ग्लास माइक्रोबायोलॉजी पर एग्लूटिनेशन रिएक्शन। त्वरित समूहन प्रतिक्रियाओं के लिए विकल्प। निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया और इसके प्रकार। परीक्षण के परिणामों को सरल तरीके से गूढ़ करना

विस्तारित समूहन प्रतिक्रिया (आरए). रोगी के रक्त सीरम में एटी निर्धारित करने के लिए, डालें विस्तारित समूहन प्रतिक्रिया (आरए). ऐसा करने के लिए, रक्त सीरम dilutions की एक श्रृंखला में निदान जोड़ा जाता है - मारे गए सूक्ष्मजीवों या adsorbed Ag के साथ कणों का निलंबन। अधिकतम कमजोर पड़ने दे रही है भागों का जुड़ना Ag, रक्त सीरम का टिटर कहलाता है।

एग्लूटिनेशन रिएक्शन की किस्में (आरए) एटी का पता लगाने के लिए - टुलारेमिया के लिए एक रक्त-बूंद परीक्षण (रक्त की एक बूंद पर डायग्नोस्टिकम के आवेदन के साथ और दिखाई देने वाली सफेदी एग्लूटिनेट्स की उपस्थिति) और ब्रुसेलोसिस के लिए हडलसन प्रतिक्रिया (एक डायग्नोस्टिकम के साथ जेंटियन वायलेट को एक बूंद पर लगाया जाता है) रक्त सीरम का)।

अनुमानित समूहन प्रतिक्रिया (आरए)

पृथक सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के लिए, कांच की स्लाइड्स पर अनुमानित आरए रखा जाता है। ऐसा करने के लिए, मानक डायग्नोस्टिक एंटीसेरम (1:10, 1:20 के कमजोर पड़ने पर) की एक बूंद में रोगज़नक़ की संस्कृति को जोड़ा जाता है। पर एक सकारात्मक परिणामएंटीसेरम के बढ़ते कमजोर पड़ने के साथ एक विस्तृत प्रतिक्रिया दें।

प्रतिक्रियाडायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब कमजोर पड़ने पर एग्लूटिनेशन को सकारात्मक माना जाता है।

ओएएस. दैहिक O-Agवे ऊष्मीय रूप से स्थिर हैं और 2 घंटे के लिए उबलने का सामना करते हैं। एटी के साथ बातचीत करते समय, वे सुक्ष्म समुच्चय बनाते हैं।

एन-एजी. एच-एजी (फ्लैगेलेट)थर्मोलेबल और जल्दी से 100 डिग्री सेल्सियस पर नष्ट हो जाता है, साथ ही इथेनॉल की कार्रवाई के तहत। एच-एंटिसेरम के साथ प्रतिक्रियाओं में, ऊष्मायन के 2 घंटे के बाद, ढीले बड़े गुच्छे बनते हैं (बैक्टीरिया द्वारा फ्लैगेल्ला के साथ चिपके हुए)।

वी अरटाइफाइड बैक्टीरिया अपेक्षाकृत थर्मोस्टेबल है (2 घंटे के लिए 60-62 डिग्री सेल्सियस के तापमान का सामना करता है); जब वी-एंटिसेरम के साथ ऊष्मायन किया जाता है, तो महीन दानेदार एग्लूटिनेट बनता है।

प्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रियाएं

इनमें से सबसे सरल प्रतिक्रिया - भागों का जुड़नाएरिथ्रोसाइट्स, या रक्तगुल्म, AB0 प्रणाली में रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। निर्धारण के लिए भागों का जुड़ना(या इसकी अनुपस्थिति) एंटी-ए और एंटी-बी एग्लूटीनिन के साथ मानक एंटीसेरा का उपयोग किया जाता है। प्रतिक्रिया को प्रत्यक्ष कहा जाता है, क्योंकि अध्ययन किए गए एंटीजन एरिथ्रोसाइट्स के प्राकृतिक घटक हैं।

इसके साथ साझा किया गया प्रत्यक्ष रक्तगुल्मतंत्र में वायरल रक्तगुल्म है। कई वायरस अनायास एवियन और स्तनधारी एरिथ्रोसाइट्स को समूहीकृत करने में सक्षम होते हैं, और एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन के अलावा उनके समुच्चय के गठन का कारण बनता है।

समूहन प्रतिक्रिया

समूहन (अव्य। भागों का जुड़ना- ग्लूइंग) - इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी के अणुओं के साथ एंटीजन-असर कॉर्पसकुलर कणों (संपूर्ण कोशिकाओं, लेटेक्स कणों, आदि) का ग्लूइंग (कनेक्शन), जो गुच्छे या तलछट (एग्लूटिनेट) के गठन के साथ समाप्त होता है। नंगी आँख। तलछट की प्रकृति प्रतिजन की प्रकृति पर निर्भर करती है: फ्लैगेलर बैक्टीरिया एक बड़े-परत वाले तलछट, फ्लैगेलर और कैप्सूललेस - महीन दाने वाले, कैप्सुलर - रेशेदार होते हैं। प्रत्यक्ष एकत्रीकरण को भेद करें, जिसमें विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ बातचीत में सीधे बैक्टीरिया या किसी अन्य कोशिका के स्वयं के एंटीजन शामिल होते हैं, जैसे कि एरिथ्रोसाइट्स; और अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, जिसमें जीवाणु कोशिकाएं या एरिथ्रोसाइट्स, या लेटेक्स कण स्वयं के वाहक नहीं होते हैं, बल्कि उनके लिए विशिष्ट एंटीबॉडी (या एंटीजन) का पता लगाने के लिए उन पर लगाए गए विदेशी एंटीजन (या एंटीबॉडी) के वाहक होते हैं। एग्लूटीनेशन रिएक्शन में मुख्य रूप से आईजीजी और आईजीएम क्लास से संबंधित एंटीबॉडी शामिल हैं। यह दो चरणों में आगे बढ़ता है: सबसे पहले, प्रतिजन निर्धारक के साथ एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्र की एक विशिष्ट बातचीत होती है, यह चरण इलेक्ट्रोलाइट्स की अनुपस्थिति में हो सकता है और प्रतिक्रिया प्रणाली में दृश्य परिवर्तन के साथ नहीं होता है। दूसरा चरण, एग्लूटिनेट का निर्माण, इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति की आवश्यकता होती है जो एंटीजन + एंटीबॉडी परिसरों के विद्युत आवेश को कम करते हैं और उनके ग्लूइंग की प्रक्रिया को तेज करते हैं। यह चरण एग्लूटिनेट के गठन के साथ समाप्त होता है।

एग्लूटिनेशन रिएक्शन या तो कांच पर या चिकनी कार्डबोर्ड प्लेटों पर, या बाँझ एग्लूटिनेशन ट्यूबों में रखे जाते हैं। कांच पर एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं (प्रत्यक्ष और निष्क्रिय) आमतौर पर रोगी के सीरम (उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस में) में विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने या रोगज़नक़ की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए त्वरित विधि के रूप में उपयोग की जाती हैं। बाद के मामले में, अच्छी तरह से शुद्ध (adsorbed) डायग्नोस्टिक सीरा का आमतौर पर उपयोग किया जाता है, जिसमें केवल मोनोरिसेप्टर एंटीबॉडी या विभिन्न एंटीजन के लिए उनका सेट होता है। ग्लास पर एग्लूटीनेशन रिएक्शन का निस्संदेह लाभ इसके निर्माण की सादगी है और यह तथ्य है कि इसमें कई मिनट या सेकंड भी लगते हैं, क्योंकि इसमें दोनों घटकों का उपयोग केंद्रित रूप में किया जाता है। हालांकि, इसका केवल गुणात्मक मूल्य है और टेस्ट ट्यूब से कम संवेदनशील है। टेस्ट ट्यूब में एक विस्तारित एग्लूटिनेशन टेस्ट अधिक सटीक परिणाम देता है, क्योंकि यह आपको सीरम में एंटीबॉडी की मात्रात्मक सामग्री निर्धारित करने की अनुमति देता है (इसके टिटर सेट करें) और यदि आवश्यक हो, तो एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि के तथ्य को दर्ज करें, जिसमें नैदानिक ​​मूल्य. प्रतिक्रिया को स्थापित करने के लिए, सीरम को एक निश्चित तरीके से 0.85% NaCl समाधान के साथ पतला किया जाता है और एक मानक डायग्नोस्टिकम (या टेस्ट कल्चर) के निलंबन के बराबर मात्रा (आमतौर पर 0.5 मिली) में 1 मिली में 1 बिलियन बैक्टीरिया होते हैं। ट्यूब। एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के परिणामों के लिए लेखांकन 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ट्यूबों के ऊष्मायन के 2 घंटे के बाद और अंत में 20-24 घंटों के बाद दो संकेतों के अनुसार किया जाता है: अवक्षेप की उपस्थिति और आकार और डिग्री सतह पर तैरनेवाला की पारदर्शिता। मूल्यांकन चार-क्रॉस प्रणाली के अनुसार किया जाता है। प्रतिक्रिया आवश्यक रूप से सीरम और एंटीजन के नियंत्रण के साथ होती है। उन मामलों में जब एक परखनली में एक विस्तृत समूहन परीक्षण का उपयोग रोगज़नक़ की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए किया जाता है, तो डायग्नोस्टिक सीरम के कम से कम आधे टिटर के साथ पतला होने पर प्रतिक्रिया का मूल्यांकन सकारात्मक होने पर इसका नैदानिक ​​​​मूल्य होता है।

यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि सजातीय एंटीजन और एंटीबॉडी के समाधान को मिलाते समय, एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया की दृश्य अभिव्यक्तियाँ हमेशा नहीं देखी जाती हैं। दोनों प्रतिक्रिया घटकों के कुछ इष्टतम अनुपातों पर ही अवक्षेप बनता है। इन सीमाओं के बाहर, एंटीजन या एंटीबॉडी की महत्वपूर्ण अधिकता के साथ, कोई प्रतिक्रिया नहीं देखी जाती है। इस घटना को "प्रोज़ोन घटना" कहा जाता है। यह एग्लूटीनेशन रिएक्शन और वर्षा प्रतिक्रिया दोनों में देखा जाता है। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में प्रोज़ोन की उपस्थिति को इस तथ्य से समझाया गया है कि उनमें शामिल एंटीजन, एक नियम के रूप में, बहु-निर्धारक और अणु हैं आईजीजी एंटीबॉडीदो सक्रिय केंद्र हैं। एंटीबॉडी की अधिकता के साथ, प्रत्येक एंटीजन कण की सतह एंटीबॉडी अणुओं से ढकी होती है ताकि कोई मुक्त निर्धारक समूह न रहे, इसलिए एंटीबॉडी का दूसरा, अनबाउंड सक्रिय केंद्र किसी अन्य एंटीजेनिक कण के साथ बातचीत नहीं कर सकता है और उन्हें एक दूसरे से बांध सकता है। जब प्रतिपिंडों की एक भी मुक्त सक्रिय साइट नहीं होती है, और इसलिए प्रतिजन + प्रतिपिंड + प्रतिजन परिसरों को बढ़ाया नहीं जा सकता है, तो एक दृश्य समूह या अवक्षेपण का गठन भी प्रतिजन की अधिकता से दबा दिया जाता है।

एकत्रीकरण एक इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान) की उपस्थिति में एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं की समूहन और वर्षा है।चिपचिपे बैक्टीरिया (कोशिकाओं) के समूह को एग्लूटिनेट्स कहा जाता है। एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के लिए निम्नलिखित घटकों की आवश्यकता होती है:

1. एंटीबॉडीज (एग्लूटिनिन) जो एक बीमार या प्रतिरक्षा वाले जानवर के सीरम में होते हैं।

2. एंटीजन - जीवित या मारे गए रोगाणुओं, एरिथ्रोसाइट्स या अन्य कोशिकाओं का निलंबन।

3. आइसोटोनिक (0.9%) सोडियम क्लोराइड घोल।

सेरोडायग्नोसिस के लिए एग्लूटिनेशन रिएक्शन का उपयोग टाइफाइड बुखार और पैराटायफाइड बुखार (विडाल रिएक्शन), ब्रुसेलोसिस (राइट और हडलसन रिएक्शन), टुलारेमिया आदि के लिए किया जाता है। इस मामले में, रोगी का सीरम प्रतिरक्षी है, और ज्ञात सूक्ष्म जीव प्रतिजन है। जब रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं की पहचान की जाती है, तो उनका निलंबन एंटीजन के रूप में कार्य करता है, और एक ज्ञात प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी के रूप में कार्य करता है। निदान के लिए इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है आंतों में संक्रमण, काली खांसी आदि।

आरए स्टेजिंग के तरीके

कांच पर अनुमानित आरए

तैनात आरए

(मात्रा विधि)

जमावट प्रतिक्रिया

कांच पर विस्तारित आरए (सेरोआइडेंटिफिकेशन)

कांच पर समूहन प्रतिक्रिया।वसा रहित कांच की स्लाइड पर विशिष्ट (शोषित) सीरम की दो बूंदें और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल की एक बूंद लगाई जाती है। गैर-अवशोषित सीरा 1:5 - 1:100 के अनुपात में पूर्व-पतला होता है। बूंदों को कांच पर लगाना चाहिए ताकि उनके बीच एक दूरी हो। संस्कृति को एक गिलास पर लूप या पिपेट के साथ अच्छी तरह से रगड़ा जाता है, और फिर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद और सीरम की बूंदों में से एक में जोड़ा जाता है, जब तक कि एक सजातीय निलंबन नहीं बनता है। संस्कृति के बिना सीरम ड्रॉप सीरम नियंत्रण है।

ध्यान!सीरम कल्चर को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल की एक बूंद में स्थानांतरित नहीं किया जाना चाहिए, जो एक प्रतिजन नियंत्रण है। प्रतिक्रिया 1-3 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर आगे बढ़ती है। यदि सीरम नियंत्रण पारदर्शी रहता है, तो प्रतिजन नियंत्रण में एक समान मैलापन देखा जाता है, और एग्लूटिनेट के गुच्छे ड्रॉप में एक स्पष्ट तरल की पृष्ठभूमि के खिलाफ दिखाई देते हैं जहां संस्कृति सीरम के साथ मिश्रित होती है, प्रतिक्रिया परिणाम सकारात्मक माना जाता है।

डायग्नोस्टिक फिजियोलॉजिकल

सीरम + संस्कृति समाधान + संस्कृति

विस्तारित एग्लूटीनेशन रिएक्शन (वॉल्यूमेट्रिक विधि)।सीरम dilutions क्रमिक रूप से तैयार किए जाते हैं, अक्सर दो गुना, dilutions। विधि को बल्क कहा जाता है। रक्त सीरम में एंटीबॉडी टिटर निर्धारित करने के लिए, 6 टेस्ट ट्यूब लें। पहली ट्यूब में सीरम 1:50 के प्रारंभिक कमजोर पड़ने के 1 मिलीलीटर डालो और एक स्नातक पिपेट के साथ सभी 6 ट्यूबों में 1 मिलीलीटर शारीरिक खारा जोड़ें। पहली परखनली में, सीरम का 1:100 तनुकरण 2 मिलीलीटर की मात्रा के साथ प्राप्त किया जाएगा। पहली परखनली से, 1 मिलीलीटर दूसरी परखनली में स्थानांतरित करें, जहां तनुकरण 1:200 हो जाता है। इसलिए पहले 5 परखनलियों (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600) में सीरम के क्रमिक तनुकरणों की एक श्रृंखला बनाएं। पांचवीं ट्यूब से 1 मिली कीटाणुनाशक घोल में डालें। डायग्नोस्टिकम की 2 बूंदों को सभी 6 ट्यूबों में डालें। छठी ट्यूब एक कल्चर कंट्रोल है, क्योंकि इसमें केवल सेलाइन और डायग्नोस्टिकम होता है।

सहज संस्कृति समूहन को बाहर करने के लिए ऐसा नियंत्रण आवश्यक है। परखनलियों को हिलाया जाता है और 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है, और फिर कमरे के तापमान पर एक दिन के लिए छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद एग्लूटीनेशन रिएक्शन के परिणाम दर्ज किए जाते हैं। जीवन के पहले महीनों में बच्चों के सीरा के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, एंटीबॉडी गठन की कार्यात्मक हीनता के कारण, कम एंटीबॉडी टाइटर्स की पहचान करना आवश्यक होता है, जिसे सीरम को पतला करते समय ध्यान में रखा जाता है। सीरम का शुरुआती कमजोर पड़ने का समय 1:25 है। पहली परखनली में 1:50 का तनुकरण प्राप्त होता है, फिर 1:100, और इसी तरह आगे।

प्रतिक्रिया के सकारात्मक परिणाम के साथ, अनाज या गुच्छे के रूप में चिपचिपी कोशिकाएं एक स्पष्ट तरल की पृष्ठभूमि के खिलाफ परखनली में दिखाई देती हैं।समूहन धीरे-धीरे एक "छतरी" के रूप में तली में बैठ जाता है, और तलछट के ऊपर का तरल स्पष्ट हो जाता है। प्रतिजन नियंत्रण समान रूप से अशांत है।

तलछट की प्रकृति से, महीन दाने वाली और मोटे दाने वाली (परत जैसी) समूहन प्रतिष्ठित हैं। ओ-सेरा के साथ काम करने पर महीन दाने वाली समूहन प्राप्त होती है। मोटे दाने वाले - फ्लैगेलर एच-सीरा के साथ गतिशील रोगाणुओं की बातचीत के दौरान। यह महीन दाने की तुलना में तेजी से आता है, परिणामी तलछट बहुत ढीली होती है और आसानी से टूट जाती है।

प्रतिक्रिया की तीव्रता निम्नानुसार व्यक्त की जाती है:

सभी कोशिकाएं बस गईं, टेस्ट ट्यूब में तरल पूरी तरह से पारदर्शी है। प्रतिक्रिया का नतीजा तेजी से सकारात्मक है;

तलछट कम है, तरल का पूर्ण ज्ञान नहीं है। प्रतिक्रिया का नतीजा सकारात्मक है;

तलछट और भी कम है, तरल बादलदार है। प्रतिक्रिया का परिणाम संदिग्ध है;

ट्यूब के तल पर एक नगण्य तलछट है, तरल अशांत है। प्रतिक्रिया का संदिग्ध परिणाम;

कोई तलछट नहीं है, तरल समान रूप से अशांत है, जैसा कि एंटीजन नियंत्रण में होता है। नकारात्मक प्रतिक्रिया परिणाम

1.1। समूहन प्रतिक्रिया (आरए)

समूहन प्रतिक्रिया (आरए)

इसकी विशिष्टता, सेटिंग में आसानी और प्रदर्शन के कारण, कई संक्रामक रोगों के निदान के लिए सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया व्यापक हो गई है।

एग्लूटीनेशन रिएक्शन पूरे माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाओं (एग्लूटीनोजेन्स) के साथ एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन) की बातचीत की विशिष्टता पर आधारित है। इस बातचीत के परिणामस्वरूप, कण बनते हैं - एग्लोमेरेट्स जो गुच्छे के रूप में अवक्षेपित (एग्लूटिनेट) होते हैं।

दोनों जीवित और मृत बैक्टीरिया, स्पाइरोकेट्स, कवक, प्रोटोजोआ, रिकेट्सिया, साथ ही एरिथ्रोसाइट्स और अन्य कोशिकाएं एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया में भाग ले सकती हैं। प्रतिक्रिया दो चरणों में आगे बढ़ती है: पहला (अदृश्य) विशिष्ट, एंटीजन और एंटीबॉडी का कनेक्शन, दूसरा (दृश्यमान) गैर-विशिष्ट, एंटीजन का बंधन, यानी। एग्लूटिनेट गठन।

एग्लूटिनेट तब बनता है जब एक द्विसंयोजक एंटीबॉडी का एक सक्रिय केंद्र एंटीजन के निर्धारक समूह के साथ जुड़ जाता है। एग्लूटीनेशन रिएक्शन, किसी भी सीरोलॉजिकल रिएक्शन की तरह, इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में आगे बढ़ता है।

बाहरी अभिव्यक्ति सकारात्मक प्रतिक्रियासमूहन दुगुना है। गैर-ध्वजांकित रोगाणुओं में, जिनमें केवल एक दैहिक O एंटीजन होता है, माइक्रोबियल कोशिकाएं स्वयं सीधे एक साथ चिपक जाती हैं। इस तरह के एग्लूटिनेशन को महीन दाने वाला कहा जाता है। यह 18 22 घंटों के भीतर होता है। वि

फ्लैगेलेटेड रोगाणुओं में दो एंटीजन सोमैटिक ओ एंटीजन और फ्लैगेलर एच एंटीजन होते हैं। यदि कोशिकाएं फ्लैगेल्ला के साथ चिपक जाती हैं, तो बड़े ढीले गुच्छे बन जाते हैं और इस तरह की समूहन प्रतिक्रिया को मोटे अनाज कहा जाता है। यह 2 4 घंटे के भीतर आता है।

रोगी के रक्त सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी के गुणात्मक और मात्रात्मक निर्धारण के उद्देश्य से और पृथक रोगज़नक़ की प्रजातियों को निर्धारित करने के उद्देश्य से एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया दोनों को सेट किया जा सकता है। वि

एग्लूटिनेशन रिएक्शन को एक विस्तृत संस्करण में सेट किया जा सकता है, जो डायग्नोस्टिक टिटर के लिए पतला सीरम के साथ काम करने की अनुमति देता है, और एक सांकेतिक प्रतिक्रिया स्थापित करने के रूप में, जो सिद्धांत रूप में, विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने या प्रजातियों का निर्धारण करने की अनुमति देता है। रोगज़नक़।

विषय के रक्त सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक विस्तृत समूहन प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, परीक्षण सीरम 1:50 या 1:100 के कमजोर पड़ने पर लिया जाता है। यह इस तथ्य के कारण है कि पूरे या थोड़ा पतला सीरम में, सामान्य एंटीबॉडी बहुत उच्च सांद्रता में मौजूद हो सकते हैं, और फिर प्रतिक्रिया के परिणाम गलत हो सकते हैं। प्रतिक्रिया के इस प्रकार में परीक्षण सामग्री रोगी का रक्त है।

रक्त खाली पेट लिया जाता है या भोजन के 6 घंटे से पहले नहीं लिया जाता है (अन्यथा, रक्त सीरम में वसा की बूंदें हो सकती हैं, जिससे यह धुंधला हो जाता है और अनुसंधान के लिए अनुपयुक्त हो जाता है)। रोगी का रक्त सीरम आमतौर पर रोग के दूसरे सप्ताह में प्राप्त किया जाता है, रक्त के क्यूबिटल नस 3 4 मिलीलीटर से बाँझ एकत्र किया जाता है (इस समय तक विशिष्ट एंटीबॉडी की अधिकतम मात्रा केंद्रित होती है)। एक विशिष्ट एंटीजेनिक संरचना के साथ एक विशिष्ट प्रजाति के मारे गए लेकिन नष्ट नहीं हुए माइक्रोबियल कोशिकाओं से तैयार एक डायग्नोस्टिकम को ज्ञात एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है।

प्रजाति, रोगज़नक़ के प्रकार को निर्धारित करने के लिए एक विस्तृत समूहन प्रतिक्रिया की स्थापना करते समय, एंटीजन एक जीवित रोगज़नक़ है जिसे परीक्षण सामग्री से अलग किया जाता है। ज्ञात प्रतिरक्षा निदान सीरम में निहित एंटीबॉडी हैं। वि

इम्यून डायग्नोस्टिक सीरम टीकाकृत खरगोश के रक्त से प्राप्त किया जाता है। अनुमापांक निर्धारित करने के बाद (अधिकतम कमजोर पड़ने पर एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है), डायग्नोस्टिक सीरम को परिरक्षक के अतिरिक्त ampoules में डाला जाता है। इस सीरम का उपयोग पृथक रोगज़नक़ की एंटीजेनिक संरचना द्वारा पहचान के लिए किया जाता है।

समूहन की प्रतिक्रिया के विकल्प

कणों के रूप में एंटीजन (माइक्रोबियल कोशिकाएं, एरिथ्रोसाइट्स और अन्य कॉर्पसकुलर एंटीजन) इन प्रतिक्रियाओं में भाग लेते हैं, जो एंटीबॉडी के साथ चिपक जाते हैं और अवक्षेपित हो जाते हैं।

एग्लूटिनेशन रिएक्शन (आरए) स्थापित करने के लिए तीन घटक आवश्यक हैं: 1) एक एंटीजन (एग्लूटीनोजेन); 2) एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन) और 3) इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल)।

सांकेतिक (प्लेट) समूहन प्रतिक्रिया (आरए)

अनुमानित, या लैमेलर, आरए को कमरे के तापमान पर कांच की स्लाइड पर रखा जाता है। ऐसा करने के लिए, 1:10 1:20 के कमजोर पड़ने में सीरम की एक बूंद और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद पाश्चर पिपेट के साथ ग्लास में अलग से लागू होती है। कालोनियों या बैक्टीरिया की एक दैनिक संस्कृति (डायग्नोस्टिकम की एक बूंद) को बैक्टीरियोलॉजिकल लूप और अच्छी तरह से मिश्रित दोनों में पेश किया जाता है। प्रतिक्रियाओं को कुछ ही मिनटों में नेत्रहीन रूप से ध्यान में रखा जाता है, कभी-कभी एक आवर्धक कांच (x5) के साथ। सीरम के साथ एक बूंद में एक सकारात्मक आरए के साथ, बड़े और छोटे गुच्छे की उपस्थिति नोट की जाती है, एक नकारात्मक के साथ, सीरम समान रूप से बादल रहता है।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया (RNHA, RPHA)

प्रतिक्रिया सेट है: 1) पॉलीसेकेराइड, प्रोटीन, बैक्टीरिया के अर्क और अन्य अत्यधिक बिखरे हुए पदार्थों, रिकेट्सिया और वायरस का पता लगाने के लिए, जिनके एग्लूटीनिन के साथ कॉम्प्लेक्स को सामान्य आरए में नहीं देखा जा सकता है, या 2) रोगियों के सीरा में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए अत्यधिक छितरे हुए पदार्थ और सबसे छोटे सूक्ष्मजीव।

अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय के तहत, एग्लूटिनेशन को एक प्रतिक्रिया के रूप में समझा जाता है जिसमें एंटीबॉडी पहले निष्क्रिय कणों (लेटेक्स, सेलूलोज़, पॉलीस्टीरिन, बेरियम ऑक्साइड, आदि या राम एरिथ्रोसाइट्स, I (0) मानव रक्त समूह) पर adsorbed एंटीजन के साथ बातचीत करते हैं।

प्रतिक्रिया में निष्क्रिय रक्तगुल्म(आरपीजीए) एरिथ्रोसाइट्स वाहक के रूप में उपयोग किए जाते हैं। एंटीजन-लोडेड एरिथ्रोसाइट्स इस एंटीजन और अवक्षेपण के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की उपस्थिति में एक साथ चिपकते हैं। एंटीजन-सेंसिटाइज़्ड एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग RPHA में एंटीबॉडी (सेरोडायग्नोसिस) का पता लगाने के लिए एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के रूप में किया जाता है। यदि एरिथ्रोसाइट्स एंटीबॉडी (एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी डायग्नोस्टिकम) से भरे हुए हैं, तो इसका उपयोग एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।

मंचन। पॉलीस्टायर्न गोलियों के कुओं में सीरम के सीरियल कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला तैयार करते हैं। ज्ञात सकारात्मक सीरम का 0.5 मिली अंतिम कुएं में डाला जाता है और 0.5 मिली खारा घोल (नियंत्रण) अंतिम कुएं में डाला जाता है। फिर, पतला एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम का 0.1 मिलीलीटर सभी कुओं में जोड़ा जाता है, हिलाया जाता है और 2 घंटे के लिए थर्मोस्टैट में रखा जाता है।

लेखांकन। एक सकारात्मक मामले में, एरिथ्रोसाइट्स एक तह या दांतेदार किनारे (एक उलटा छाता) के साथ कोशिकाओं की एक समान परत के रूप में छेद के तल पर बसते हैं, एक नकारात्मक मामले में, वे एक बटन या एक अंगूठी के रूप में बसते हैं। .

1.2। निराकरण प्रतिक्रिया। विश्लेषण,
OPSONOPHAGOCYTIC प्रतिक्रिया, अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रिया

एंटीटॉक्सिन (आरएन) के साथ एक्सोटॉक्सिन न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन

प्रतिक्रिया एक्सोटॉक्सिन की क्रिया को बेअसर करने के लिए एंटीटॉक्सिक सीरम की क्षमता पर आधारित है। इसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरा के अनुमापन और एक्सोटॉक्सिन के निर्धारण के लिए किया जाता है।

जब सीरम का शीर्षक दिया जाता है, तो संबंधित विष की एक निश्चित खुराक को एंटीटॉक्सिक सीरम के विभिन्न तनुकरणों में जोड़ा जाता है। प्रतिजन के पूर्ण निष्प्रभावीकरण और अप्रयुक्त एंटीबॉडी की अनुपस्थिति के साथ, प्रारंभिक flocculation होता है। फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया का उपयोग न केवल सीरम (उदाहरण के लिए, डिप्थीरिया) के अनुमापन के लिए किया जा सकता है, बल्कि विष और टॉक्साइड के अनुमापन के लिए भी किया जा सकता है। एंटीटॉक्सिन चिकित्सीय सीरा की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए एक विधि के रूप में एंटीटॉक्सिन के साथ टॉक्सिन न्यूट्रलाइजेशन की प्रतिक्रिया का बहुत व्यावहारिक महत्व है। इस प्रतिक्रिया में एंटीजन एक वास्तविक एक्सोटॉक्सिन है।

एंटीटॉक्सिक सीरम की ताकत एई की पारंपरिक इकाइयों द्वारा निर्धारित की जाती है।

बोटुलिनम सीरम का 1 AU इसकी मात्रा बोटुलिनम विष के 1000 DLM को निष्क्रिय कर देती है। प्रजातियों या एक्सोटॉक्सिन के प्रकार (टेटनस, बोटुलिज़्म, डिप्थीरिया, आदि के निदान में) को निर्धारित करने के लिए बेअसर प्रतिक्रिया को इन विट्रो (रेमन के अनुसार) में किया जा सकता है, और माइक्रोबियल कोशिकाओं की विषाक्तता का निर्धारण करते समय - जेल में ( ऑक्टरलोनी के अनुसार)।

लसीका प्रतिक्रिया (आरएल)

प्रतिरक्षा सीरम के सुरक्षात्मक गुणों में से एक इसकी शरीर में प्रवेश करने वाले रोगाणुओं या सेलुलर तत्वों को भंग करने की क्षमता है।

विशिष्ट एंटीबॉडी जो कोशिकाओं के विघटन (लिसिस) का कारण बनते हैं, लाइसिन कहलाते हैं। प्रतिजन की प्रकृति के आधार पर, वे बैक्टीरियोलिसिन, साइटोलिसिन, स्पाइरोचेटोलिज़िन, हेमोलिसिन आदि हो सकते हैं।

लाइसिन केवल एक अतिरिक्त कारक - पूरक की उपस्थिति में अपना प्रभाव दिखाते हैं। पूरक, गैर-विशिष्ट हास्य प्रतिरक्षा में एक कारक के रूप में, लगभग सभी शरीर के तरल पदार्थों में पाया जाता है, को छोड़कर मस्तिष्कमेरु द्रवऔर पूर्वकाल कक्ष द्रव। मानव रक्त सीरम में काफी उच्च और निरंतर पूरक सामग्री और गिनी पिग रक्त सीरम में इसकी बहुत अधिक मात्रा देखी गई। अन्य स्तनधारियों में, रक्त सीरम में पूरक की सामग्री भिन्न होती है।

पूरक एक जटिल प्रणाली है मट्ठा प्रोटीन. यह अस्थिर है और 30 मिनट के लिए 55 डिग्री पर गिर जाता है। कमरे के तापमान पर, पूरक दो घंटे के भीतर नष्ट हो जाता है। यह लंबे समय तक झटकों के प्रति, एसिड और पराबैंगनी किरणों की क्रिया के प्रति बहुत संवेदनशील है। हालांकि, पूरक को लंबे समय तक (छह महीने तक) सूखे राज्य में कम तापमान पर संग्रहीत किया जाता है। पूरक माइक्रोबियल कोशिकाओं और एरिथ्रोसाइट्स के विश्लेषण को बढ़ावा देता है।

बैक्टीरियोलिसिस और हेमोलिसिस की भेद प्रतिक्रिया।

बैक्टीरियोलिसिस की प्रतिक्रिया का सार यह है कि जब एक विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम को पूरक की उपस्थिति में इसके समरूप जीवित माइक्रोबियल कोशिकाओं के साथ जोड़ा जाता है, तो रोगाणुओं को मार दिया जाता है।

हेमोलिसिस प्रतिक्रिया इस तथ्य में शामिल है कि जब एरिथ्रोसाइट्स एक विशिष्ट, प्रतिरक्षा सीरम (हेमोलाइटिक) के संपर्क में आते हैं, तो पूरक की उपस्थिति में, एरिथ्रोसाइट्स भंग हो जाते हैं, अर्थात। हेमोलाइसिस।

प्रयोगशाला अभ्यास में हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का उपयोग पूरक के स्तर को निर्धारित करने के साथ-साथ नैदानिक ​​पूरक निर्धारण परीक्षणों के परिणामों को ध्यान में रखने के लिए किया जाता है। पूरक टिटर सबसे छोटी राशि है जो 2.5 मिली की मात्रा में हेमोलिटिक सिस्टम में 30 मिनट के भीतर लाल रक्त कोशिकाओं के विश्लेषण का कारण बनती है। लसीका प्रतिक्रिया, सभी सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं की तरह, एक इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में होती है।

अतिसंवेदनशीलता (एलर्जी) प्रतिक्रियाएं

प्रतिजन के कुछ रूप, शरीर के साथ बार-बार संपर्क करने पर, एक प्रतिक्रिया पैदा कर सकते हैं जो मूल रूप से विशिष्ट है, लेकिन इसमें तीव्र भड़काऊ प्रतिक्रिया के गैर-विशिष्ट सेलुलर और आणविक कारक शामिल हैं। हाइपररिएक्टिविटी के दो रूप ज्ञात हैं: अतिसंवेदनशीलता तत्काल प्रकार(जीएचटी) और विलंबित प्रकार की अतिसंवेदनशीलता (डीटीएच)। पहले प्रकार की प्रतिक्रिया एंटीबॉडी की भागीदारी के साथ प्रकट होती है, जबकि प्रतिक्रिया एलर्जेन के साथ बार-बार संपर्क के 2 घंटे बाद विकसित नहीं होती है। प्रतिक्रिया के मुख्य प्रभावकों के रूप में भड़काऊ टी कोशिकाओं (Tr3) की मदद से दूसरे प्रकार को लागू किया जाता है, जो सूजन क्षेत्र में मैक्रोफेज के संचय को सुनिश्चित करता है, प्रतिक्रिया 6-8 घंटे और बाद में प्रकट होती है।

एक अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रिया का विकास एक प्रतिजन के साथ एक बैठक और संवेदीकरण की घटना से पहले होता है, अर्थात। एंटीबॉडी की उपस्थिति, सक्रिय रूप से संवेदनशील लिम्फोसाइट्स और अन्य ल्यूकोसाइट्स (मैक्रोफेज, ग्रैन्यूलोसाइट्स) के साइटोफिलिक एंटीबॉडी द्वारा निष्क्रिय रूप से संवेदनशील।

अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं के विकास के तीन चरण होते हैं: इम्यूनोलॉजिकल; पैथोकेमिकल; पैथोफिजियोलॉजिकल।

पहले, विशिष्ट चरण में, एलर्जेन एंटीबॉडी और (या) संवेदनशील कोशिकाओं के साथ इंटरैक्ट करता है। दूसरे चरण में, सक्रिय कोशिकाओं से जैविक रूप से सक्रिय पदार्थ निकलते हैं। विमोचित मध्यस्थ (हिस्टामाइन, सेरोटोनिन, ल्यूकोट्रिएनेस, ब्रैडीकाइनिन, आदि) इसी प्रकार की प्रतिक्रिया के विभिन्न परिधीय प्रभावों का कारण बनते हैं - तीसरा चरण।

चौथे प्रकार की अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाएं

इस प्रकार की प्रतिक्रियाएं संवेदनशील थेल्पर्स, साइटोटोक्सिक टिम्फोसाइट्स (टकिलर) और मोनोन्यूक्लियर फैगोसाइट सिस्टम की सक्रिय कोशिकाओं के रोगजनक इंटरसेलुलर इंटरैक्शन के कारण होती हैं, जो बैक्टीरियल एंटीजन द्वारा प्रतिरक्षा प्रणाली की लंबे समय तक उत्तेजना के कारण होती हैं, जिसमें शरीर की प्रतिरक्षा की सापेक्ष अपर्याप्तता होती है। प्रणाली आंतरिक वातावरण संक्रामक रोगों से जीवाणु रोगजनकों को खत्म करने के लिए। इन अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं के कारण ट्यूबरकुलस फेफड़ों की गुहाएं, तपेदिक के रोगियों में उनके कैसियस नेक्रोसिस और सामान्य नशा होता है। तपेदिक और कुष्ठ रोग में त्वचा ग्रैनुलोमैटोसिस मोर्फोपैथोजेनेटिक शब्दों में काफी हद तक चौथे प्रकार की अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं से बना है।

अधिकांश प्रसिद्ध उदाहरणचौथे प्रकार की अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाएं यह मंटौक्स प्रतिक्रिया है, जो ट्यूबरकुलिन के इंट्रोडर्मल प्रशासन के स्थल पर विकसित होती है, जिसके शरीर और प्रणाली को माइकोबैक्टीरियम एंटीजन के प्रति संवेदनशील बनाया जाता है। प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, केंद्र में परिगलन के साथ एक घने हाइपरेमिक पप्यूले का गठन होता है, जो ट्यूबरकुलिन के इंट्राडर्मल प्रशासन के कुछ घंटों बाद (धीरे-धीरे) दिखाई देता है। परिसंचारी रक्त के मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स के अंतरकोशिकीय रिक्त स्थान में संवहनी बिस्तर से बाहर निकलने के साथ एक पप्यूले का गठन शुरू होता है। इसके साथ ही, पॉलीमॉर्फोन्यूक्लियर कोशिकाओं के संवहनी बिस्तर से उत्प्रवास शुरू होता है। फिर न्युट्रोफिल घुसपैठ कम हो जाती है, और घुसपैठ में मुख्य रूप से लिम्फोसाइट्स और मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स शामिल होने लगते हैं। यह मंटौक्स प्रतिक्रिया और आर्थस प्रतिक्रिया के बीच का अंतर है, जिसमें मुख्य रूप से बहुरूपी परमाणु ल्यूकोसाइट्स घाव के स्थल पर जमा होते हैं।

चौथे प्रकार की अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रियाओं में, एंटीजन के साथ संवेदनशील लिम्फोसाइटों की लंबे समय तक उत्तेजना होती है पैथोलॉजिकल परिवर्तनथेल्पर्स द्वारा साइटोकिन्स के पैथोलॉजिकल रूप से तीव्र और लंबे समय तक रिलीज करने के लिए ऊतक। ऊतक क्षति के लोकी में साइटोकिन्स की एक तीव्र रिहाई वहां स्थित मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स की प्रणाली की कोशिकाओं के अतिसक्रियकरण का कारण बनती है, जिनमें से कई अतिसक्रिय अवस्था में एपिथेलिओइड कोशिकाओं की किस्में बनाती हैं, और कुछ एक दूसरे के साथ मिलकर विशाल कोशिकाएं बनाती हैं। मैक्रोफेज, जिसकी सतह पर बैक्टीरिया और वायरल एंटीजन उजागर होते हैं, टिकिलर (प्राकृतिक हत्यारे) के कामकाज के माध्यम से नष्ट हो सकते हैं।

चौथे प्रकार की अतिसंवेदनशीलता प्रतिक्रिया इसके प्रति संवेदनशील टी-हेल्पर्स द्वारा एक विदेशी जीवाणु प्रतिजन की पहचान से प्रेरित होती है। मान्यता के लिए एक आवश्यक शर्त एंडोसाइटोसिस और मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स द्वारा विदेशी इम्युनोजेन्स के प्रसंस्करण के बाद एंटीजन-प्रेजेंटिंग कोशिकाओं की सतह पर उजागर एंटीजन के साथ इंड्यूसर्स की बातचीत है। एक और आवश्यक शर्तमुख्य ऊतक संगतता परिसर से कक्षा I के अणुओं के संयोजन में एंटीजन का जोखिम। प्रतिजन मान्यता के बाद, संवेदी सहायक साइटोकिन्स और विशेष रूप से इंटरल्यूकिन 2 छोड़ते हैं, जो प्राकृतिक हत्यारों और मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स को सक्रिय करता है। सक्रिय मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स प्रोटियोलिटिक एंजाइम और मुक्त ऑक्सीजन रेडिकल्स जारी करते हैं जो ऊतकों को नुकसान पहुंचाते हैं।

त्वचा एलर्जी परीक्षण एलर्जी के लिए शरीर की संवेदनशीलता स्थापित करने के लिए परीक्षण करता है, इसके संक्रमण को निर्धारित करने के लिए, उदाहरण के लिए, तपेदिक, ब्रुसेलोसिस, झुंड प्रतिरक्षा का स्तर, उदाहरण के लिए, टुलारेमिया। एलर्जेन की शुरूआत के स्थान के अनुसार, हैं: 1) त्वचा परीक्षण; 2) डरावना; 3) इंट्राडर्मल; 4) चमड़े के नीचे। एक त्वचा-एलर्जी परीक्षण में एक एलर्जेन के लिए नैदानिक ​​​​प्रतिक्रिया स्थानीय, सामान्य और फोकल, साथ ही तत्काल और विलंबित में विभाजित होती है।

एचआईटी के मध्यस्थ प्रकार की स्थानीय प्रतिक्रियाएं 5-20 मिनट के बाद होती हैं, एरिथेमा और ब्लिस्टर के रूप में व्यक्त की जाती हैं, कुछ घंटों के बाद गायब हो जाती हैं, एरिथेमा की मात्रा से प्लस विधि द्वारा अनुमान लगाया जाता है, मिमी में मापा जाता है। एचआरटी की स्थानीय प्रतिक्रियाएं 24-48 घंटों के बाद होती हैं, लंबे समय तक चलती हैं, एक घुसपैठ के रूप में दिखाई देती हैं, कभी-कभी केंद्र में नेक्रोसिस के साथ, और प्लस सिस्टम द्वारा भी मिमी में घुसपैठ के आकार का आकलन किया जाता है। जीएनटी के साइटोटॉक्सिक और इम्युनोकॉम्प्लेक्स प्रकारों में, हाइपरमिया और घुसपैठ 3-4 घंटे के बाद देखी जाती है, अधिकतम 6-8 घंटे तक पहुंच जाती है और लगभग एक दिन बाद कम हो जाती है। कभी-कभी संयुक्त प्रतिक्रियाएं देखी जाती हैं।

1.3। पूरक संबंध प्रतिक्रिया (सीएफआर)

इस प्रतिक्रिया के लिए प्रयोग किया जाता है प्रयोगशाला अनुसंधानविभिन्न संक्रमणों में रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने के साथ-साथ एंटीजेनिक संरचना द्वारा रोगज़नक़ की पहचान के लिए।

पूरक निर्धारण परीक्षण एक जटिल सीरोलॉजिकल परीक्षण है और इसकी विशेषता उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता है।

इस प्रतिक्रिया की एक विशेषता यह है कि विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ बातचीत के दौरान एंटीजन में परिवर्तन केवल पूरक की उपस्थिति में होता है। पूरक केवल प्रतिपिंड-प्रतिजन संकुल पर अधिशोषित होता है। एक एंटीबॉडी-एंटीजन कॉम्प्लेक्स तभी बनता है जब एंटीजन और सीरम में मौजूद एंटीबॉडी के बीच संबंध होता है।

"एंटीजन एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स पर पूरक सोखना एंटीजन के भाग्य को उसकी विशेषताओं के आधार पर अलग-अलग तरीकों से प्रभावित कर सकता है।

कुछ एंटीजन इन स्थितियों के तहत विघटन (हेमोलिसिस, इसेव-फेफर घटना, साइटोलिटिक क्रिया) तक तेज रूपात्मक परिवर्तनों से गुजरते हैं। अन्य लोग गति की गति को बदलते हैं (ट्रेपेनेमा इमोबिलाइजेशन)। फिर भी अन्य बिना तेज के मर जाते हैं विनाशकारी परिवर्तन(जीवाणुनाशक या साइटोटॉक्सिक क्रिया)। अंत में, पूरक सोखना प्रतिजन में परिवर्तन के साथ नहीं हो सकता है जो आसानी से देखे जा सकते हैं।

तंत्र के अनुसार, RSC दो चरणों में आगे बढ़ता है:

1. पहला चरण "एंटीजन एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स का गठन और इस पूरक कॉम्प्लेक्स पर सोखना है। चरण का परिणाम नेत्रहीन रूप से दिखाई नहीं देता है (एंटीजन और एंटीबॉडी की बातचीत पूरक की अनिवार्य भागीदारी के साथ)।
2. दूसरा चरण पूरक की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में प्रतिजन में परिवर्तन है। चरण का परिणाम नेत्रहीन रूप से दिखाई दे सकता है या दिखाई नहीं दे सकता है (संकेतक हेमोलिटिक सिस्टम (भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम) का उपयोग करके प्रतिक्रिया परिणामों का पता लगाना)।

हेमोलिटिक सीरम द्वारा एरिथ्रोसाइट्स का विनाश केवल हेमोलिटिक सिस्टम के पूरक लगाव के मामले में होता है। यदि पूरक को एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स पर पहले से अधिशोषित किया गया था, तो एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होता है।

प्रयोग के परिणाम का मूल्यांकन सभी टेस्ट ट्यूबों में हेमोलिसिस की उपस्थिति या अनुपस्थिति को ध्यान में रखकर किया जाता है। हेमोलिसिस में पूरी तरह से देरी के साथ प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है, जब टेस्ट ट्यूब में तरल रंगहीन होता है और एरिथ्रोसाइट्स नीचे तक बस जाते हैं, एरिथ्रोसाइट्स के पूर्ण लसीका के साथ नकारात्मक, जब तरल तीव्र रंग ("लाह" रक्त) होता है। हेमोलिसिस देरी की डिग्री का अनुमान तरल के रंग की तीव्रता और तल पर एरिथ्रोसाइट तलछट की मात्रा (++++, +++, ++, +) के आधार पर लगाया जाता है।

मामले में जब प्रतिजन में परिवर्तन दृश्य अवलोकन के लिए दुर्गम रहता है, तो दूसरी प्रणाली का उपयोग करना आवश्यक है जो एक संकेतक के रूप में कार्य करता है जो आपको पूरक की स्थिति का आकलन करने और प्रतिक्रिया के परिणाम के बारे में निष्कर्ष निकालने की अनुमति देता है।

इस संकेतक प्रणाली को हेमोलिसिस प्रतिक्रिया के घटकों द्वारा दर्शाया गया है, जिसमें भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम शामिल हैं जिनमें एरिथ्रोसाइट्स (हेमोलिसिन) के विशिष्ट एंटीबॉडी होते हैं, लेकिन पूरक नहीं होते हैं। यह सूचक प्रणाली मुख्य सीएससी स्थापित करने के एक घंटे बाद परखनली में डाली जाती है। यदि पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो एक एंटीबॉडी-एंटीजन कॉम्प्लेक्स बनता है जो खुद पर पूरक का विज्ञापन करता है। चूँकि पूरक का उपयोग केवल एक प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक मात्रा में किया जाता है, और एरिथ्रोसाइट लसीका केवल पूरक की उपस्थिति में ही हो सकता है, जब इसे "एंटीजन एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स पर सोख लिया जाता है, हेमोलिटिक (संकेतक) प्रणाली में एरिथ्रोसाइट लसीका नहीं होगा . यदि पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया नकारात्मक है, तो "एंटीजन एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, पूरक मुक्त रहता है, और जब हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ा जाता है, तो एरिथ्रोसाइट लसीका होता है।

1.4। डीएनएजांच। पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर),
एंजाइम प्रतिरक्षा विधि (एलिसा), फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि (एमएफए)

जीन जांच के तरीके

आणविक जीव विज्ञान का गहन विकास और आनुवंशिक अनुसंधान के लिए एक आदर्श पद्धतिगत आधार का निर्माण जेनेटिक इंजीनियरिंग का आधार बन गया है। डायग्नोस्टिक्स के क्षेत्र में, एक दिशा उत्पन्न हुई है और डीएनए और आरएनए के विशिष्ट न्यूक्लियोटाइड अनुक्रमों को निर्धारित करने के लिए तेजी से विकसित हो रही है, तथाकथित जीन जांच। इस तरह के तरीके पूरक न्यूक्लियोटाइड्स (एटी, जीसी) की बातचीत के कारण डबल-स्ट्रैंडेड संरचनाओं को संकरण करने के लिए न्यूक्लिक एसिड की क्षमता पर आधारित हैं।

वांछित डीएनए (या आरएनए) अनुक्रम को निर्धारित करने के लिए, एक विशिष्ट आधार अनुक्रम के साथ एक तथाकथित पॉलीन्यूक्लियोटाइड जांच विशेष रूप से बनाई गई है। इसकी संरचना में एक विशेष लेबल पेश किया जाता है, जिससे परिसर के गठन की पहचान करना संभव हो जाता है।

यद्यपि जीन जांच को इम्यूनोकेमिकल विश्लेषण के तरीकों के लिए जिम्मेदार नहीं ठहराया जा सकता है, लेकिन इसका मुख्य सिद्धांत (पूरक संरचनाओं की बातचीत) को इम्यूनोडायग्नोस्टिक्स के संकेतक तरीकों के समान तरीके से लागू किया जाता है। इसके अलावा, जीन जांच के तरीके इसकी फेनोटाइपिक अभिव्यक्ति (जीनोम में निर्मित वायरस, "साइलेंट" जीन) की अनुपस्थिति में एक संक्रामक एजेंट के बारे में जानकारी भरना संभव बनाते हैं।

डीएनए विश्लेषण के लिए, एकल-फंसे संरचनाओं को प्राप्त करने के लिए नमूने को विकृतीकरण के अधीन किया जाता है, जिसके साथ डीएनए या आरएनएप्रोब अणु प्रतिक्रिया करते हैं। जांच की तैयारी के लिए, या तो एक प्राकृतिक स्रोत (उदाहरण के लिए, एक या अन्य सूक्ष्मजीव) से अलग किए गए डीएनए (या आरएनए) के विभिन्न खंड, आमतौर पर वेक्टर प्लास्मिड के भाग के रूप में आनुवंशिक अनुक्रम के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं, या रासायनिक रूप से संश्लेषित ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स का उपयोग किया जाता है। कुछ मामलों में, टुकड़ों में हाइड्रोलाइज्ड जीनोमिक डीएनए की तैयारी एक जांच के रूप में उपयोग की जाती है, कभी-कभी आरएनए की तैयारी, विशेष रूप से राइबोसोमल आरएनए। उसी संकेतक का उपयोग लेबल के रूप में किया जाता है, जैसा कि में है विभिन्न प्रकार केइम्यूनोकेमिकल विश्लेषण: रेडियोधर्मी समस्थानिक, फ़्लोरेसिन, बायोटोप (एविडिनेंजाइम कॉम्प्लेक्स द्वारा आगे की अभिव्यक्ति के साथ), आदि।

विश्लेषण का क्रम उपलब्ध जांच के गुणों द्वारा निर्धारित किया जाता है

वर्तमान में, सभी आवश्यक सामग्रियों वाली वाणिज्यिक किटों का तेजी से उपयोग किया जा रहा है।

ज्यादातर मामलों में, विश्लेषण प्रक्रिया को निम्नलिखित चरणों में विभाजित किया जा सकता है: नमूना तैयार करना (डीएनए निष्कर्षण और विकृतीकरण सहित), एक वाहक पर नमूना निर्धारण (अक्सर, एक बहुलक झिल्ली फिल्टर), पूर्वसंकरण, स्वयं संकरण, अनबाउंड उत्पादों की धुलाई, पता लगाना। डीएनए या आरएनए जांच की मानक तैयारी के अभाव में, इसे पहले प्राप्त और लेबल किया जाता है।

नमूना तैयार करने के लिए, व्यक्तिगत बैक्टीरियल कॉलोनियों की पहचान करने या सेल संस्कृति में वायरस की एकाग्रता बढ़ाने के लिए परीक्षण सामग्री को "बढ़ाना" आवश्यक हो सकता है। रक्त सीरम, मूत्र के नमूनों का प्रत्यक्ष विश्लेषण, आकार के तत्वएक संक्रामक एजेंट की उपस्थिति के लिए रक्त या संपूर्ण रक्त। सेलुलर संरचनाओं की संरचना से न्यूक्लिक एसिड को मुक्त करने के लिए, कोशिकाओं को lysed किया जाता है, और कुछ मामलों में फिनोल का उपयोग करके डीएनए की तैयारी को शुद्ध किया जाता है।

क्षार के साथ उपचार के दौरान डीएनए का विकृतीकरण, यानी एकल-फंसे हुए रूप में इसका संक्रमण होता है। न्यूक्लिक एसिड का नमूना तब एक नाइट्रोसेल्यूलोज या नायलॉन झिल्ली वाहक पर तय किया जाता है, आमतौर पर वैक्यूम के तहत 80 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट से 4 घंटे के लिए ऊष्मायन द्वारा। इसके अलावा, प्रीहाइब्रिडाइजेशन की प्रक्रिया में, झिल्ली के साथ जांच की गैर-विशिष्ट बातचीत को कम करने के लिए मुक्त बाध्यकारी साइटों को निष्क्रिय किया जाता है। संकरण प्रक्रिया में 2 से 20 घंटे लगते हैं, जो नमूने में डीएनए की सांद्रता, उपयोग की गई जांच की सांद्रता और उसके आकार पर निर्भर करता है।

संकरण पूरा होने के बाद और अनबाउंड उत्पादों को धोया जाता है, परिणामी परिसर का पता लगाया जाता है। अगर जांच में एक रेडियोधर्मी लेबल होता है, तो प्रतिक्रिया (ऑटोरेडियोग्राफी) प्रकट करने के लिए झिल्ली को फोटोग्राफिक फिल्म के संपर्क में लाया जाता है। अन्य लेबल के लिए, उपयुक्त प्रक्रियाओं का उपयोग करें।

सबसे आशाजनक गैर-रेडियोधर्मी (तथाकथित ठंड) जांच का उत्पादन है। उसी आधार पर, एक संकरण तकनीक विकसित की जा रही है जो वर्गों, ऊतक पंचर की तैयारी में एक रोगज़नक़ की उपस्थिति को स्थापित करना संभव बनाती है, जो विशेष रूप से पैथोमॉर्फोलॉजिकल विश्लेषण (सीटू संकरण) में महत्वपूर्ण है।

जीन जांच विधियों के विकास में एक आवश्यक कदम पोलीमरेज़ प्रवर्धन प्रतिक्रिया (पीसीआर) का उपयोग था। यह दृष्टिकोण इन विट्रो में कई प्रतियों को संश्लेषित करके एक नमूने में एक विशिष्ट (पहले से ज्ञात) डीएनए अनुक्रम की एकाग्रता को बढ़ाना संभव बनाता है। प्रतिक्रिया को पूरा करने के लिए, एक डीएनए पोलीमरेज़ एंजाइम की तैयारी, संश्लेषण के लिए डीऑक्सीन्यूक्लियोटाइड्स की अधिकता और तथाकथित प्राइमरों, 20-25 आधारों के दो प्रकार के ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स, ब्याज के डीएनए अनुक्रम के टर्मिनल वर्गों के अनुरूप जोड़े जाते हैं। अध्ययन के तहत डीएनए नमूना। प्राइमरों में से एक को 53 रीडिंग डायरेक्शन में कोडिंग डीएनए स्ट्रैंड के रीडिंग रीजन की शुरुआत की कॉपी होना चाहिए, और दूसरा नॉन-कोडिंग स्ट्रैंड के विपरीत छोर की कॉपी होना चाहिए। फिर, पोलीमरेज़ प्रतिक्रिया के प्रत्येक चक्र के साथ, डीएनए प्रतियों की संख्या दोगुनी हो जाती है।

प्राइमरों के बंधन के लिए, 94 डिग्री सेल्सियस पर डीएनए विकृतीकरण (पिघलना) की आवश्यकता होती है, इसके बाद मिश्रण को 4055 डिग्री सेल्सियस तक लाया जाता है।

प्रतिक्रिया को पूरा करने के लिए, प्रोग्रामेबल माइक्रोसैंपल इन्क्यूबेटरों को आसानी से वैकल्पिक तापमान परिवर्तन के लिए डिज़ाइन किया गया था जो प्रतिक्रिया के प्रत्येक चरण के लिए इष्टतम हैं।

प्रवर्धन प्रतिक्रिया जीन जांच के दौरान विश्लेषण की संवेदनशीलता को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ा सकती है, जो विशेष रूप से संक्रामक एजेंट की कम सांद्रता पर महत्वपूर्ण है।

प्रवर्धन के साथ जीन जांच के महत्वपूर्ण लाभों में से एक रोग संबंधी सामग्री की एक सबमरोस्कोपिक मात्रा का अध्ययन करने की संभावना है।

विधि की एक अन्य विशेषता, संक्रामक सामग्री के विश्लेषण के लिए अधिक महत्वपूर्ण, छिपे हुए (चुप) जीनों का पता लगाने की क्षमता है। संक्रामक रोगों के निदान के अभ्यास में जीन जांच के उपयोग से संबंधित तरीके निश्चित रूप से अधिक व्यापक रूप से पेश किए जाएंगे क्योंकि वे सरल और सस्ते हो जाते हैं।

एलिसा और आरआईएफ विधियां ज्यादातर गुणात्मक या अर्ध-मात्रात्मक होती हैं। घटकों की बहुत कम सांद्रता पर, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन को या तो दृष्टि से या साधारण उपकरण के माध्यम से पंजीकृत नहीं किया जा सकता है। ऐसे मामलों में एंटीजन एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का संकेत दिया जा सकता है यदि शुरुआती घटकों में से एक एंटीजन या एंटीबॉडी एक लेबल पेश करता है जिसे निर्धारित किए जाने वाले विश्लेषण की एकाग्रता के तुलनीय सांद्रता में आसानी से पता लगाया जा सकता है।

रेडियोधर्मी आइसोटोप (उदाहरण के लिए, 125I), फ्लोरोसेंट पदार्थ और एंजाइम को लेबल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है।

उपयोग किए गए लेबल के आधार पर, रेडियोइम्यून (आरआईए), फ्लोरोसेंट इम्यून (एफआईए), एंजाइम इम्यूनोएसे (एलिसा) विश्लेषण के तरीके आदि हैं। पिछले साल काएलिसा को व्यापक व्यावहारिक अनुप्रयोग प्राप्त हुआ है, जो मात्रात्मक निर्धारण, उच्च संवेदनशीलता, विशिष्टता और लेखांकन के स्वचालन की संभावना से जुड़ा है।

विश्लेषण के एलिसा तरीके तरीकों का एक समूह है जो रंग की उपस्थिति के साथ एक एंजाइम द्वारा क्लीव किए गए सब्सट्रेट का उपयोग करके एंटीजन एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता लगाने की अनुमति देता है।

विधि का सार एक मापा एंजाइम लेबल के साथ एंटीजन एंटीबॉडी प्रतिक्रिया के घटकों के संयोजन में निहित है। प्रतिक्रिया करने वाले एंटीजन या एंटीबॉडी को एक एंजाइम के साथ लेबल किया जाता है। एंजाइम की कार्रवाई के तहत सब्सट्रेट के परिवर्तन से, कोई एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया घटक की मात्रा का न्याय कर सकता है जो बातचीत में प्रवेश कर चुका है। में एंजाइम इस मामले मेंप्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के एक मार्कर के रूप में कार्य करता है और आपको इसे नेत्रहीन या यंत्रवत् देखने की अनुमति देता है।

एंजाइम बहुत सुविधाजनक लेबल होते हैं क्योंकि उनके उत्प्रेरक गुण उन्हें बढ़ाने वाले के रूप में कार्य करने की अनुमति देते हैं, क्योंकि एक एंजाइम अणु प्रति मिनट 1 x 105 से अधिक उत्प्रेरक उत्पाद अणुओं का उत्पादन कर सकता है। एक एंजाइम चुनना आवश्यक है जो लंबे समय तक अपनी उत्प्रेरक गतिविधि को बनाए रखता है, एंटीजन या एंटीबॉडी से बंधे होने पर इसे नहीं खोता है और सब्सट्रेट के संबंध में उच्च विशिष्टता रखता है।

एक एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी या एंटीजन प्राप्त करने के लिए मुख्य तरीके, संयुग्म: रासायनिक, प्रतिरक्षाविज्ञानी और आनुवंशिक इंजीनियरिंग। एलिसा के लिए अक्सर एंजाइमों का उपयोग किया जाता है: हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज, क्षारीय फॉस्फेट, गैलेक्टोसिडेज, आदि।

प्रतिजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में एंजाइम की गतिविधि का पता लगाने के लिए, प्रतिक्रिया के दृश्य और वाद्य पंजीकरण के उद्देश्य से, क्रोमोजेनिक सबस्ट्रेट्स का उपयोग किया जाता है, जिसके समाधान, शुरू में बेरंग, एंजाइमी प्रतिक्रिया के दौरान एक रंग प्राप्त करते हैं, जिसकी तीव्रता एन्जाइम की मात्रा के समानुपाती होता है। इस प्रकार, ठोस-चरण एलिसा में हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज की गतिविधि का पता लगाने के लिए, 5अमिनोसैलिसिलिक एसिड को एक सब्सट्रेट के रूप में उपयोग किया जाता है, जो एक तीव्र भूरा रंग, ऑर्थोफेनिलीनडायमाइन देता है, जो एक नारंगी-पीला रंग बनाता है। क्षारीय फॉस्फेटेज और गैलाटोसिडेज की गतिविधि का पता लगाने के लिए क्रमशः नाइट्रोफेनिलफॉस्फेट्स और नाइट्रोफेनिलगैलेक्टोसाइड्स का उपयोग किया जाता है।

रंगीन उत्पाद के निर्माण में प्रतिक्रिया का परिणाम नेत्रहीन या एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है जो एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के साथ प्रकाश के अवशोषण को मापता है।

एलिसा के मंचन के लिए कई विकल्प हैं। सजातीय और विषम रूप हैं।

सेटिंग की विधि के अनुसार, प्रतिस्पर्धी और गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा विधियों को प्रतिष्ठित किया जाता है। यदि पहले चरण में केवल विश्लेषित यौगिक और उसके संबंधित बाध्यकारी केंद्र (एंटीजन और विशिष्ट एंटीबॉडी) सिस्टम में मौजूद हैं, तो विधि गैर-प्रतिस्पर्धी है। यदि विश्लेषित यौगिक (एंटीजन) और इसके एनालॉग (एंजाइम-लेबल वाले एंटीजन) पहले चरण में मौजूद हैं, तो कमी में मौजूद विशिष्ट बाध्यकारी केंद्रों (एंटीबॉडी) से जुड़ने के लिए एक दूसरे के साथ प्रतिस्पर्धा कर रहे हैं, तो विधि प्रतिस्पर्धी है। इस मामले में, परीक्षण एंटीजन में समाधान जितना अधिक होता है, बाध्य लेबल वाले एंटीजन की मात्रा उतनी ही कम होती है।

फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि (एमएफए) या इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रियाएं (आरआईएफ)

परीक्षण सामग्री में एक अज्ञात सूक्ष्मजीव की तेजी से पहचान और पहचान के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंट विधि पसंद की विधि है।

एजी + एटी + इलेक्ट्रोलाइट = यूवी चमकदार परिसर

माइक्रोब सीरम फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किया गया

डाई फ़्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट का उपयोग अक्सर FITC किया जाता है

इस अध्ययन में, एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है।

आरआईएफ मंचन

स्मीयर पर FITC-लेबल वाले एंटीबॉडी के घोल का 30 μl लगाया जाता है।

कांच को एक आर्द्र कक्ष में रखें और कमरे के तापमान पर 20-25 मिनट के लिए, या थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए रखें।

2 मिनट के लिए नल के बहते पानी में गिलास को खंगालें, आसुत जल से खंगालें और हवा में सुखाएं।

बढ़ते तरल की एक बूंद को सूखे स्मीयर पर लगाया जाता है, स्मीयर को एक कवर स्लिप के साथ कवर किया जाता है और एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप या एक पारंपरिक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के लिए एक फ्लोरोसेंट अटैचमेंट का उपयोग करके माइक्रोस्कोप किया जाता है।

समूहन प्रतिक्रिया (लेट से। भागों का जुड़ना- बॉन्डिंग) - इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ कॉर्पसकल (बैक्टीरिया, एरिथ्रोसाइट्स, आदि) का बंधन।

समूहन प्रतिक्रियाखुद को गुच्छे या तलछट के रूप में प्रकट करता है, जिसमें कणिकाएं होती हैं (उदाहरण के लिए, बैक्टीरिया), एंटीबॉडी द्वारा "एक साथ चिपके" (चित्र। 7.37)। समूहन प्रतिक्रिया का उपयोग निम्न के लिए किया जाता है: रोगी से अलग किए गए रोगज़नक़ का निर्धारण करना; रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण; रक्त समूहों का निर्धारण।

चावल। 7.37 ए, बी. के साथ समूहन प्रतिक्रियाआईजीएम-एंटीबॉडी (ए) औरआईजीजी-एंटीबॉडी (बी)

1. रोगी से अलग किए गए रोगज़नक़ का निर्धारण कांच पर अनुमानित समूहन प्रतिक्रिया (चित्र। 7.38)। रोगी से अलग किए गए बैक्टीरिया के निलंबन को एग्लूटिनेटिंग सीरम (कमजोर पड़ने 1:20) की एक बूंद में जोड़ा जाता है। एक परतदार अवक्षेप बनता है।

चावल। 7.38।

एक रोगी से पृथक एक रोगज़नक़ के साथ एक विस्तारित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (चित्र। 7.39)। रोगी से अलग किए गए बैक्टीरिया के निलंबन को एग्लूटिनेटिंग सीरम के कमजोर पड़ने में जोड़ा जाता है।

चावल। 52

2. रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण
रोगी के रक्त सीरम के साथ एक विस्तारित समूहन प्रतिक्रिया (चित्र 7.39)। रोगी के सीरम के तनुकरण में डायग्नोस्टिकम मिलाया जाता है।
- ओ-डायग्नोस्टिकम के साथ एग्लूटिनेशन (गर्म करने से मारे गए बैक्टीरिया, 0-एंटीजन को बनाए रखना) ठीक-दाने वाली एग्लूटिनेशन के रूप में होता है।
- एच-डायग्नोस्टिकम के साथ एग्लूटिनेशन (फॉर्मेलिन द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बरकरार रखते हुए) मोटे दाने वाले होते हैं और तेजी से आगे बढ़ते हैं।
3. रक्त समूहों का निर्धारण करने के लिए समूहन परीक्षणरक्त समूहों के निर्धारण के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग रक्त समूह ए (I), बी (III) के प्रतिजनों के खिलाफ प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स को जोड़कर एबीओ सिस्टम (टेबल बी) स्थापित करने के लिए किया जाता है। नियंत्रण हैं: सीरम जिसमें एंटीबॉडी नहीं होते हैं, अर्थात। सीरम एबी (चतुर्थ) रक्त समूह; समूह ए (द्वितीय), बी (III) के एरिथ्रोसाइट्स में निहित एंटीजन। नकारात्मक नियंत्रण में कोई प्रतिजन नहीं होता है, अर्थात समूह O (I) एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है।

तालिका 7.6। एबीओ रक्त समूहों का निर्धारण