Teigiama Kumbso reakcija. Koks yra Kumbso testo tikslas? „Šiltų“ antikūnų aptikimas

Raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra didelis skaičius antigenai. Priklausomai nuo šių antigenų tipo, išskiriamos kraujo grupės, labiausiai tirtos grupės yra ABO, Rh, Kell, Duffy ir daugelis kitų...

Vidutinė kaina jūsų regione: 2645 nuo 2645 ... iki 2645

Jūsų regione šią analizę atlieka 1 laboratorija

Tyrimo aprašymas

Pasiruošimas studijoms: Kraujas paimamas iš venos, o serumas (kraujo plazma be fibrinogeno) gaunamas natūraliai krešėjant arba nusodinant fibrinogeną. Bandymo medžiaga: Kraujo paėmimas

Raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra daug antigenų. Priklausomai nuo šių antigenų tipo, išskiriamos kraujo grupės, labiausiai tiriamos ABO, Rh, Kell, Duffy ir daugelis kitų sistemų. Paprastai kraujyje yra antikūnų prieš kitos grupės antigenus, tačiau kraujo perpylimo, nėštumo metu autoimuninės ligos ir tt aptinkami antikūnai prieš jų antigenus.Nepilni antikūnai prieš eritrocitus

Metodas

Netiesioginė Kumbso reakcija pagrįsta raudonųjų kraujo kūnelių, kurių paviršiuje yra nepilnų antikūnų, agliutinacijos (sulipimo) aptikimu, kuris atsiranda, kai pridedamas antiglobulino serumas.

Pirmajame etape į vieną mėgintuvėlį supilami donoro raudonieji kraujo kūneliai (O(I) grupė, Rh+) ​​ir tiriamasis serumas. Jei tiriamajame serume yra nepilnų antikūnų prieš raudonuosius kraujo kūnelius, jie fiksuojami ant donoro raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus.

Antrame etape ant stiklo uždedami donorų raudonieji kraujo kūneliai su antikūnais (jei yra) ir standartinis antiglobulino serumas su antikūnais prieš žmogaus imunoglobulinus. Jei pirmajame etape raudonųjų kraujo kūnelių antikūnai fiksuojami ant raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus, tada, pridėjus standartinio serumo, raudonieji kraujo kūneliai sulimpa dėl antikūnų sąveikos.

Etaloninės vertės - norma
(Netiesioginis Kumbso testas (antiglobulino testas, neišsamių anti-eritrocitų antikūnų nustatymas), kraujas)

Informacija apie rodiklių pamatines vertes, taip pat į analizę įtrauktų rodiklių sudėtį gali šiek tiek skirtis priklausomai nuo laboratorijos!

Norma:

Paprastai antikūnų prieš savo raudonuosius kraujo kūnelius neturėtų būti; kai atliekamas Kumbso testas, raudonųjų kraujo kūnelių agregacija nevyksta.

Indikacijos

Humoralinio specifinio imuniteto tyrimas įtariamų autoimuninių organizmo reakcijų atvejais, Rh konfliktas tarp motinos ir vaisiaus, donoro ir recipiento kraujo suderinamumo nustatymas

Didėjančios reikšmės (teigiamas rezultatas)

Antikūnai prieš raudonuosius kraujo kūnelius aptinkami, kai:

1. Autoimuninė hemolizinė anemija

2. Naujagimio hemolizinė liga

3. Sisteminės jungiamojo audinio ligos

4. Lėtinis aktyvus hepatitas ir kt.

Antikūnai, esantis eritrocitų paviršiuje, gali būti statinės arba laisvos kraujo plazma. Priklausomai nuo antikūnų būklės, atliekama tiesioginė arba netiesioginė Kumbso reakcija. Jei yra pagrindo manyti, kad antikūnai yra fiksuoti raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, atliekamas tiesioginis Kumbso testas. Šiuo atveju testas praeina vienu etapu – pridedamas antiglobulino serumas. Jei raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra nepilnų antikūnų, agliutinacija raudonieji kraujo kūneliai

Netiesioginė reakcija

Netiesioginė Kumbso reakcija vyksta 2 etapais. Pirma, būtina dirbtinai įgyvendinti jautrinimas raudonieji kraujo kūneliai Tam tiriami eritrocitai ir kraujo serumas yra inkubuojami, o tai sukelia antikūnų fiksaciją eritrocitų paviršiuje. Po to atliekamas antrasis Kumbso testo etapas - antiglobulino serumo pridėjimas.

Kritulių reakcija - RP (iš Lat praecipilo į nuosėdas) yra tirpaus molekulinio antigeno komplekso su antikūnais susidarymas ir nusodinimas drumstumo pavidalu, vadinamasis. nuosėdos. Jis susidaro sumaišius antigenus ir antikūnus lygiaverčiais kiekiais, vieno iš jų perteklius sumažina imuninio komplekso susidarymo lygį. Nusodinimo reakcija dedama į mėgintuvėlius (žiedo nusodinimo reakcija), į gelius, maistines terpes ir kt. Plačiai naudojamos įvairios nusodinimo reakcijos pusiau skystame agaro arba agarozės gelyje, dviguba imunodifuzija pagal Ouchterlony, radžio imunodifuzija, imunoelektroforezė ir kt.

HLA tipavimas- žmogaus pagrindinio histokompatibilumo komplekso – ŽLA komplekso tyrimas. Šis darinys apima 6 chromosomos genų sritį, koduojančią HLA antigenus, dalyvaujančius įvairiuose imuniniuose atsakuose.

Užduotys skirtos HLA tipavimas gali būti labai įvairus – biologinis identifikavimas (HLA tipas paveldimas kartu su tėvų genais), polinkio sirgti įvairiomis ligomis nustatymas, donorų atranka organų transplantacijai – tokiu atveju lyginami donoro ir recipiento audinių HLA tipo nustatymo rezultatai. Naudojant ŽLA tipavimą, nustatoma, kiek sutuoktiniai yra panašūs ar skiriasi pagal histokompatibilumo antigenus, siekiant diagnozuoti nevaisingumo atvejus.

ŽLA tipavimas siūlo ŽLA polimorfizmo analizė ir atliekama dviem metodais – serologiniu ir molekuliniu genetiniu. Klasikinis serologinis ŽLA tipavimo metodas pagrįstas mikrolimfocitotoksiniu tyrimu, o molekuliniame – PGR (polimerazės grandininė reakcija).

Serologinis HLA tipavimas atliekama su izoliuotomis ląstelių populiacijomis. Pagrindinius histokompatibilumo komplekso antigenus daugiausia nešioja limfocitai. Todėl T limfocitų suspensija naudojama kaip pagrindiniai I klasės antigenų nešėjai, o B limfocitų suspensija II klasės ŽLA antigenams nustatyti. Norint atskirti reikiamas ląstelių populiacijas nuo viso kraujo, naudojama centrifuga arba imunomagnetinis atskyrimas. Manoma, kad pirmasis metodas gali sukelti klaidingai teigiamus duomenis, nes dėl to kai kurios ląstelės miršta. Antrasis metodas yra pripažintas specifiškesniu – daugiau nei 95% ląstelių išlieka gyvybingos.

Bet pagrindas atlikti limfocitotoksinį tyrimą HLA tipavimas yra specifinis serumas, kuriame yra antikūnų prieš įvairius HLA I ir II klasės antigenų alelinius variantus. Serologinis tyrimas gali nustatyti ŽLA tipą, tiriant, kurie serumai reaguoja su limfocitais, o kurie ne.

Jei tarp ląstelių ir serumo įvyksta reakcija, ląstelės paviršiuje susidaro antigeno-antikūno kompleksas. Pridėjus tirpalo, kuriame yra komplemento, įvyksta ląstelių lizė ir mirtis. Serologinis ŽLA tipo nustatymo tyrimas vertinamas naudojant fluorescencinę mikroskopiją, siekiant įvertinti teigiamas (raudona fluorescencija) ir neigiamas (žalia fluorescencija) reakcijas, arba fazinio kontrasto mikroskopiją, kad būtų nudažyti negyvų ląstelių branduoliai. ŽLA tipavimo rezultatas gaunamas atsižvelgiant į sureagavusių serumų ir kryžmiškai reaguojančių antigenų grupių specifiškumą, citotoksiškumo reakcijos intensyvumą.

Serologinio gydymo trūkumai HLA tipavimas yra kryžminių reakcijų buvimas, silpnas antikūnų afinitetas arba maža ŽLA antigenų ekspresija, baltymų produktų nebuvimas daugelyje ŽLA genų.

Modernesni, molekuliniai metodai HLA tipavimas naudojami jau standartizuoti sintetiniai mėginiai, kurie reaguoja ne su leukocitų paviršiuje esančiais antigenais, o su DNR ir tiesiogiai nurodo, kokių antigenų yra mėginyje. Molekuliniams metodams nereikia gyvų leukocitų, galima tirti bet kurią žmogaus ląstelę, o darbui pakanka kelių mikrolitrų kraujo arba apsiriboti burnos gleivinės nukrapštymu.

Molekulinė genetinė HLA tipavimas naudoja PGR metodą, kurio pirmas žingsnis – grynos genominės DNR gavimas (iš viso kraujo, leukocitų suspensijos, audinių).

Tada DNR mėginys nukopijuojamas – amplifikuojamas mėgintuvėlyje naudojant pradmenis (trumpą viengrandę DNR), būdingus konkrečiam ŽLA lokusui. Kiekvienos pradmenų poros galai turi būti griežtai papildantys unikalią seką, atitinkančią tam tikrą alelį, kitaip amplifikacija nevyksta.

Po PGR pakartotinio kopijavimo metu gaunama daug DNR fragmentų, kuriuos galima įvertinti vizualiai. Tam reakcijų mišiniai elektrolizuojami arba hibridizuojami ir, naudojant programą ar lentelę, nustatoma, ar įvyko konkretus amplifikavimas. ŽLA tipavimo rezultatas pateikiamas kaip išsami ataskaita genų ir alelių lygiais. Dėl naudojamų mėginių standartizacijos, molekulinės HLA tipavimas tiksliau serologinis. Be to, ji suteikia daugiau informacijos (daugiau naujų DNR alelių) ir aukštesnį detalumo lygį, nes leidžia identifikuoti ne tik antigenus, bet ir pačius alelius, kurie nustato, koks antigenas yra ląstelėje.

Imuninės lizės reakcija. Reakcija pagrįsta specifinių antikūnų gebėjimu sudaryti imuninius kompleksus su ląstelėmis, įskaitant eritrocitus ir bakterijas, o tai sukelia komplemento sistemos aktyvavimą klasikiniu būdu ir ląstelių lizę. Iš imuninės lizės reakcijų dažniausiai naudojama hemolizės reakcija, o bakteriolizės reakcija – retai (daugiausia diferencijuojant cholerą ir į cholerą panašius vibrionus).

Hemolizės reakcija. Veikiant reakcijai su antikūnais, esant komplementui, drumsta raudonųjų kraujo kūnelių suspensija virsta ryškiai raudonu skaidriu skysčiu - „lako krauju“ dėl hemoglobino išsiskyrimo. Nustatant diagnostinę komplemento fiksavimo reakciją (FFR), hemolizės reakcija naudojama kaip indikatorius: laisvo komplemento buvimui ar nebuvimui (fiksacijai) patikrinti.

Vietinė hemolizės reakcija gelyje(Erne reakcija) yra vienas iš hemolizės reakcijos variantų. Tai leidžia nustatyti antikūnus formuojančių ląstelių skaičių. Ląstelių, išskiriančių antikūnus – hemolizinus, skaičius nustatomas pagal hemolizės apnašų skaičių, atsirandančių agaro gelyje, kuriame yra eritrocitų – tiriamo limfoidinio audinio ląstelių suspensijos ir komplemento.

Imunofluorescencinis metodas

(RIF, imunofluorescencinė reakcija) yra specifinių Ag (Ab) aptikimo metodas, naudojant Abs (Ags), konjuguotus su fluorochromu. Jis pasižymi dideliu jautrumu ir specifiškumu. Naudojamas greitajai infekcijų diagnostikai. ligų (patogeno identifikavimas tyrimo medžiagoje), taip pat leukocitų Ab ir paviršiaus receptoriams bei žymenims nustatyti (imunofenotipui nustatyti) ir kitoms ląstelėms. Tiesioginis I. m. susideda iš audinio pjūvio arba patologinės medžiagos arba mikrobinės plutos tepinėlio apdorojimo, kuriame yra specifinių Abs, konjuguotų su fluorochromu; preparatas nuplaunamas, kad būtų pašalintas nesurištas Abs, ir tiriamas fluorescenciniu mikroskopu. Teigiamais atvejais aplink objekto periferiją atsiranda švytintis imuninis kompleksas. Kontroliuoti būtina, kad būtų išvengta nespecifinės liuminescencijos. At netiesioginis. Juos. pirmajame etape audinio pjūvis arba tepinėlis apdorojamas nefluorescencine specifine priemone, antrajame - liuminescencine priemone prieš gyvūno -globulinus, kurie buvo naudojami pirmajame etape. Teigiamu atveju susidaro šviesos kompleksas, susidedantis iš Ar, At to ir At prieš At (sumuštinių metodas). Be fluorescencinio mikroskopo, nustatant ląstelių fenotipą atsižvelgiama į RIF. lazerinis ląstelių rūšiatorius .

Srauto citometrija- ląstelės, jos organelių ir joje vykstančių procesų parametrų optinio matavimo metodas.

Metodas apima šviesos sklaidos iš lazerio spindulio aptikimą, kai ląstelė praeina per jį skysčio sraute, o šviesos sklaidos laipsnis leidžia susidaryti supratimą apie ląstelės dydį ir struktūrą. Be to, atliekant analizę atsižvelgiama į cheminių junginių, kurie yra ląstelės dalis (autofluorescencija) arba pridedami prie mėginio prieš srauto citometriją, fluorescencijos lygį.

Ląstelių suspensija, iš anksto pažymėta fluorescenciniais monokloniniais antikūnais arba fluorescuojančiais dažais, patenka į skysčio srautą, einantį per srauto ląstelę. Sąlygos parenkamos taip, kad ląstelės išsirikiuotų viena po kitos dėl vadinamųjų. hidrodinaminis purkštuko fokusavimas srove. Tuo metu, kai ląstelė kerta lazerio spindulį, detektoriai registruoja:

šviesos sklaida mažais kampais (nuo 1° iki 10°) ( ši savybė naudojamas ląstelių dydžiui nustatyti).

šviesos sklaida 90° kampu (leidžia spręsti apie branduolio/citoplazmos santykį, taip pat apie ląstelių nevienalytiškumą ir granuliuotumą).

fluorescencijos intensyvumas per kelis fluorescencijos kanalus (nuo 2 iki 18-20) - leidžia nustatyti ląstelių suspensijos subpopuliacijos sudėtį ir kt.

– antiglobulino testas, skirtas Rh neigiamame kraujyje nustatyti nepilnus anti-eritrocitų antikūnus prieš Rh faktorių – specifinį baltymą, esantį Rh teigiamo kraujo eritrocitų paviršiuje. Yra du šio tyrimo tipai: tiesioginis – antikūnų nustatymas raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, netiesioginis – antikūnų nustatymas kraujo serume. Tiesioginiai tyrimai atliekami diagnozuojant ir gydant kraujo ligas: hemolizinę anemiją, hemolizinė liga naujagimiai ir kiti. Netiesioginis tyrimas atliekamas siekiant įvertinti donoro ir recipiento kraujo suderinamumą perpylimo metu, taip pat nustatyti Rh konflikto buvimą ir riziką planuojant ir valdant nėštumą. Kumbso testo medžiaga yra deguonies pašalintas kraujas, tyrimas atliekamas naudojant agliutinacijos reakcija paremtus metodus. Paprastai abu testai duoda neigiamas rezultatas. Analizė atliekama per vieną dieną.

Kumbso testas – klinikinis tyrimas Rh neigiamas kraujas, skirtas aptikti antikūnus prieš Rh faktorių. Testas naudojamas Rh konflikto ir hemolizinių reakcijų atsiradimo rizikai nustatyti. Kiekvieno žmogaus raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra tam tikras antigenų arba agliutinogenų rinkinys – įvairios prigimties junginiai, kurių buvimas ar nebuvimas naudojamas kraujo grupei ir Rh faktoriui nustatyti. Antigenų yra daug rūšių, medicinos praktikoje didžiausią praktinę reikšmę turi agliutinogenai A ir B, nustatantys kraujo grupę, ir agliutinogenas D, Rh faktorius. Esant teigiamam Rh faktoriui, D antigenai aptinkami ant išorinės eritrocitų membranos, o esant neigiamam faktoriui – ne.

Kumbso testu, kuris dar vadinamas antiglobulino testu, siekiama nustatyti nepilnus anti-eritrocitinius antikūnus prieš Rh faktoriaus sistemą kraujyje. Antikūnai prieš Rh faktorių – tai specifiniai imunoglobulinai, kurie gaminasi Rh neigiamame kraujyje, kai į jį patenka eritrocitai su agliutinogenais D. Tai gali atsirasti susimaišius vaisiaus ir nėščios moters kraujui, perpylus kraują be išankstinio kraujo nustatymo. Kumbso testas egzistuoja dviem versijomis – tiesioginiu ir netiesioginiu. Atliekant tiesioginį Kumbso testą, aptinkami antikūnai, pritvirtinti prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus. Tyrimas naudojamas hemolizinės reakcijos priežasčiai nustatyti. Netiesioginis Kumbso testas skirtas anti-eritrocitų antikūnų aptikimui kraujo plazmoje. Būtina nustatyti kraujo suderinamumą tarp donoro ir recipiento arba motinos ir vaisiaus ir padeda išvengti Rh konflikto išsivystymo ir vėlesnės raudonųjų kraujo kūnelių hemolizės.

Abiejų Kumbso testo versijų kraujas imamas iš venos. Analizė atliekama agliutinacijos būdu, naudojant antiglobulino serumą. Tyrimo rezultatai naudojami hematologijoje hemolizinių reakcijų priežastims nustatyti, chirurgijoje ir reanimacijoje perpilant kraują, akušerijoje ir ginekologijoje stebint nėštumą moterims, turinčioms Rh neigiamą kraują.

Indikacijos

Esant įvairios kilmės hemolizinėms reakcijoms (raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimui), skiriamas tiesioginis Kumbso testas, aptinkantis prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus prisitvirtinusius antikūnus. Tyrimas skirtas pirminei autoimuninei hemolizinei anemijai, potransfuzinei hemolizinei anemijai, naujagimio hemolizinei ligai, eritrocitų hemolizei, kurią sukelia autoimuninė, naviko ar užkrečiamos ligos, taip pat priėmimas vaistai pavyzdžiui, chinidinas, metildopa, prokainamidas. Netiesioginis Kumbso testas, nustatantis antikūnus kraujo plazmoje, naudojamas siekiant užkirsti kelią Rh konflikto vystymuisi. Jis skirtas pacientams, besiruošiantiems kraujo perpylimui, taip pat nėščiosioms, turinčioms neigiamą Rh faktorių, jei būsimas vaiko tėvas turi teigiamą Rh faktorių.

Norint nustatyti Rh suderinamumą, Kumbso testas neskiriamas pacientams, kurių kraujas Rh teigiamas. Tokiais atvejais raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje jau yra antigenų, antikūnų gamybos negali išprovokuoti kraujo perpylimas ar vaisiaus kraujo patekimas į nėščiosios kraują. Taip pat tyrimas neindikuotinas nėščiosioms, jei abu tėvai turi neigiamą Rh faktorių – paveldimą recesyvinį požymį. Tokių porų vaikas visada turi Rh neigiamą kraują, imunologinis konfliktas su motina yra neįmanomas. Esant hemolizinėms patologijoms, antiglobulino testas nenaudojamas gydymo sėkmei stebėti, nes rezultatai neatspindi raudonųjų kraujo kūnelių naikinimo proceso aktyvumo.

Kumbso testo apribojimas yra tyrimo procedūros sudėtingumas – norint gauti patikimus rezultatus, būtina laikytis temperatūros ir laiko sąlygų, reagentų ir biomedžiagos paruošimo taisyklių. Kumbso testo pranašumai yra didelis jautrumas. Sergant hemolizine anemija, šio tyrimo rezultatai išlieka teigiami, net jei hemoglobino, bilirubino ir retikulocitų kiekis normalizuojasi.

Pasirengimas analizei ir medžiagos rinkimas

Medžiaga, naudojama Kumbso tyrimui atlikti, yra veninis kraujas. Specialių reikalavimų kraujo paėmimo procedūros laikui ir paciento paruošimui nėra. Kaip ir bet kurio tyrimo metu, pavalgius rekomenduojama daryti bent 4 valandų pertrauką, o per paskutines 30 minučių mesti rūkyti. fizinė veikla, venkite emocinio streso. Taip pat verta iš anksto aptarti su gydytoju, ar reikia nutraukti vaistų vartojimą – kai kurie vaistai gali iškreipti Kumbso testo rezultatus. Kraujas imamas švirkštu iš kubitalinės venos arba rečiau iš venos plaštakos gale. Per kelias valandas medžiaga pristatoma į laboratoriją.

Atliekant tiesioginį Kumbso testą, į paciento kraujo serumą pridedamas antiglobulino serumas. Po kurio laiko mišinys tiriamas, ar nėra agliutinatų – jie susidaro, jei ant raudonųjų kraujo kūnelių yra antikūnų. Jei rezultatas teigiamas, nustatomas agliutinacijos titras. Netiesioginis Kumbso testas susideda iš daugiau žingsnių. Pirma, serume esantys antikūnai fiksuojami ant suleistų raudonųjų kraujo kūnelių inkubacijos metu. Tada į mėginį pridedamas antiglobulino serumas, po kurio laiko nustatomas agliutinatų buvimas ir titras. Analizės laikotarpis yra 1 diena.

Normalūs rezultatai

Paprastai tiesioginio Kumbso testo rezultatas yra neigiamas (-). Tai reiškia, kad kraujyje nėra su raudonaisiais kraujo kūneliais susijusių antikūnų ir jie negali sukelti hemolizės. Normalus rezultatas Netiesioginis Kumbso testas taip pat yra neigiamas (-), tai yra, kraujo plazmoje nėra antikūnų prieš Rh faktorių. Rengiantis recipiento kraujo perpylimui, tai reiškia suderinamumą su donoro krauju, o stebint nėštumą – motinos Rh jautrinimo nebuvimą, mažą imunologinio konflikto išsivystymo riziką. Fiziologiniai veiksniai, tokie kaip dieta ar fizinis aktyvumas, negali turėti įtakos tyrimo rezultatui. Todėl, jei rezultatas yra teigiamas, būtina gydytojo konsultacija.

Diagnostinė analizės vertė

Teigiamas Kumbso testo rezultatas išreiškiamas kokybiškai nuo (+) iki (++++) arba kiekybiškai, titrais nuo 1:16 iki 1:256. Antikūnų koncentracija ant raudonųjų kraujo kūnelių ir kraujo serume nustatoma abiejų tipų mėginiuose. Jei tiesioginis Kumbso testas yra teigiamas, ant išorinės raudonųjų kraujo kūnelių membranos aptinkami antikūnai, dėl kurių šie kraujo kūneliai sunaikinami. Priežastis gali būti kraujo perpylimas be išankstinio tipavimo – hemolizinė reakcija po perpylimo, taip pat naujagimio eritroblastozė, hemolizinė reakcija dėl vaistų vartojimo, pirminė ar antrinė autoimuninė hemolizinė anemija. Antrinį raudonųjų kraujo kūnelių destrukciją gali sukelti sisteminė raudonoji vilkligė, Evanso sindromas, Waldenströmo makroglobulinemija, paroksizminė šalta hemoglobinurija, lėtinė limfocitinė leukemija, limfoma, infekcinė mononukleozė, sifilis, mikoplazminė pneumonija.

Teigiamas netiesioginio Kumbso testo rezultatas rodo, kad plazmoje yra antikūnų prieš Rh faktorių. Praktiškai tai reiškia, kad įvyko Rh sensibilizacija ir nėštumo metu po donoro kraujo infuzijos gali išsivystyti Rh konfliktas. Siekdamos išvengti nėštumo komplikacijų, moterys su teigiamas rezultatas Kumbso testas įrašomas į specialius įrašus.

Anomalijų gydymas

Kumbso testas susijęs su izoserologiniais tyrimais. Jo rezultatai leidžia nustatyti hemolizinę reakciją, taip pat nustatyti donoro ir recipiento, motinos ir vaisiaus kraujo suderinamumą, kad būtų išvengta Rh konflikto vystymosi. Jei tyrimo rezultatas yra teigiamas, turite kreiptis į savo gydantį gydytoją - akušerį-ginekologą, hematologą, chirurgą.

Agliutinacijos reakcija, skirta nustatyti anti-reuso antikūnus ( netiesioginė reakcija Combs)taikyti pacientams, kuriems yra intravaskulinė hemolizė. Kai kuriems iš šių pacientų aptinkami anti-reuso antikūnai, kurie yra neišsamūs ir monovalentiniai. Jie konkrečiai sąveikauja su Rh teigiamais eritrocitais, bet nesukelia jų agliutinacijos. Tokių nepilnų antikūnų buvimas nustatomas atliekant netiesioginį Kumbso testą. Norėdami tai padaryti, į anti-Rh antikūnų + Rh teigiamų eritrocitų sistemą pridedamas antiglobulino serumas (antikūnai prieš žmogaus imunoglobulinus), kuris sukelia eritrocitų agliutinaciją. Naudojant Kumbso reakciją, diagnozuojamos patologinės būklės, susijusios su imuninės kilmės eritrocitų intravaskuline lize, pavyzdžiui, naujagimio hemolizinė liga: Rh teigiamo vaisiaus eritrocitai susijungia su kraujyje cirkuliuojančiais nepilnais Rh faktoriaus antikūnais, per placentą perėjo iš Rh neigiamos motinos.

Mechanizmas. Sunku identifikuoti nepilnus (monovalentinius) antikūnus dėl to, kad šie antikūnai, jungdamiesi prie specifinio antigeno epitopų, nesudaro gardelės struktūros, o antigenų ir antikūnų reakcija neaptinkama nei agliutinacijos, nei kritulių būdu, ar kitus testus. Norint nustatyti susidariusius antigeno-antikūno kompleksus, būtina naudoti papildomas tyrimo sistemas. Norint nustatyti nepilnus antikūnus, pavyzdžiui, prieš eritrocitų Rh antigeną nėščios moters kraujo serume, reakcija vykdoma dviem etapais: 1) eritrocitai, turintys Rh antigeno, pridedami prie dvigubo tiriamojo serumo skiedimo ir laikomi. 37 ° C temperatūroje valandą; 2) triušio anti-žmogaus antiglobulino serumas (iš anksto titruotas darbinis skiedimas) pridedamas prie eritrocitų, kruopščiai nuplautų po pirmojo etapo. Po 30 minučių inkubacijos 37 °C temperatūroje rezultatai įvertinami pagal hemagliutinaciją (teigiama reakcija). Būtina kontroliuoti reakcijos sudedamąsias dalis: 1) antiglobulino serumą + raudonuosius kraujo kūnelius, kurie, kaip žinoma, yra įjautrinti specifiniais antikūnais; 2) eritrocitai, gydyti normaliu serumu + antiglobulino serumas; 3) Rh neigiami eritrocitai, apdoroti tiriamuoju serumu + antiglobulino serumu.

50. Pasyvi hemagliutinacijos reakcija. Mechanizmas. Komponentai. Taikymas.

Netiesioginė (pasyvi) hemagliutinacijos reakcija(RNGA, RPGA) yra pagrįstas eritrocitų (arba latekso) naudojimu su ant jų paviršiuje adsorbuotais antigenais arba antikūnais, kurių sąveika su atitinkamais antikūnais arba pacientų kraujo serumo antigenais sukelia eritrocitų sulipimą ir iškrenta į dugną. vamzdelis arba ląstelė šukuotų nuosėdų pavidalu.

Komponentai. RNHA gamybai gali būti naudojami avių, arklių, triušių, vištų, pelių, žmonių ir kitų eritrocitai, kurie surenkami naudoti ateityje, apdorojami formalinu arba glutaraldehidu. Eritrocitų adsorbcijos gebėjimas padidėja, kai jie apdorojami tanino arba chromo chlorido tirpalais.

RNGA antigenais gali būti mikroorganizmų polisacharidiniai antigenai, bakterinių vakcinų ekstraktai, virusų ir riketsijų antigenai, taip pat kitos medžiagos.

Raudonieji kraujo kūneliai, įjautrinti dėl hipertenzijos, vadinami eritrocitų diagnostika. Eritrocitų diagnostikai ruošti dažniausiai naudojami avininiai eritrocitai, pasižymintys dideliu adsorbciniu aktyvumu.

Taikymas. RNHA naudojama infekcinėms ligoms diagnozuoti, gonadotropiniam hormonui šlapime nustatyti nėštumo metu, padidėjusiam jautrumui vaistams, hormonams nustatyti ir kai kuriais kitais atvejais.

Mechanizmas. Netiesioginis hemagliutinacijos testas (RIHA) turi daug didesnį jautrumą ir specifiškumą nei agliutinacijos testas. Jis naudojamas patogenui identifikuoti pagal jo antigeninę struktūrą arba tirtoje patologinėje medžiagoje nurodyti ir identifikuoti bakterinius produktus – toksinus. Atitinkamai, naudojami standartiniai (komerciniai) eritrocitų antikūnų diagnostiniai preparatai, gaunami adsorbuojant specifinius antikūnus ant taninuotų (taninu apdorotų) eritrocitų paviršiaus. Tiriamos medžiagos serijiniai skiedimai ruošiami plastikinių plokštelių šuliniuose. Tada į kiekvieną šulinėlį įpilama vienodo tūrio 3 % suspensijos su antikūnais pakrautų eritrocitų. Jei reikia, reakcija įvedama lygiagrečiai keliose šulinėlių eilėse su eritrocitais, prikrautais skirtingos grupės specifiškumo antikūnais.

Po 2 valandų inkubavimo 37 °C temperatūroje atsižvelgiama į rezultatus, įvertinant raudonųjų kraujo kūnelių nuosėdų atsiradimą (nekratant): esant neigiamai reakcijai, nuosėdos susidaro kompaktinio disko arba žiedo pavidalu. šulinio dugnas; esant teigiamai reakcijai, atsiranda būdingos nėriniuotos raudonųjų kraujo kūnelių nuosėdos, plona plėvelė su nelygiais kraštais.

Kumbso testas yra metodas laboratoriniai tyrimai, padaryta įtakojant hemagliutinaciją. Jis pagrįstas antikūnų jautrumu imunoglobulinams ir fermentų elementams, taip pat jų gebėjimu agliutinuoti eritrocitus, padengtus C3 arba Lg.

Tiesioginė Kumbso diagnozė

Naudojamas antikūnams arba komplemento komponentams, sumontuotiems ląstelių išorėje, aptikti. Tiesioginis Kumbso testas atliekamas taip.

Tokio pavyzdžio naudojimas

Tiesioginė Kumbso diagnozė naudojama tam tikrais atvejais, pavyzdžiui:

• transfuzijos poveikis;
• autoimuninė hemolizė;
• vaistų sukelta hemolizinė anemija.

Netiesioginis Kumbso testas

Ši diagnozė leidžia aptikti antikūnus prieš ląsteles serume, kuris, kaip taisyklė, yra inkubuojamas su 0 tipo donorų raudonaisiais kraujo kūneliais, o tada atliekamas tiesioginis tyrimas. Netiesioginė Kumbso diagnozė naudojama šiais atvejais:

Kaip pasiruošti analizei

Yra keletas pasiruošimo egzaminui taisyklių.

1. Jei pacientas yra naujagimis, tėvai turi žinoti, kad testas padės diagnozuoti ONH ( hemolizinė liga naujagimiai).
2. Jei pacientui kyla įtarimų dėl hemolizinės anemijos, jam reikia paaiškinti, kad analizė leis išsiaiškinti, ar ją sukėlė apsauginiai sutrikimai, vaistai ar kiti veiksniai.
3. Tiesioginis ir netiesioginis Kumbso testas nenustato jokių mitybos ar dietos apribojimų.
4. Būtina įspėti pacientą, kad tiriant reikės paimti kraują iš venos, taip pat tiksliai pasakyti, kada bus atliekama venų punkcija.
5. Taip pat turėtumėte įspėti apie nemalonių pojūčių tikimybę tvarsčio ant rankos ir pačios procedūros metu.
6. Vaistų, galinčių turėti įtakos mėginio rezultatui, vartojimą reikia nutraukti.

Šie vaistai apima:

• "Streptomicinas";
• "Metildopa";
• "Prokainamidas";
• sulfonamidai;
• "Melfalanas";
• "chinidinas";
• "Rifampinas";
• "Izoniazidas";
• cefalosporinai;
• "Hidralazinas";
• "Chlorpromazinas";
• "Levodopa";
• "Tetraciklinas";
• "Difenilhidantoinas";
• "Etosuksimidas";
• "Penicilinas";
• mefenamo rūgštis.

Kraujo mėginiai imami ryte tuščiu skrandžiu.

Kaip vyksta renginys

Kumbso testas atliekamas tokia tvarka:

1. Atliekant diagnostiką suaugusiam pacientui, po venos punkcijos kraujas imamas į mėgintuvėlius su EDTA (etilendiaminotetraacetatu).
2. Naujagimio kraujas iš virkštelės paimamas į stiklinę, kurioje yra EDTA.
3. Dūrimo vieta spaudžiama medvilniniu tamponu, kol kraujavimas sustoja.
4. Jei venos punkcijos vietoje atsiranda mėlynė, skiriami šilti kompresai.
5. Po kraujo paėmimo pacientui leidžiama vėl vartoti abstinencijos vaistus.
6. Naujagimio tėvus reikia informuoti, kad anemijos dinamikai stebėti gali prireikti antrinės analizės.

Kumbso testo privalumai

Tokie tyrimai turi keletą privalumų, būtent:

Analizės trūkumai

Teigiamas Kumbso testas yra gana daug pastangų reikalaujantis tyrimo metodas, rodantis būdingą atlikimo tikslumą. Jį naudodami galite susidurti su tam tikrais sunkumais, ypač susijusiais su silpnai teigiamo poveikio interpretavimu.

Nustatyta, kad klaidingai neigiamos arba silpnai teigiamos reakcijos gaminant Kumbso testus gali būti nepatenkinamai aktyvaus ląstelių plovimo, antiglobulino reagento susilpnėjimo serumo likučiais, taip pat jungčių su neriebiais paviršiais, ant kurių gali atsirasti antiglobulinas, pasekmės. būti pataisyta, todėl prarandamas efektyvumas.

Kumbso testas turi dar vieną trūkumą – žemą antiglobulino reagento stabilumą, kurio įsigijimas ir išsaugojimas turi individualių savybių, dėl ko panašiai sunku skaitiniu būdu įvertinti antiglobulino serumo poveikį hemagliutinacijai.

Ligos, kurias galima nustatyti tyrimo metu

Kumbso diagnostika leidžia aptikti tam tikras ligas, tokias kaip:

• hemolizinis naujagimio negalavimas;
• įvairios transfuzijos reakcijos;
• autoimuninė hemolizė;
• vaistų sukelta hemolizinė anemija.

Šiandien Kumbso testas laikomas gana populiaria kraujo tyrimo sistema tiek suaugusiems, tiek naujagimiams. Tai leidžia nustatyti daugybę skirtingų ligų.