitov.

Serum bolnik mora biti sveže izbran.

Antiglobulinski serum izdelal Inštitut. I. Cantacuzino, je na voljo v liofilizirani obliki v ampulah po 1 ml. Po raztapljanju je treba serum hraniti pri -20°C.

Coombsova antiglobulinska tehnika:
a) Neposredni Coombsov test: 3-krat sperite bolnikove eritrocite z 8,5‰ raztopino NaCl.
Na več stekelcev nanesemo veliko kapljico razredčin antiglobulinskega seruma, zraven pa majhno kapljico bolnikovega sedimenta eritrocitov; premešajte kapljice ob steklenem kotu. Pripravljen material pustite na mizi 5 minut, nato ga preglejte na prisotnost aglutinatov. Če je pozitiven, določimo največji aglutinacijski titer.

b) Indirektni Coombsov test: eritrocite skupine 0, Rh-pozitivne in Rh-negativne, 3-krat speremo z 8,5‰ raztopino NaCl in izpostavimo pacientovemu serumu v razmerju 2 kapljici eritrocitov na 8-10 kapljic seruma, nato 60 minut, inkubiramo pri temperaturi 37 ° C. Nato eritrocite ponovno trikrat speremo in nanje delujemo z antiglobulinskim serumom, po navodilih za direktni Coombsov test.

Kdaj pogovarjamo se o hladnih aktivnih protitelesih preobčutljivost eritrocitov skupine 0 porabiti 60 min. pri temperaturi +4°С.

Opomba: 1) Ne izvajajte neposrednega Coombsovega testa na eritrocitih, ki so bili en ali več dni shranjeni pri temperaturi + 4 °C ali sobni temperaturi, saj so rezultati lahko lažno pozitivni zaradi fiksacije nepopolnih, hladno aktivnih protiteles, prisotnih v normalni serum. 2) V primerih hude hiperproteinemije sperite eritrocite 4-5 krat in preverite odsotnost serumskih beljakovin v zadnji izpiralni tekočini s sulfosalicilno kislino.

Možen ostanek 2 µg IgG/ml v usedlini eritrocitov lahko nevtralizira antiglobulinski serum. Coombsov test lahko izvedemo tudi z monospecifičnimi anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 in -C4 serumi, da razjasnimo vrsto glubolina na površini eritrocitov, na primer pri bolnikih z avtoimunsko hemolitično anemijo.

Hemolitična anemija, ki jih povzročajo avtoimunska telesa, ki so usmerjena proti lastnim rdečim krvnim celicam, niso natančno pojasnjeni. Domneva pa se, da nekateri dejavniki (na primer virus, nenormalna beljakovina) tako spremenijo eritrocite, da jih telo že zazna kot »nekaj tujega« in se z njimi spopade s pomočjo protiteles. Po drugi teoriji naj bi se protitelesa proti eritrocitom pojavila skoraj naključno med tvorbo nenormalnih beljakovin v plazmi pri določenih boleznih. Takšna beljakovinska telesca lahko prav tako "po nesreči" povzročijo reakcije, ki jih je mogoče uporabiti za postavitev diagnoze (znano je, da npr. virusna pljučnica daje pozitivno Wassermannovo reakcijo, pozitivno Paul-Bunnelovo reakcijo in reakcijo hladne aglutinacije).

Obstajata dve glavne vrste avtoprotiteles s hemolitično anemijo, in sicer: topla protitelesa (reagirajo pri 37 °) in hladna protitelesa (katerih reaktivnost se poveča, ko se temperatura približuje ničli). Toplotna protitelesa so pogostejše kot prehladne. Dacie je ugotovil, da so topli hemolizini dvakrat pogostejši kot hladni hemolizini. Hemolizini in aglutinini niso bistveno različna protitelesa: razlikujejo se le po naravi delovanja. Aglutinini aglutinirajo rdeče krvničke, hemolizini pa jih naredijo bolj dovzetne za kompleksen proces hemolize (komplement!). Avtoprotitelesa, ki se pritrdijo na eritrocite, tvorijo kompleks eritrocit-globin. Ta kompleks se odkrije z antiglobinskim Coombsovim testom.

Coombsov test izvajamo s Coombsovim serumom, za pripravo katerega kunca senzibiliziramo s človeškim serumom, proti kateremu se v serumu kunca tvorijo protitelesa. Pod delovanjem tako senzibiliziranega seruma na človeške eritrocite pride do njihove aglutinacije, če so receptorji eritrocitov zasedeni z blokirnimi protitelesi. Ker so ta blokirna protitelesa pridobljena iz človeškega seruma, se aglutinirajo s kunčjim serumom, ki je občutljiv na človeško plazmo in vsebuje precipitine. Ta reakcija se imenuje Coombsov test; za hemolitično anemijo na osnovi avtoimunskih teles (Lo tit) je skoraj specifična (za podrobnosti glej Maier).

Na splošno s hemolitično anemijo s primarno motnjo eritrocitov je Coombsov test negativen, s pridobljenimi pa pozitiven. Vendar pa obstajajo nekatere izjeme od tega pravila: lažno pozitiven Coombsov test je bil ugotovljen med krizami ustavne hemolitične anemije in v manjši meri - tudi včasih po splenektomiji, z revmatičnim poliartritisom, sarkoidozo, po pogostih transfuzijah krvi in s sistemskim lupusom. eritematozus. Seveda je s pridobljeno hemolitično anemijo brez tvorbe avtoimunskih teles negativen.

Hemolitična anemija ki jih povzročajo avtoimunska telesa, lahko razdelimo na:
a) akutna, subakutna in kronične oblike, kot tudi na
b) idiopatsko z neznano etiologijo in c) simptomatsko [virusna pljučnica (samo hladni aglutinini), kronična limfna levkemija, retikulosarkom, limfosarkom, sistemski eritematozni lupus (pretežno topli, redko hladni aglutinini), sifilis (hladni aglutinini), tumorji jajčnikov (Miescherjev s. zaposleni)).
c) simptomatska [virusna pljučnica (samo hladni aglutinini), kronična limfna levkemija, retikulosarkom, limfosarkom, sistemski eritematozni lupus (pretežno topli, manj pogosto hladni aglutinini), sifilis (hladni aglutinini), tumorji jajčnikov (Miescher et al.)).

Klinika hemolitične anemije, ki se razvija pod vplivom avtoimunskih teles, je zelo raznolika, zato je komaj mogoče narisati njihovo splošno klinična slika. Enakomerno so prizadete osebe vseh starosti in obeh spolov. Vendar se zdi, da so idiopatske oblike pogostejše pri ženskah (Sacks in Workman).

Klinična slika idiopatske oblike razlikuje glede na resnost bolezni. V kroničnih primerih je začetek postopen, bolezen traja več let s pogostimi poslabšanji. Resnost anemije se razlikuje glede na stopnjo hemolize. Opaženi so padci hemoglobina do 10%, v drugih primerih se hemoglobin zadrži dolgo časa za 50-60%. Intenzivnost retikulocitoze in ikterične barve kože in seruma ustreza stopnji hemolize. Bilirubin se zelo redko nahaja v urinu, ker ne prehaja skozi ledvice, opazimo pa hemoglobinurijo. Vranica je v kroničnih primerih pogosto povečana in lahko doseže celo zelo velike velikosti, v drugih primerih pa je še vedno otipljiva. Jetra so redko povečana.

V večini primerov v krvi opazimo makrocitozo akutne faze veliko je tudi mikrocitov, normoblastoza in polikromazija sta redko odsotni, levkocitoza lahko doseže 30.000, trombociti so normalni. V nekaterih primerih pa je izrazita trombocitopenija. Evans te primere pojasnjuje s hkratno prisotnostjo protiteles proti trombocitom, tako da pride do hemolitične anemije in trombocitopenije zaradi delovanja avtoimunskih teles – Evansov sindrom (Evans). Osmotska rezistenca je rahlo zmanjšana, vendar ne v tolikšni meri in ne tako trajno kot pri konstitucionalni sferičnocelični anemiji. Test toplotne odpornosti (Hegglin-Maier) po 6 urah lahko tudi povzroči rahlo hemolizo (lastno opažanje), vendar v manjši meri kot pri Marchiafavi anemiji. Hemosiderin najdemo tudi v urinu (lastno opažanje).

Coombsov test

Coombsov test- antiglobulinski test, namenjen odkrivanju v Rh-negativni krvi nepopolnih antieritrocitnih protiteles proti Rh faktorju - specifičnemu proteinu, ki se nahaja na površini eritrocitov Rh-pozitivne krvi. Obstajata dve vrsti tega testa: neposredno - odkrivanje protiteles na površini rdečih krvničk, posredno - odkrivanje protiteles v krvnem serumu. Neposredni test se izvaja pri diagnostiki in spremljanju zdravljenja krvnih bolezni: hemolitična anemija, hemolitična bolezen novorojenčka in druge. Posredni test se izvede za oceno združljivosti krvi darovalca in prejemnika med transfuzijo ter za določitev prisotnosti in tveganja Rh konflikta pri načrtovanju in vodenju nosečnosti. Material za Coombsov test je deoksigenirano kri, študija se izvaja z metodami, ki temeljijo na reakciji aglutinacije. Običajno sta oba testa negativna. Analiza se izvede v enem dnevu.

Coombsov test - klinično preskušanje Rh-negativna kri, namenjena odkrivanju protiteles proti Rh faktorju. Test se uporablja za ugotavljanje tveganja za nastanek Rhesus konflikta in hemolitičnih reakcij. Pri vsaki osebi površina eritrocitov vsebuje določen niz antigenov ali aglutinogenov - spojin različne narave, katerih prisotnost ali odsotnost se uporablja za presojo krvne skupine in Rh faktorja. Obstaja veliko vrst antigenov, v medicinski praksi pa sta najpomembnejša aglutinogena A in B, ki določata krvno skupino, ter aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorjem se antigeni D odkrijejo na zunanji membrani eritrocitov, z negativnim - ne.

Coombsov test, imenovan tudi antiglobulinski test, je namenjen ugotavljanju nepopolnih antieritrocitnih protiteles proti sistemu Rh faktorja v krvi. Protitelesa proti Rh faktorju so specifični imunoglobulini, ki nastajajo v Rh negativni krvi, ko vanjo vstopijo eritrociti z aglutinogeni D. To se lahko zgodi pri mešanju krvi ploda in nosečnice, pri transfuzijah krvi brez predhodne krvne skupine. Coombsov test obstaja v dveh različicah - neposredni in posredni. Pri izvajanju neposrednega Coombsovega testa se protitelesa zaznajo pritrjena na površino rdečih krvnih celic. Študija se uporablja za določitev vzroka hemolitične reakcije. Indirektni Coombsov test je namenjen odkrivanju protiteles proti eritrocitom v krvni plazmi. Treba je določiti združljivost krvi darovalca in prejemnika ali matere in ploda, pomaga preprečiti razvoj Rhesus konflikta in posledično hemolizo rdečih krvnih celic.

Krv za obe različici Coombsovega testa se vzame iz vene. Analiza se izvaja z metodo aglutinacije z uporabo antiglobulinskega seruma. Rezultati študije se uporabljajo v hematologiji pri ugotavljanju vzrokov hemolitičnih reakcij, v kirurgiji in oživljanju med transfuzijo krvi, v porodništvu in ginekologiji pri spremljanju nosečnosti pri ženskah z Rh negativno krvjo.

Indikacije

Direktni Coombsov test, ki odkriva protitelesa, pritrjena na površino rdečih krvnih celic, je predpisan za hemolitične reakcije (uničenje rdečih krvničk) različnega izvora. Študija je indicirana za primarno avtoimunsko hemolitično anemijo, posttransfuzijsko hemolitično anemijo, hemolitično bolezen novorojenčka, hemolizo eritrocitov, ki jo povzroča avtoimunska, tumorska ali nalezljive bolezni, kot tudi prejemanje zdravila na primer kinidin, metildopa, prokainamid. Indirektni Coombsov test, ki zazna protitelesa v krvni plazmi, se uporablja za preprečevanje razvoja Rhesus konflikta. Indicirano je za bolnike, ki se pripravljajo na transfuzijo krvi, pa tudi za nosečnice z negativnim Rh faktorjem, pod pogojem, da ima bodoči oče otroka pozitiven Rh faktor.

Za določitev združljivosti Rh se Coombsov test ne izvaja pri bolnikih z Rh pozitivno krvjo. V teh primerih so na površini rdečih krvničk že antigeni, nastajanja protiteles ne moremo sprožiti s transfuzijo krvi ali vdorom krvi ploda v krvni obtok nosečnice. Prav tako študija ni indicirana za nosečnice, če imata oba starša negativen Rh faktor, dedno recesivno lastnost. Otrok v takšnih parih ima vedno Rh negativno kri, imunološki konflikt z materjo je nemogoč. Pri hemolitičnih patologijah se antiglobulinski test ne uporablja za spremljanje uspešnosti terapije, saj rezultati ne odražajo aktivnosti procesa uničenja eritrocitov.

Omejitev Coombsovega testa je zapletenost raziskovalnega postopka - za pridobitev zanesljivih rezultatov je potrebno upoštevati temperaturne in časovne pogoje, pravila za pripravo reagentov in biomateriala. Prednost Coombsovega testa je njegova visoka občutljivost. Pri hemolitični anemiji ostanejo rezultati te analize pozitivni, tudi če se hemoglobin, bilirubin in retikulociti normalizirajo.

Priprava na analizo in zbiranje materiala

Material za izvedbo Coombsovega testa je venska kri. Za čas postopka odvzema krvi in pripravo pacienta ni posebnih zahtev. Kot pri vsaki študiji je priporočljivo, da si po jedi vzamete vsaj 4-urni odmor, v zadnjih 30 minutah pa prenehate kaditi, telesna aktivnost izogibajte se čustvenemu stresu. Prav tako je vredno vnaprej razpravljati s svojim zdravnikom o potrebi po prenehanju jemanja zdravil - nekatera zdravila lahko izkrivljajo rezultate Coombsovega testa. Kri se odvzame z brizgo iz kubitalne vene, redkeje iz vene na zadnji strani roke. V nekaj urah je material dostavljen v laboratorij.

Pri izvajanju neposrednega Coombsovega testa pacientovemu krvnemu serumu dodamo antiglobulinski serum. Po določenem času se mešanica pregleda na prisotnost aglutinatov - nastanejo, če so protitelesa na rdečih krvnih celicah. S pozitivnim rezultatom se določi aglutinacijski titer. Indirektni Coombsov test je sestavljen iz več korakov. Najprej se protitelesa, prisotna v serumu, med inkubacijo fiksirajo na vbrizgane eritrocite. Nato vzorcu dodamo antiglobulinski serum, čez nekaj časa določimo prisotnost in titer aglutinatov. Obdobje analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Običajno je rezultat neposrednega Coombsovega testa negativen (-). To pomeni, da v krvi ni protiteles, povezanih z rdečimi krvnimi celicami, in ne morejo biti vzrok za hemolizo. Normalen rezultat posredni Coombsov test je tudi negativen (-), to pomeni, da v krvni plazmi ni protiteles proti faktorju Rh. Pri pripravi na transfuzijo krvi za prejemnika to pomeni združljivost s krvjo darovalca, med spremljanjem nosečnosti - odsotnost Rh senzibilizacije matere, majhno tveganje za nastanek imunološkega konflikta. Fiziološki dejavniki, kot so prehranjevalne navade ali telesna aktivnost, ne morejo vplivati na rezultat testa. Če je rezultat pozitiven, je torej potrebno posvetovanje z zdravnikom.

Diagnostična vrednost analize

Pozitiven rezultat Coombsovega testa je izražen kvalitativno, od (+) do (++++), ali kvantitativno, v titrih od 1:16 do 1:256. Določanje koncentracije protiteles na eritrocitih in v krvnem serumu izvajamo v obeh vrstah vzorcev. Pri pozitivnem rezultatu neposrednega Coombsovega testa se na zunanji membrani rdečih krvničk odkrijejo protitelesa, ki povzročijo uničenje teh krvnih celic. Vzrok je lahko transfuzija krvi brez predhodne tipizacije - potransfuzijska hemolitična reakcija, pa tudi neonatalna eritroblastoza, hemolitična reakcija zaradi uporabe zdravil, primarna ali sekundarna avtoimunska hemolitična anemija. Sekundarno uničenje eritrocitov lahko povzroči sistemski eritematozni lupus, Evansov sindrom, Waldenströmova makroglobulinemija, paroksizmalna hladna hemoglobinurija, kronična limfocitna levkemija, limfom, infekcijska mononukleoza, sifilis, mikoplazmalna pljučnica.

Pozitiven rezultat indirektnega Coombsovega testa kaže na prisotnost protiteles proti faktorju Rh v plazmi. V praksi to pomeni, da je prišlo do Rh senzibilizacije, obstaja možnost razvoja Rh konflikta po infuziji krvi darovalca med nosečnostjo. Za preprečevanje zapletov v nosečnosti pri ženskah z pozitiven rezultat Coombsov test se da na poseben račun.

Zdravljenje odstopanj od norme

Coombsov test se nanaša na izoserološke študije. Njegovi rezultati omogočajo identifikacijo hemolitične reakcije, pa tudi določitev združljivosti krvi darovalca in prejemnika, matere in ploda, da se prepreči razvoj Rhesus konflikta. Če je rezultat testa pozitiven, je potrebno poiskati nasvet lečečega zdravnika - porodničarja-ginekologa, hematologa, kirurga.