Maddelerin analizinde WLHMS kullanımı. Bilim ve eğitimin modern sorunları. Klinik tahlillerde tandem kütle spektrometrisi ile kombinasyon halinde sıvı kromatografi kullanımına ilişkin örnekler

anahtar kelimeler

dipnot veterinerlik bilimleri üzerine bilimsel makale, bilimsel çalışmanın yazarı - Chakhovskiy Pavel Anatolyevich, Yantsevich Alexey Viktorovich, Dmitrochenko Alesya Egorovna, Ivanchik Alexander Viktorovich

Antropojenik faktörlerin etkisi, insan vücudu ve hayvanlar üzerinde çok yönlü bir etkiye sahiptir. Karmaşık etkileriyle bağlantılı olarak, bireysel faktörlerin olumsuz etkilerini belirlemek oldukça zor bir iştir. Bu zorlukların üstesinden gelmeyi mümkün kılan metabolomik metodoloji, potaslı gübre üretiminden kaynaklanan atığın deney hayvanlarının lipit profilleri üzerindeki etkisinin doğasını ve derecesini değerlendirmede uygulandı. ve tüketimi içme suyu potansiyel potas üretimi alanında bulunan kaynaklardan elde edilmiştir. Lipitlerin serumdan izolasyonu, numunelerden kolesterolün uzaklaştırılmasına izin veren katı faz ekstraksiyonuna dayalı özel olarak geliştirilmiş bir teknik kullanılarak gerçekleştirildi. Her numune, kütle spektrometrik algılamalı (HPLC-MS) yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile analiz edildi, ardından elde edilen kromatogramlar, temel bileşenler (PCA) yöntemi ve küme analizi kullanılarak işlendi. Geliştirilen teknik, kan serumundaki hidrofobik metabolitlerin etkili bir şekilde ayrılmasını mümkün kılmaktadır. Deney hayvanlarının kan serumunun lipid profili, özellikle fosfolipidlerin ve oksisteroidlerin içeriği belirlendi ve deney ve kontrol hayvanları arasındaki metabolik süreçlerde farklılıklar bulundu. Deney hayvanlarının kan serumunda, kontrol grubuna göre oksisteroid konsantrasyonu arttı.

İlgili konular veterinerlik bilimlerinde bilimsel makaleler, bilimsel çalışmaların yazarı - Chakhovskiy Pavel Anatolyevich, Yantsevich Alexey Viktorovich, Dmitrochenko Alesya Egorovna, Ivanchik Alexander Viktorovich

• Sıçan karaciğer hepatositlerinin organellerinin, endüstriyel frekansta genlik modülasyonlu bir manyetik alanın etkisine tepkisi

  2014 / Belkin Anatoly Dmitrievich, Michurina Svetlana Viktorovna

• Çiğ ette hormonal müstahzarların kitle seçici olarak tanımlanması. ß-agonistlerin analizi

  2016 / Kulikovsky A.V., Kuznetsova O.A., Ivankin A.N.

• Suda yaşayan organizmalarda ubiquinone tayini için yüksek performanslı sıvı kromatografisinin kullanımı

  2003 / Rybin V. G.

• Sıçanların idrarında N7--etil]-guanin'in kükürt hardalına maruz kalmanın bir belirteci olarak belirlenmesi

  2017 / Orlova Olga Igorevna, Karakashev Georgy Vasilyevich, Shmurak Vladimir Igorevich, Abzianidze Victoria Vladimirovna, Savelyeva Elena Igorevna

• Pozitif yüklü iyonları tespit etme modunda ursodeoksikolik asidin analizi için bir HPLC-MS yönteminin geliştirilmesi

  2013 / Ilya Aleksandrovich Krasnov, D. E. Bobkov, M. Zaitseva, S. S. Prisyach, N. V. Krasnov

• Enfeksiyöz ve enflamatuar hastalıkların hızlı teşhisi için trombodefensinlere dayalı yeni nesil test sistemleri oluşturmak için teknolojinin geliştirilmesi

  2015 / Ivanov Yury Borisovich, Vasilchenko Alexey Sergeevich

• HPLC-MS/MS ile Karbamazepin ve Karbamazepin-10,11-Epoksitin Eşzamanlı Tayini için Prosedür

  2015 / Rodina T.A., Melnikov E.S., Sokolov A.V., Prokofiev A.B., Arkhipov V.V., Adamov G.V., Pozdnyakov D.L., Olefir Yu.V.

• Bitkisel yağların yağ asitleri ve steroidlerinin bileşimi

  2006 / Khasanov V. V., Ryzhova G. L., Dychko K. A., Kuryaeva T. T.

• Biyolojik materyalde gidazepamın kromatomas spektrometresi ile belirlenmesi için bir yöntemin geliştirilmesi ve doğrulanması

  2015 / A.V. Çubenko, M.A. Savçenko

• Terapötik ilaç takibi için kan serumunda siklosporin a tayini

  2008 / Fedorova G.A., Podolskaya E.P., Novikov A.V., Lyutvinsky Ya.I., Krasnov N.V.

ÇEVRESEL KİRLEŞTİRİCİLERE MARUZ KALMA ALTINDA METABOLİZMA DEĞİŞİKLİKLERİNİN ERKEN TESPİTİ İÇİN GİNE PİGLERİNDE SERUM LİPİD PROFİLLERİNİN ANALİZİ

Antropojenik faktörlere maruz kalmanın insan ve hayvan vücudu üzerinde çok yönlü bir etkisi vardır. Karmaşık etkileri nedeniyle, belirli faktörlerin olumsuz etkilerinin tespiti oldukça karmaşık bir iştir. Bu zorlukların üstesinden gelmeyi sağlayan metabolik metodoloji, potaslı gübre üretim atıklarının, potaslı gübre üretim atıkları ile intranazal aşılama ve kaynaklardan elde edilen içme suyunun tüketimi sonrasında deney hayvanlarının lipid profilleri üzerindeki etkisinin doğası ve derecesinin değerlendirilmesinde uygulanmıştır. potasik gübre üretiminin potansiyel etki bölgesinde yer almaktadır. Lipidlerin serumdan izolasyonu, numunelerden kolesterinin uzaklaştırılmasına izin veren numunelerin katı faz ekstraksiyonuna dayanan özel olarak geliştirilmiş bir teknik yardımıyla gerçekleştirildi. Her numune, HPLC-MS analizine tabi tutuldu, ardından elde edilen kromatogramlar, temel bileşen analizi ve küme analizi yöntemi kullanılarak işlendi. Geliştirilen teknik, kan serumundaki hidrofobik metabolitlerin verimli bir şekilde ayrılmasını sağlar. Deney hayvanlarının, özellikle fosfolipidlerin ve oksisteroidlerin içeriği olmak üzere yerleşik bir serum lipid profili vardı ve test ve kontrol hayvanlarının metabolik süreçlerinde farklılıklar bulundu. Deney hayvanlarının serumlarında, kontrol grubuna göre artmış bir hidroksisteroid konsantrasyonu gözlendiği gösterilmiştir.

Bilimsel çalışmanın metni "Çevresel kirleticilere maruz kaldıklarında metabolizmadaki erken değişiklikleri saptamak için kobayların kan serumunun lipid profillerinin analizine yönelik WLC-MS yöntemi" konusunda

[sırtlan ve sanitasyon 3/2014

Chakhovskiy P.A.1, Yantsevich A.V.2, Dmitrochenko A.E.2, Ivanchik A.V.2

KAN SERUMUNDAKİ LİPİT PROFİLLERİNİN ANALİZİ İÇİN HPLC-MS-YÖNTEMİ

kobaylar, kirleticilere maruz kaldıklarında erken metabolik değişiklikleri tespit etmek için çevre

TU "Cumhuriyet Bilimsel ve Pratik Hijyen Merkezi", 220012, Minsk, Beyaz Rusya; ^ Belarus Ulusal Bilimler Akademisi Biyoorganik Kimya Enstitüsü, 220141, Minsk, Belarus Cumhuriyeti

Antropojenik faktörlerin etkisi, insan vücudu ve hayvanlar üzerinde çok yönlü bir etkiye sahiptir. Karmaşık etkileriyle bağlantılı olarak, bireysel faktörlerin olumsuz etkilerini belirlemek oldukça zor bir iştir. Bu zorlukların üstesinden gelmeyi mümkün kılan metabolomik metodoloji, potaslı gübre üretiminden kaynaklanan atıkların intranazal tohumlama sırasında deney hayvanlarının lipit profilleri üzerindeki potaslı gübre üretiminden kaynaklanan atığın etkisinin niteliğini ve kapsamını değerlendirmek için uygulandı. ve potansiyel potas üretimi bölgesinde bulunan kaynaklardan elde edilen içme suyunun tüketimi. Lipitlerin serumdan izolasyonu, numunelerden kolesterolün uzaklaştırılmasına izin veren katı faz ekstraksiyonuna dayalı özel olarak geliştirilmiş bir teknik kullanılarak gerçekleştirildi. Her numune, kütle spektrometrik algılamalı (HPLC-MS) yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile analiz edildi, ardından elde edilen kromatogramlar, temel bileşenler (PCA) yöntemi ve küme analizi kullanılarak işlendi. Geliştirilen teknik, kan serumundaki hidrofobik metabolitlerin etkili bir şekilde ayrılmasını mümkün kılmaktadır. Deney hayvanlarının kan serumunun lipid profili, özellikle fosfolipidlerin ve oksisteroidlerin içeriği belirlendi ve deney ve kontrol hayvanları arasındaki metabolik süreçlerde farklılıklar bulundu. Deney hayvanlarının kan serumunda, kontrol grubuna göre oksisteroid konsantrasyonu arttı.

Anahtar Kelimeler: steroidler; lipidler; kan serumu; metabolik profil; endüstriyel atık.

P. A. Chakhovskiy1, A. V Yantsevich2, A. E. Dmitrochenko2, A. V. Ivanchik2 - ÇEVRESEL KİRLEŞTİRİCİLERE MARUZ KALMA ALTINDA METABOLİZMA DEĞİŞİKLİKLERİNİN ERKEN TESPİT EDİLMESİ İÇİN GİNE PİGLERİNDEKİ SERUM LİPİD PROFİLLERİNİN ANALİZİ

1Cumhuriyet Bilimsel ve Pratik Hijyen Merkezi, Minsk, Belarus Cumhuriyeti, 220012; 2Biyoorganik Kimya Enstitüsü, Minsk, Belarus Cumhuriyeti, 220141

Yazışma için: Chakhovskiy Pavel Anatolyevich, [e-posta korumalı]. iletişim

Antropojenik faktörlere maruz kalmanın insan ve hayvan vücudu üzerinde çok yönlü bir etkisi vardır. Karmaşık etkileri nedeniyle, belirli faktörlerin olumsuz etkilerinin tespiti oldukça karmaşık bir iştir. Bu zorlukların üstesinden gelmeyi sağlayan metabolik metodoloji, potaslı gübre üretim atığının deney hayvanlarının lipit profilleri üzerindeki etkisinin doğası ve derecesinin, potaslı gübre üretim atığı ile intranazal aşılamadan sonra ve bulunan kaynaklardan elde edilen içme suyunun tüketiminde uygulanmıştır. potasik gübre üretiminin potansiyel etki bölgesinde. Lipidlerin serumdan izolasyonu, numunelerden kolesterinin uzaklaştırılmasına izin veren numunelerin katı faz ekstraksiyonuna dayanan özel olarak geliştirilmiş bir teknik yardımıyla gerçekleştirildi. Her numune, HPLC-MS analizine tabi tutuldu, ardından elde edilen kromatogramlar, ana bileşen analizi ve küme analizi yöntemi kullanılarak işlendi. Geliştirilen teknik, kan serumundaki hidrofobik metabolitlerin verimli bir şekilde ayrılmasını sağlar. Deney hayvanlarının, özellikle fosfolipidlerin ve oksisteroidlerin içeriği olmak üzere yerleşik bir serum lipid profili vardı ve test ve kontrol hayvanlarının metabolik süreçlerinde farklılıklar bulundu. Deney hayvanlarının serumlarında, kontrol grubuna göre artmış bir hidroksisteroid konsantrasyonu gözlendiği gösterilmiştir.

Anahtar kelimeler: steroidler, lipidler, kan serumu, metabolik profil, endüstriyel atıklar.

giriiş

Sistem biyolojisi ve fonksiyonel genetiğin en önemli görevlerinden biri, proteomik, transkriptomik ve vücutta meydana gelen metabolik süreçler hakkındaki bilgilerin entegrasyonudur. Vücutta meydana gelen herhangi bir hastalık veya patolojik süreç, doku ve kandaki düşük moleküler ağırlıklı metabolitlerin içeriğine yansır. 1971'de, kan plazmasının düşük moleküler ağırlıklı metabolitlerinin bütünsel karakterizasyonu için "metabolik profil" terimi tanıtıldı. Birkaç metabolit sınıfının eşzamanlı analizi son derece karmaşık ve pratik olarak gerçekçi olmadığından, metabolik profilleri incelemek için yaygın olarak yüksek çözünürlüklü nükleer manyetik rezonans (NMR) spektroskopisi ve kromato-kütle spektrometresi dahil bir dizi yöntem kullanılır.

Kural olarak, metabolomik çalışmalar, numune hazırlama sırasında diğer bileşenlerden ayrılan belirli bir grup madde ile sınırlıdır. Ortaya çıkan grup verilerinin yorumlanması daha kolaydır.

Metabolik profiller (özellikle idrar ve kan plazması), vücutta toksik bileşiklerin alınmasının neden olduğu fizyolojik değişikliklerin doğasını belirlemek için kullanılabilir. Çoğu durumda, gözlemlenen değişiklikler, karaciğer ve yağ dokusu gibi spesifik lezyonların ek karakterizasyonunu sağlayabilir.

Kan serumundaki steroid ve lipid içeriğinin analizi, büyük bir teşhis potansiyeline sahiptir. Kan serumunun lipit bileşimi, steroid hormonları, bunların öncüleri ve metabolik dönüşümlerinin ürünleri, organizmanın birçok fonksiyonel parametresini karakterize eder. Bu maddeler, metabolizma ve kardiyovasküler fonksiyonun düzenlenmesinde önemli bir koordinasyon rolü oynarlar ve vücudun akut ve kronik strese verdiği yanıtta yer alırlar.

Steroid profili, bir dizi jinekolojik ve onkolojik hastalıklar steroid hormonlarının bozulmuş sentez ve metabolizması ile ilişkilendirilirken, bazıları sadece steroid profili ile teşhis edilebilir. Profil analizinde mutlak değerleri basit değişkenler olarak kullanma ve norm ile karşılaştırma imkanı çok önemlidir. Bununla birlikte, büyüklüklerin oranını değiştirmek daha önemli olabilir. Ek olarak, steroid profili aynı anda çok sayıda steroid hakkında bilgi sağlar.

Kan serumunun steroid profilinin belirlenmesi - etkili yöntem koymanıza izin veren steroid metabolizmasının hemen hemen tüm bozukluklarının tespiti

birçok klinik durumda, örneğin konjenital adrenal hiperplazi, tip I hiperaldosteronizm, primer hiperaldosteronizm, Itsenko-Cushing hastalığı, adrenal yetmezlik vb. bezlerin yanı sıra hipotalamik hipofiz-adrenal yetmezlik.

Potasyumlu gübre atıklarının baskın bileşeni olan tuzun aşırı kilolu deneysel sıçanların vücuduna aşırı alınması aldosteron sentezinin aşırı aktivasyonuna yol açarak hipertansiyon ve metabolik sendrom ile böbrek hasarına neden olur.

Yüksek derecede çevre kirliliğine sahip endüstriyel üretim bölgelerinde, nüfusun insidans oranı genellikle nispeten “temiz” bölgelere göre daha yüksektir. Araştırmamızın amacı, büyük ölçekli madencilik ve potas cevherlerinin işlenmesi bölgesinde bulunan Soligorsk şehriydi. Potas tesislerinin tuz çöplükleri ve çamur depoları alanlarında, yeraltı suyunu 100 m'den daha derine kadar kaplayan ve içme suyu tedarik kaynaklarının ve atmosferik havanın kirlenmesini etkileyebilecek bir sodyum klorür tuzlanma bölgesi oluşmuştur.

Potaslı gübrelerin endüstriyel üretimi bölgesindeki bireysel çevresel bileşenlerin kirliliğinin etkisini değerlendirmek için, bir kimyasal karışımının etkisi altında erken metabolik bozuklukların bir göstergesi olarak kan serumunun lipid profillerini analiz ettik.

Çalışmanın amacı, kütle spektrometrik algılamalı (HPLC-MS) yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanarak, üretim atıklarından potansiyel olarak etkilenen kaynaklardan elde edilen içme suyunun tüketimi ve potas üretim atığına maruz kalma sırasında laboratuvar hayvanlarında meydana gelen metabolik değişiklikleri belirlemektir.

Çalışmanın amacı, deney ve kontrol gruplarındaki deney hayvanlarının (kobay) kan serumuydu.

Malzemeler ve yöntemler

Ağırlıkları 305-347 g olan 35 kobay (17 dişi ve 18 erkek) üzerinde deneysel çalışmalar yapılmıştır.

[sırtlan ve sanitasyon 3/2014

Deney grubu (potaslı gübrelerin endüstriyel üretiminden kaynaklanan atıklarla tohum ve içme suyu Soligorsk su temin sisteminden), 20 kişi (10 kadın ve 10 erkek);

Kontrol grubu (hazırlama işleminin neden olduğu stres faktörünün etkilerini ortadan kaldırmak için izotonik sodyum klorür solüsyonu ile hazırlama), 15 kişi (8 erkek ve 7 kadın).

Deney süresince günlük gözlemler yapılmıştır. Genel durum hayvanlar, yiyecek ve su tüketimi.

Potas gübrelerinin üretiminden kaynaklanan atıkların kronik inhalasyon maruziyetini (12 hafta) simüle etmek için, MU. çalışma alanı" dahil olmak üzere tohum dozunun belirlenmesi takip edilmiştir. Tuz çöplüklerinden alınan numuneler, deney hayvanlarının vücut ağırlıkları dikkate alınarak (dozu ayarlamak için vücut ağırlığı haftalık olarak izlendi) gerekli konsantrasyona kadar damıtılmış suda çözündürülmüş homojen bir toz haline gelinceye kadar bir mermer havanda öğütüldü. Hesaplanan dozlar: deneyin başında - 2,028 mg / 0,1 cm3, 4 hafta sonra - 2,85 mg / 0,1 cm3, 6 hafta sonra - 3,17 mg / 0,1 cm3, 8 hafta sonra ve deney sonuna kadar 3,8 mg/0,1 cm3.

Anestezi uygulanmayan bir kobay, başı yukarıda olacak şekilde sırtüstü pozisyonda sabitlendi, bir pipet dağıtıcı ile burun deliklerine dönüşümlü olarak (kısmi olarak) (2-3 dakika içinde) hapşırmayı önleyecek şekilde bir doz ılık solüsyon enjekte edildi. Ortaya çıkan "ezilme" sesleri, solüsyonun solunum yoluna girdiğini doğruladı.

Deney hayvan grubu, karışımı 12 hafta boyunca haftada 5 gün, günde bir kez "solundu". Kontrol grubundaki hayvanlar fizyolojik salini (%0.9 NaCl) "solundu".

Biyolojik materyalin seçimi için hayvanlara anestezi uygulandı (eter anestezisi), dekapitasyondan sonra kan alındı. 3000 rpm'de 15 dakika santrifüj edilerek serum elde edildi ve sonraki çalışmalar için -20 C'de saklandı. Kan serumunda fosfolipidler, oksisteroidler ve yağ asitleri analiz edildi.

Örnek hazırlama. 10-5 M'lik bir konsantrasyona ulaşılana kadar (1 ml numune başına 10 ul) kan serumuna bir iç standart olan progesteron eklendi. Daha sonra numunede bulunan proteinleri çökeltmek ve steroidleri çıkarmak için, %70 nihai konsantrasyona (1 ml numune başına 2.33 ml metanol) kadar metanol ilave edildi, ardından 15 dakika 10.000 g'de santrifüjlendi. Numunede bulunan proteinler yoğun bir çökelti oluşturdu. Süpernatan peletten ayrıldı ve 100 mg oktadesilsilil silika jel içeren önceden şartlandırılmış bir katı faz özütleme (SPE) kolonundan geçirildi. SFE kolonu, sırasıyla 2 ml metanol, 2 ml su ve 2 ml %70 metanol geçirilerek şartlandırıldı. İlk aşamada, kan plazmasında ve diğer biyolojik sıvılarda içeriği oldukça yüksek olan kolesterol ve ayrıca bir dizi diğer yüksek derecede hidrofobik lipidler kolona bağlanır. Kolesterol bağlanmasından sonra, kolon ayrıca 2 ml %70 metanol ile yıkandı. Numunede yüksek kolesterol içeriği veya numunenin büyük hacmi varsa, kullanın

yüksek miktarda sorbent içeren bir TFE kolonu kullandı. Eluatlar birleştirildi ve buharlaştırıldı. Buharlaştırma, 50°C'de bir inert gaz jeti içinde gerçekleştirildi. Kuru tortu, 500 ul metanol içerisinde çözündürüldü ve 10 dakika 10,000 g'de santrifüjlendi. Bu durumda polar, metanolde çözünmeyen bileşikler çöktü. Süpernanant, çökeltiden ayrıldı ve %10'luk bir metanol konsantrasyonuna kadar su ile seyreltildi. Nihai çözelti, önceden şartlandırılmış bir TFE kolonundan geçirildi (2 ml metanol, 2 ml su ve 2 ml %10 metanol geçirildi) ve 2 ml %10 metanol ile yıkandı. Kolona bağlanan steroidler, 3 ml %80 metanol ile yıkandı. Solüsyon buharlaştırıldı ve kuru tortu, 100 ul metanol içerisinde çözündürüldü. Nihai çözelti, HPLC-MS kullanılarak analiz edildi.

HPLC analizi. Analiz, bir LCQ-Fleet kütle spektrometrik detektörü ile donatılmış bir Accela kromatografı üzerinde gerçekleştirildi. Ayırma, 4.6*150 mm (Nacalai Tesque, Japonya) geometrik parametrelere sahip bir Cosmosil 5C18-MS-II kolonu üzerinde gerçekleştirildi.

Ayırma programı (solvent A - su, solvent B - metanol, akış hızı 500 μl / dak): 5 dk için %60 B, 12 dk - lineer gradyan %60-95 B, 10 dk - %95 B, 8 dk - lineer eğim %95-100 B, 5 dk - %100 B, 5 dk - %60 B.

Kütle spektrometrik analiz için, bir kimyasal iyonlaşma kaynağı kullanıldı. atmosferik basınç(APCI). İyonizasyon kaynağı parametreleri: evaporatör sıcaklığı - 350°C, kurutma gazı akışı - 35 ünite, yardımcı gaz akışı - 5 ünite, kılcal sıcaklık - 275°C, kılcal voltaj - 18 V, iyon hedefindeki voltaj - 80 V. Kullanılan veriler- 50-1000 m/z tarama aralığında bir iyon tuzağı kullanan bağımlı tarama modu (Data Dependent™).

Kimyasal iyonlaşma modunda (toplam iyon akımı) kütle spektrometrik dedektör ile elde edilen kromatogramlar, Xcalibur paketinden (Thermo Sci, Amerika Birleşik Devletleri) Qual Browser programı kullanılarak metin formatına dönüştürüldü. Elde edilen bilgiler, Statistica 10 paketinde uygulanan ana bileşen yöntemi ve küme analizi ve dendrogramların oluşturulması için araçlar kullanılarak işlendi. Kütle spektrumlarını yorumlamak ve tek tek bileşikleri tanımlamak için bir el kitabı kullanıldı.

Sonuçlar ve tartışma

Adaptasyon için bir başlangıç ​​yöntemi olarak, "Macherey-Nagel" şirketinin el kitabında açıklanan, serum ve kan plazmasından steroidlerin katı faz ekstraksiyonu yöntemi kullanıldı. Katı faz ekstraksiyonu. SPE sütunlarını kullanmak için öneriler içeren uygulama kılavuzu. Katı faz ekstraksiyonu ile uyarlanmış numune hazırlama tekniği, fosfolipitleri, hidroksisteroidleri ve yağ asitlerini kobayların kan serumundan verimli bir şekilde izole etmeyi mümkün kıldı.

Açıklanan kromatografik ayırma tekniği, hem steroid hormonlarını hem de serum lipidlerini verimli bir şekilde ayırmayı mümkün kılar.

Numuneler açıklanan yöntemlere göre analiz edildi. Şek. 1 (bkz. 2. kapak sayfası), bir örnek için, deney grubundan 3 numunenin analizinden elde edilen üst üste bindirilmiş kromatogramlar (vurgulanmış

Pirinç. Şekil 4. Maddenin 21.5 dakikalık tutma süresine sahip kütle spektrumu: a - negatif modda atmosferik basınçta kimyasal iyonlaşma; b - pozitif modda atmosferik basınçta kimyasal iyonlaşma.

kırmızı ile) ve kontrol grubundan 3 numune (mavi ile vurgulanmıştır). Diğer durumlarda da benzer bir model gözlemlendi.

Bu veri dizilerini işlemek için, kontrol ve deney grupları arasındaki lipid profillerindeki farklılıkları tanımlamayı mümkün kılan ana bileşen yöntemi (PCA) ve küme analizi kullanıldı. Elde edilen 1. ve 2. ana bileşenlerin PCA grafiği

veri boyutu küçültüldüğünde, şekil 2'de gösterilmiştir. 2 (bkz. 2. kapak sayfası). Grafikte, noktaların sırasıyla 1., 4. ve 2., 3. kadranlarda yer alan 2 grupta birleştiğini görmek kolaydır. Bu durumda, deneysel örneklere karşılık gelen noktalar esas olarak 1. ve 4. kadranda yer almakta, kontrol örneklerine karşılık gelen noktalar ise 2. ve 3. kadranda yer almaktadır. ile elde edilen dendrogram

[sırtlan ve sanitasyon 3/2014

Kromatogramda bulunan piklerin tanımlanması

Tutma süresi, min "+" modunda ana pikler "-" modunda ana pikler

19,15 393,7 446,8

448,7 493,5 623,4 524,4

19,35 87 227 271 335,5 353,3 371,2 389.1 448.2 493.3 405,4

21,50 316,1 390,0

430.3 448.4 779,1

23,8 319.4 391,6 429.5 783,2

24,35 414,8 448,8

31,73 313,3 330,9

33,9 231.5 245.5 263,3 281,1 295.1 305.2 371.3 521.0 663.1 279,4

Madde

fosfatidilkolin

Arakinik asit

Fosfat asit 42:4

Arakik ve dokozat-traenoik asitler

Dokosapentaenoik

Linoleik asit

dihidroksikolesterol

kıç analizi, şek. 3. Böylece, kromatografik verilerin istatistiksel analizi, kontrol ve deney gruplarına ait deney hayvanlarının organizmalarında meydana gelen metabolik süreçlerdeki farklılıkları gösterir.

Spesifik metabolik değişiklikleri tanımlamak için, kütle spektrumları deşifre edildi ve tanımlandı

tek tek bileşikler alıntılanmıştır (tabloya bakınız). Analiz için yetersiz numune hacmi, serumdaki steroid hormonlarının profilindeki değişikliklerin saptanmasına izin vermedi. Bununla birlikte, kromatogramda ara polariteye sahip lipitler tespit edildi.

Çeşitli iyonizasyon modları altında kaydedilen maddelerin kütle spektrumları analiz edilerek ayrı ayrı bileşikler tanımlandı. Böylece, bir maddenin 21.5 dakikalık tutma süresi ile iki iyonizasyon modundaki kütle spektrumu Şekil 1'de gösterilmektedir. 4. Bu spektrumun analizi, maddenin 780 moleküler ağırlığa sahip diasil-sn-gliserofosfat olduğunu göstermiştir (R1(311) = 20:0 yağ asidi (arakidik), R2(331) = 22:4 yağ asidi (dokosatetraenoik) ).

Tutma süresi 42.52 dakika olan kromatografik zirvenin, muhtemelen safra asitlerinin biyosentezindeki öncülerden biri olan dihidroksikolesterol'e karşılık geldiği bulundu. Kan serumundaki oksisteroidlerin içeriğindeki farklılıklar, safra asitlerinin metabolizmasının olası bir ihlaline işaret eder. Şekil l'de gösterilen kromatogramlardan da görülebileceği gibi. Şekil 1'de gösterildiği gibi, deney hayvanlarının kan serumunda, kontrole kıyasla artan bir oksisteroid konsantrasyonu vardır (35-45 dakikalık bir alıkonma süresi ile zirve yapar).

çözüm. Çalışmada kullanılan teknik, çevresel kirleticilerin etkisi altında erken lipid metabolizması bozukluklarının yüksek bir verimlilikle tespit edilmesini mümkün kılmaktadır. Elde edilen sonuçlar, deney hayvanları Cavia porcellus'a sulu tuz dökümü çözeltilerinin burun içinden uygulanmasının, lipitlerin ve oksisteroidlerin metabolizmasında bir değişikliğe yol açtığını göstermektedir. Özellikle, hayvanlarda gözlemlenen yüksek safra asidi öncülleri (hidroksisteroidler) içeriği, bozulmuş karaciğer fonksiyonu ve safra asitlerinin biyosentezinde yer alan enzimler ile ilişkili olabilir. Böylece açıklanan yaklaşım, teknojenik kirliliğe sahip bölgelerde yaşayanlarda lipid metabolizması bozukluklarını tespit etmek için kullanılabilir.

Edebiyat

1. Boynuzlu E.Ç., Boynuzlu M.G. Metabolik profiller: metabolitlerin analizi için gaz fazı yöntemleri. klinik kimya 1971; 17(8): 802-9.

2. Constantinou M.A., Tsantili-Kakoulidou A., Andreadou I., Iliodro-mitis E.K., Kremastinos D.T., Mikros E. Tavşanlarda miyokardiyal iskemi-reperfüzyon, iskemik önkoşullama ve antioksidan müdahalenin araştırılmasında NMR tabanlı metabonomik uygulaması. Avro. J Ecz. bilim 2007; 30(3-4): 303-14.

3. Lu W., Bennett B.D., Rabinowitz J.D. LC-MS tabanlı hedeflenen metabolomikler için analitik stratejiler. J Kromatr. B. Analist Teknoloji Biyomed. hayat bilimi 2008; 871(2): 236-42.

4. Novotny M.V, Soini H.A., Mechref Y. Kromatografik, elektroforetik ve kütle spektro-metrik profillere yansıyan biyobireysel kimyasallık. J Kromatr. B. Analist Teknoloji Biyomed. hayat bilimi 2008; 866(1-2): 26-47.

5. Alman J.B., Gillies L.A., Smilowitz J.T., Zivkovic A.M., Watkins S.M. Lipidomikler ve metabolomikte lipit profillemesi. Curr. görüş. Lipidol. 2007; 18(1): 66-71.

6. Schwarz E., Liu A., Randall H., Haslip C., Keune F., Murray M. ve ark. Konjenital adrenal hiperplazi için yenidoğan taramasında ikinci aşama test olarak UPLC-MS/MS ile steroid profillemenin kullanımı: Utah deneyimi. Pediatr. Res. 2009; 66(2): 230-5.

7. Rauh M. LC-MS/MS ile steroid ölçümü. Başvuru

Sanata. Chakhovsky ve ark.

Pirinç. 3. Küme analizine dayalı olarak oluşturulan ve örneklerin gruplara göre kümelenmesini gösteren dendrogram.

Sanata. Chakhovsky ve ark.

Pirinç. 1. Kontrol grubundan (kırmızı ile vurgulanmış) 1-3 ve deney grubundan (mavi ile vurgulanmış) 15-17 numunelerinin örtüşen kromatogramları.

Durumların çarpan düzleminde izdüşümü (1 x 2) Kosinüs kare toplamı >= 0.00 olan durumlar

18/3 9/z 21/1 ■ O

1 ödünç "Sh yaklaşık 28/1" 22/10 41 /1 p

Faktör 1: %65,71

Pirinç. 2. Kromatogramların PCA kullanılarak işlenmesiyle elde edilen grafik. Kontrol grubu mavi, deney grubu kırmızı ile vurgulanmıştır.

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), hareketli fazın (MP), sabit bir faz (sorbent) ile doldurulmuş bir kromatografik kolonda hareket eden bir sıvı olduğu bir kolon kromatografi yöntemidir. HPLC kolonları, kolon girişindeki yüksek hidrolik basınç ile karakterize edilir, bu nedenle HPLC'ye bazen "Yüksek Basınçlı Sıvı Kromatografisi" adı verilir.

Maddelerin ayrılma mekanizmasına bağlı olarak, aşağıdaki HPLC varyantları ayırt edilir: adsorpsiyon, dağıtım, iyon değişimi, dışlama, kiral, vb.

Adsorpsiyon kromatografisinde, maddelerin ayrılması, gelişmiş bir yüzeye sahip bir adsorbanın yüzeyinden, örneğin silika jelden farklı adsorbe olma ve desorbe olma yeteneklerinden dolayı gerçekleşir.

Bölme HPLC'de ayırma, sabit (kural olarak, sabit bir desteğin yüzeyine kimyasal olarak aşılanmış) ve hareketli fazlar arasında ayrılacak maddelerin dağılım katsayılarındaki fark nedeniyle gerçekleşir.

Polariteye göre, PF ve NF HPLC, normal faz ve ters faz olarak ayrılır.

Normal faz kromatografisi, polar bir sorbent (örneğin, aşılanmış NH2 - veya CN grupları içeren silika jel veya silika jel) ve polar olmayan PF (örneğin, çeşitli katkı maddelerine sahip heksan) kullanan bir kromatografi çeşididir. Ters faz kromatografisinde, polar olmayan kimyasal olarak modifiye edilmiş sorbentler (örn. polar olmayan C18 alkil radikali) ve polar hareketli fazlar (örn. metanol, asetonitril) kullanılır.

İyon değiştirme kromatografisinde, çözelti içinde katyonlara ve anyonlara ayrışan karışım maddelerinin molekülleri, sorbentin iyonik gruplarıyla farklı değişim hızları nedeniyle sorbent (katyon değiştirici veya anyon değiştirici) boyunca hareket ederken ayrılır. .

Boyut dışlama (elek, jel nüfuz eden, jel filtrasyon) kromatografisinde, maddelerin molekülleri, durağan fazın gözeneklerine farklı nüfuz etme yetenekleri nedeniyle boyuta göre ayrılır. Bu durumda, durağan fazın minimum sayıdaki gözeneklerine nüfuz edebilen en büyük moleküller (en yüksek moleküler ağırlığa sahip olanlar) kolondan ilk ayrılanlardır ve küçük moleküler boyutlu maddeler en son ayrılanlardır.

genellikle ayırma bir değil, aynı anda birkaç mekanizma ile gerçekleşir.

HPLC yöntemi, gaz halinde olmayan herhangi bir analitin kalite kontrolü için kullanılabilir. Analiz için uygun aletler kullanılır - sıvı kromatograflar.

Bir sıvı kromatografın bileşimi genellikle aşağıdaki ana bileşenleri içerir:

– mobil fazlı bir tank (veya mobil fazın parçası olan ayrı çözücülere sahip tanklar) ve bir PF gaz giderme sistemi içeren bir PF hazırlama ünitesi;

– pompalama sistemi;

– mobil faz karıştırıcı (gerekirse);

– numune enjeksiyon sistemi (enjektör);

– kromatografik kolon (bir termostata takılabilir);

– dedektör;

– veri toplama ve işleme sistemi.

Pompalama sistemi

Pompalar, belirli bir değerde kolona PF beslemesi sağlar. sabit hız. Mobil fazın bileşimi analiz sırasında sabit olabilir veya değişebilir. İlk durumda, süreç izokratik ve ikinci - gradyan olarak adlandırılır. 0,45 µm gözenek çapına sahip filtreler bazen mobil fazı filtrelemek için pompalama sisteminden önce kurulur. Modern bir sıvı kromatografi pompalama sistemi, bir veya daha fazla bilgisayar kontrollü pompadan oluşur. Bu, gradyan elüsyon sırasında belirli bir programa göre PF'nin bileşimini değiştirmenize izin verir. Karıştırıcıda PF bileşenlerinin karıştırılması hem düşük basınçta (pompalardan önce) hem de yüksek basınçta (pompalardan sonra) gerçekleşebilir. Karıştırıcı, PF'nin hazırlanması ve izokratik elüsyon için kullanılabilir, ancak izokratik işlem için PF bileşenlerinin önceden karıştırılmasıyla daha doğru bir bileşen oranı elde edilir. Analitik HPLC pompaları, 50 MPa'ya kadar bir kolon giriş basıncında 0,1 ila 10 ml/dk aralığında kolona sabit bir PF akış hızını korumayı mümkün kılar. Ancak bu değerin 20 MPa'yı geçmemesi tavsiye edilir. Pompaların tasarımında yer alan özel damper sistemleri ile basınç dalgalanmaları en aza indirilmiştir. Pompaların çalışma parçaları, PF bileşiminde agresif bileşenlerin kullanılmasına izin veren korozyona dayanıklı malzemelerden yapılmıştır.

1,3,4-tiadiazol LHT7-09'un yeni amino asit türevini belirlemek ve ölçmek için doğrulanmış bir HPLC-MS/MS yöntemi geliştirilmiştir. LHT7-09 kütle spektrometrik tespitinin maksimum hassasiyeti, 5500 V'luk bir elektrosprey voltajında ​​ve 36 V'lik bir kümelenme potansiyelinde pozitif iyon tespit modunda elde edildi. Tanımlanan MRM geçişleri, 1'in yeni amino asit türevinin kimyasal yapısını doğruladı, 3,4-tiadiazol. LHT7-09'u tiyadiazolilamidlerin çok bileşenli karışımlarından etkili bir şekilde izole etmek için, bir eluent olarak çeşitli oranlarda asetonitril ve deiyonize su karışımı kullanılarak yüksek performanslı sıvı kromatografisinin bir gradyan modu geliştirilmiştir. Bu kromatografik koşullar için LHT7-09 bileşiğinin alıkonma süresi 11 dakika olarak belirlendi. LHT7-09 bileşiğinin kantitatif tayini için, kromatografik tepe alanının çözeltinin konsantrasyonuna bağımlılığı için bir kalibrasyon çözeltisi geliştirilmiştir.

whr-ms/ms

kromatografi

kütle spektrometrisi

tiadiazol

1. Kazaishvili Yu.G., Popov N.S. Sıçanlarda formalin pençe ödeminde yeni tiyadiazol türevlerinin anti-inflamatuar etkinliğinin araştırılması / Yu.G. Kazaishvili, N.S. popov // Günümüze ait sorunlar bilim ve eğitim. - 2013. - No.3. www..

2. Antifungal aktiviteye sahip yeni tiyadiazol türevleri / A.S. Koshevenko [ve diğerleri] // Tıbbi Mikolojideki Gelişmeler. - 2015. - T. 14. - S. 348-351.

3. Yeni furil-2-ikameli 1,3,4-tiadiazoller, 1,2,4-triazollerin sentezi ve antitümör aktivitesi / T.R. Ovsepyan [ve diğerleri] // Kimyasal İlaç Dergisi. - 2011. - T. 45. - No. 12. - S. 3-7.

4. Popov N.S., Demidova M.A. Tiyadiazolün yeni bir amino asit türevinin farelere intraperitoneal olarak uygulandığında akut toksisitesinin değerlendirilmesi / N.S. Popov, M.A. Demidov // Yukarı Volga Medikal dergi. - 2016. - V.15, hayır. 1. - S.9-12.

5. Popov N.S., Demidova M.A. Sıçanlara intragastrik olarak uygulandığında tiyadiazolün yeni bir amino asit türevinin ülserojenitesinin değerlendirilmesi / N.S. Popov, M.A. Demidova // Doktor-mezun öğrencisi. - 2017. - 1 numara (80). - S.71-78.

6. 2-amino-5-alkil(arilalkil)-1,3,4-tiadiazoller / S.A. Serkov [ve diğerleri] // Chemical Pharmaceutical Journal. - 2014. - T.48, No.1. - S.24-25.

7. Arpit K., Basavaraj M., Sarala P., Sujeet K., Satyaprakash K. İmidazotyadiazol türevlerinin sentezi ve farmakolojik aktivitesi // Açta Poloniae Pharmaceutica, Drug Research. 2016. Cilt 73. Hayır. 4. S. 937-947.

8. Eman M. Flefel, Wael A. El-Sayed, Ashraf M. Mohamed Yeni 1-Tiya-4-azaspirodekan, Bunların Türetilmiş Tiazolopirimidin ve 1,3,4-Tiyadiazol Tiyoglikozitlerinin Sentezi ve Antikanser Aktivitesi // Moleküller. 2017. Hayır. 22(1). S.170.

9. Jorge R.A. Diaz, Gerardo Enrique Cami. Bir asetazolamidin yapısal ve analoğu olan 5-amino-2-sülfonamid-1,3,4-tiadiazol tuzları, ilginç karbonik anhidraz inhibe edici özellikler, diüretik ve antikonvülsan etki gösterir // Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2016. Cilt 12. Hayır. 6. S. 1102-1110.

10. Naiyuan Chen, Wengui D., Guishan L., Luzhi L. Dehidroabietik asit bazlı 1,3,4-tiadiazol-tiyazolidinon bileşiklerinin sentezi ve antifungal aktivitesi // Moleküler Çeşitlilik. 2016. Cilt 20. Hayır. 4. S. 897-905.

11. Yomna, I. El-Gazzar, Hanan H. Georgey, Shahenda M. El-Messery. DHFR inhibitörleri olarak kinazolin-4(3H)-on'un yeni (1,2,4-triazol veya 1,3,4-tiadiazol)-metiltiyo-türevlerinin sentez, biyolojik değerlendirme ve moleküler modelleme çalışması // Bioorganic Chemistry. 2017 Cilt 72. S. 282-292.

Kütle spektrometrik algılamalı yüksek performanslı sıvı kromatografisi, tıbbi maddelerçeşitli biyolojik nesnelerde. Yöntem, klinik laboratuvar teşhisleri için önemli olan farmakokinetik çalışmalarda ve ilaç izlemede ilaçların kantitatif tayini için kullanılmasına izin veren yüksek özgüllük, doğruluk ve maddeleri minimum konsantrasyonlarda belirleme yeteneği ile karakterize edilir. Bu amaçla, yenilikçi olanlar da dahil olmak üzere çeşitli tıbbi maddelerin kantitatif tayini için HPLC-MS/MS yöntemine dayalı yöntemlerin geliştirilmesi ve doğrulanması gerekmektedir.

Steroid olmayan antienflamatuar ilaçlar grubundan orijinal ilaç, 1,3,4-tiadiazol amid ve aseksamik asidin yeni bir türevi olan aseksazolamiddir. Bu bileşiğin önemli bir avantajı, düşük toksisitesi ve düşük ülserojenitesidir. Farmakokinetik çalışmalar yapmak ve belirli bir tıbbi maddenin çeşitli uygulama yollarıyla biyoyararlanımını değerlendirmek için biyolojik sıvılarda kantitatif tayini için güvenilir bir yöntem geliştirmek gereklidir.

Bu çalışmanın amacı HPLC-MS/MS kullanılarak tiyadiazol türevleri grubundan yeni bir non-steroidal anti-inflamatuar ilacın tanımlanması ve miktarının belirlenmesi için bir metodolojinin geliştirilmesiydi.

Malzemeler ve yöntemler

Çalışmanın amacı, JSC "VNTs BAV" (Staraya Kupavna) prof'ta sentezlenen, laboratuvar kodu LHT 7-09 olan yeni bir tiyadiazol türeviydi. S.Ya. Skachilova (Şek. 1).

2-asetilaminoheksanoik asidin 2-(5-Etil-1,3,4-tiadiazolil)amidi

Pirinç. 1. LHT 7-09'un kimyasal yapısı (brüt formül: C 12 H 20N 4 Yaklaşık 2S; molar kütle 284.4g/mol)

Bağlantı LHT 7-09, görünüşte suda pratik olarak çözünmeyen, alkolde çözünen, asetonitrilde kolayca çözünen beyaz bir tozdur.

LCT 7-09'u tanımlamak ve miktarını belirlemek için kütle spektrometrik saptama (HPLC-MS/MS) yöntemiyle doğrulanmış bir yüksek performanslı sıvı kromatografisi kullanıldı.

Kromatografi, bir Agilent 1260 Infinity II yüksek performanslı sıvı kromatografı (Agilent Technologies, Almanya) kullanılarak gerçekleştirildi. Çalışmada bir Agilent Poroshell 120 EC-C18 2,7 µm 2,1×10 mm analitik kolon kullanıldı. İncelenen bileşiği izole etmek için bir gradyan kromatografi modu geliştirdik. Eluent olarak çeşitli oranlarda asetonitril, deiyonize su ve amonyum asetat kullanıldı.

Kütle spektrometrisi için, elektrosprey iyon kaynağına (TurboV ve TurboIonSpray problu) sahip bir ABSciexQTrap 3200 MD üçlü dört kutuplu kütle spektrometresi (ABSciex, Singapur) kullanıldı. Kütle spektrometresi, 6.1 x 10-2 mg/l'lik bir konsantrasyonda bir reserpin test çözeltisi kullanılarak kalibre edildi.

İncelenen numunelerin kütle spektrometrik analizi, kromatograf tarafından sağlanan numune ve elüatın doğrudan enjeksiyonu ile elektrosprey modunda gerçekleştirildi. Test örneklerinin kütle kromatografına doğrudan enjeksiyonu, 4.61 mm çapında bir şırınga pompası kullanılarak 10 µl/dak hızında gerçekleştirildi.

Yeni bir tiyadiazol türevinin tanımlanması ve kantitatif tayini için bir teknik geliştirirken, yüksek performanslı sıvı kromatografisi ve kütle tespiti için en uygun koşullar seçildi. Maddenin kromatografik kolondan çıkış zamanı ve MRM geçişi dikkate alındı ​​(kayıt yapıldı) M/ z ilk analitik dört kutuplu Q1'de öncü iyon ve M/ z ikinci analitik dört kutuplu Q3 üzerindeki ürün iyonları). LHT 7-09'un kantitatif tayini için, 0,397 ila 397 ng/ml konsantrasyon aralığında bir kalibrasyon grafiği oluşturulmuştur.

Yazılım olarak AnalystMD 1.6.2.Software (ABSciex) kullanılmıştır.

Sonuçlar ve tartışma

Deneysel çalışmanın ilk aşamasında, test örneğinin kütle tespiti, bir şırınga pompası kullanılarak kütle dedektörüne doğrudan enjeksiyon yoluyla gerçekleştirilmiştir. Numune hazırlama aşamasında asetonitril ve iyonize su karışımında 2:1 oranında amonyum asetat (%0,1) ilavesi ile LHT 7-09 (500 ng/ml) çözeltisi elde edildi.

Ön deneyler, pozitif iyon algılama modunda LCT 7-09 algılama hassasiyetinin daha yüksek olduğunu ve kütle spektrumunun negatif iyon algılama modunda olduğundan daha yoğun ve bilgilendirici olduğunu gösterdi. Bu bağlamda, daha sonraki çalışmalarda sadece pozitif iyonizasyon modu kullanılmıştır.

Yoğun bir tepe noktası elde etmek için, aşağıdaki kütle algılama koşulları seçildi: : pozitif polarizasyon, 5500,0 V elektrosprey voltajı, 20,0 psi perde gaz basıncında ve 40,0 psi sprey gazında, 10 µl/dak hızında sırasıyla 36,0 ve 6,5 V kümelenmeyi çözme potansiyeli ve giriş potansiyeli. Tarama aralığı 270-300 Da idi.

İlk analitik dört kutuplu Q1'de elde edilen kütle spektrumunun analizi, bu koşullar altında, bir hidrojen protonunun eklenmesi nedeniyle, üzerinde çalışılan bileşik +'nın protonlanmış bir molekülünün şu değerle oluştuğunu gösterdi: M/ z 285.2 Evet (Şek. 2).

Pirinç. 2. Protonlanmış LHT 7-09 molekülünün kütle spektrumu (pozitif iyon tarama modunda +)

İkinci analitik dört kutuplu Q3'te, öncü iyon için ürün iyonları şu değerle kaydedildi: m/z 285.2 Evet. 2. dereceden kütle spektrumunun analizi, 3'ü en yoğun olan birçok tepe noktasının varlığını gösterdi - m/z 114.2 Da, m/z 130.2 Da ve m/z 75.1 Da (Şek. 3).

Pirinç. 3. Ürün iyonlarının kütle spektrumu (pozitif iyon tarama modunda, öncü iyonM/ z285.2 Evet)

Yüksek yoğunluklu bir iyon sinyali elde etmek için Q2 çarpışma hücresindeki optimum enerji değerleri seçildi (0 ila 400 V arasındaki enerji aralığı dikkate alındı). Değerleri olan ürün iyonları için M/ z 114,2 Da, 130,2 Da ve 75,1 Da, darbe hücresindeki optimum enerji sırasıyla 27 V idi; 23 V ve 49 V.

değere sahip ürün iyonunun olduğu varsayılır. M/ z 114.2 Da, 5-amino-2-etil-1,3,4-tiadiazolün bir parçasıdır, çünkü diğer 1,3,4-tiadiazol türevlerinin parçalanması da aynı değere sahip bir ürün iyonu ortaya çıkarır M/ z. değerli iyon ürünü M/ z 130.2 Da muhtemelen aseksamik asidin protonlanmış bir parçasıdır. Böylece, çalışılan numunenin kütle tespiti sonuçları, yeni 1,3,4-tiadiazol türevinin kimyasal yapısını doğruladı.

Deneysel çalışmanın bir sonraki aşamasında, analiz edilen bileşik HPLC-kütle spektrometresi ile analiz edildi.

HPLC-MS/MS modunda, aşağıdaki iyonizasyon koşulları kullanıldı: elektrosprey voltajı 5500,0 V, mobil faz akış hızı 400 ul/dk, nitrojen sıcaklığı 400°C, perde gazı ve sprey akış basınçları sırasıyla 20,0 ve 50,0 psi. Tek kütle spektrumlarının kayıt hızı saniyede 100 spektrumdu. Kromatogram üzerinde özetlenmiş bir kütle spektrumu elde etmek için 10.5-11.5 dakikalık bir zaman aralığı ayrıldı; üretim iyonlarının sinyalinin yoğunluğuna göre, iyon akımının zamana bağlılığının eğrileri ve test bileşiğine karşılık gelen bireysel sinyallerin tepe noktalarının alanı çizildi. Analitik kolona enjekte edilen numunenin hacmi 10 ul idi.

İncelenen bileşiği izole etmek için, analitik kolonun girişindeki elüentin bileşimi değiştirilerek sağlanan yüksek performanslı sıvı kromatografisinin bir gradyan modu kullanıldı. Eluent olarak çeşitli oranlarda asetonitril, deiyonize su ve amonyum asetat kullanıldı. Gradyan kromatografi modunun seçimi, izokratik elüsyon modu koşulları altında (farklı asetonitril konsantrasyonlarının kullanılması dahil), simetrik bir şekle sahip test maddesinin bir tepe noktasının elde edilmesinin mümkün olmaması gerçeğinden kaynaklanmaktadır. analiz için uygun bir tutma süresi. Çalışmaya göre, aşağıdaki eluent besleme modu optimaldi: 0 ila 4 dakika arasında, asetonitril konsantrasyonu %1 idi; 4 ila 8 dakika asetonitril konsantrasyonunda %99'a kadar doğrusal artış; 8 ila 12 dakika - izokratik bölüm (%1 asetonitril). Çalışma tamamlandıktan sonra kromatografik kolon %30 asetonitril solüsyonu ile 5 dakika yıkandı.

İncelenen bileşik için açıklanan kromatografi modunu kullanırken, yeterli yoğunlukta simetrik bir tepe noktası elde edildi (Şekil 4).

Pirinç. 4. Kromatogram LHT 7-09 (analitik sütunçevikPoroshell 120 EC-C18 2,7µm 2,1x10mm; gradyan modlu kromatografi)

Çeşitli konsantrasyonlardaki LHT 7-09 çözeltileri için elde edilen kromatogramların analizi, bu elüsyon koşulları altında alıkonma süresinin (tR) 11 dakika olduğunu ve test maddesinin konsantrasyonuna bağlı olmadığını gösterdi. Bu bağlamda, tutma süresinin değeri, çok bileşenli karışımlarda LHT 7-09'un gerçekliğini doğrulamak için ek bir kriter olarak kullanılabilir. Bu kromatografi parametrelerinin, LHT 7-09'u yalnızca bir kütle detektörü ile değil, aynı zamanda bir fotometrik de dahil olmak üzere diğer detektörlerle de tanımlamak için kullanılabileceği dikkate değerdir.

Yeni tiyadiazol türevinin kantitatif tayini için, 0,397 ng/mL ila 397 ng/mL konsantrasyon aralığında bir kalibrasyon eğrisi oluşturulmuştur (Şekil 5).

Pirinç. Şekil 5. LHT 7-09 konsantrasyonunu belirlemek için kalibrasyon grafiği (apsis ekseni boyunca - ng / ml cinsinden LHT 7-09 konsantrasyonu, ordinat ekseni boyunca - darbelerdeki tepe alanı)

Bir kalibrasyon solüsyonu geliştirmek için, 0.397 konsantrasyonlarda LHT 7-09 solüsyonları kullanıldı; 1.980; 3.970; 19.8; 39.7; 198.0; 397.0 ng/ml. Pik alanının incelenen bileşiğin konsantrasyonuna bağımlılığı, aşağıdaki regresyon denklemi ile açıklanmıştır:

y= 8.9e 5 x 0.499 , regresyon katsayısının değeri r=0.9936 idi.

Geliştirilen kalibrasyon solüsyonunun, çalışılan bileşiğin kantitatif tayinini geniş bir konsantrasyon aralığında yüksek doğrulukla gerçekleştirmeyi mümkün kıldığına dikkat edilmelidir, bu da bu yöntemin ilaç maddesinin kalitesini değerlendirmek için kullanılmasını mümkün kılar ve Farmakokinetik çalışmalar yapmak.

Bu nedenle çalışmanın sonucu, HPLC-MS/MS kullanılarak tiyadiazolün yeni bir amino asit türevinin tanımlanması ve miktarının belirlenmesi için bir yöntemin geliştirilmesiydi.

sonuçlar

1. HPLC-MS/MS, tiyadiazolün yeni bir amino asit türevinin yüksek doğrulukla tanımlanmasına ve miktarının belirlenmesine olanak tanır.
2. Yeni bir tiyadiazol türevi LHT 7-09'un toplu tespiti, pozitif iyon tarama modunda gerçekleştirilmelidir (MRM geçişi - öncü iyon Q1 M/ z 285.2 Evet; ürün iyonları Q3 M/ z 114.2 Da, M/ z 130.2 Da ve M/ z 75.1 Da).
3. LCT 7-09'u çok bileşenli karışımlardan izole etmek için yüksek performanslı bir sıvı kromatografi tekniği geliştirildi (analitik kolon Agilent Poroshell 120 EC-C18 2,7 μm 2,1 x 10 mm; eluent asetonitril: deiyonize su: amonyum asetat; gradyan modu).

bibliyografik bağlantı

Clinical Biochemist Reviews'ta yayınlanan bir incelemeye göre, klinik laboratuvarlarda tandem kütle spektrometresi (HPLC-MS/MS) ile birlikte yüksek performanslı sıvı kromatografisinin kullanımı son 10-12 yılda muazzam bir artış gösterdi. Yazarlar, HPLC-MS/MS analizinin özgüllüğünün, düşük moleküler ağırlıklı moleküllerin analizinde immünolojik yöntemlerden ve klasik yüksek performanslı sıvı kromatografisinden (HPLC) önemli ölçüde üstün olduğunu ve gaz kromatografisi-kütle spektrometrisinden önemli ölçüde daha yüksek bir verime sahip olduğunu belirtiyorlar. GC-MS). Bu yöntemin rutin klinik analizlerdeki popülaritesi, şu anda yöntemin benzersiz yetenekleriyle açıklanmaktadır.

HPLC-MS/MS yönteminin ana avantajları şunlardır:
• Küçük molekülleri doğru bir şekilde ölçme yeteneği;
• Çoklu hedef bileşiklerin eş zamanlı analizi;
• Eşsiz özgüllük;
• Yüksek analiz hızı.

İÇİNDE son yıllar analiz zamanına ve bunun sonucunda laboratuvarın verimliliğinin arttırılmasına çok dikkat edilir. HPLC/MS/MS için kısa analitik sütunların kullanılmasıyla analiz süresinde önemli bir azalma mümkün olurken, analizin özgüllüğü önemli ölçüde artırıldı. Atmosferik basınç iyonizasyonu (API), tandem üçlü dört kutuplu kütle spektrometresi ve gelişmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisinin yanı sıra ilgili numune hazırlama yöntemlerinin kullanımı, LC/MS/MS'yi klinik araştırma için modern analitik yöntemlerin ön saflarına taşımıştır.

Klinik tıpta HPLC/MS/MS'nin ana uygulama alanları:
• Steroidlerin (steroid panelleri), pürinlerin ve pirimidinlerin ve diğer bileşiklerin metabolizmasının tam bir profilinin elde edilmesi,
  yenidoğanların konjenital metabolik hatalar açısından taranması (bir analizde birkaç düzine hastalığın tespiti);
• terapötik izleme ilaçlar- İmmünosupresanlar, antikonvülsanlar, antiretroviraller, antikoagülanlar ve diğerleri - üreticinin kitlerinin mevcudiyetine bakılmaksızın. Her madde için pahalı kitler satın almanıza gerek yok - kendi yöntemlerinizi geliştirebilirsiniz;
• Klinik toksikoloji - 500'den fazla narkotik bileşik ve bunların metabolitlerinin doğrulayıcı analiz olmaksızın tek bir analizde analizi
  proteomik ve metabolomik.

Ek olarak, HPLC-MSMS üriner oligosakkarit, sülfatit, uzun zincir taramak için kullanılır. yağ asitleri, uzun zincir safra asitleri, metilmalonik asit, porfiri araştırması, pürin ve pirimidin metabolizması bozukluğu olan hastaların taranması.

Sıvı kromatografinin uygulama örnekleri
klinik deneylerde tandem kütle spektrometresi ile kombinasyon halinde.

Yenidoğan taraması: HPLC-MS/MS'nin kitlesel uygulamasının ilk örneği klinik teşhis yenidoğanlarda konjenital metabolik hataların taranmasıydı. Şu anda Gelişmiş ülkeler bu rutin bir yöntemdir ve asidemi, aminoasidopati, yağ asidi oksidasyonundaki kusurlar dahil olmak üzere 30'dan fazla farklı hastalığı kapsar. Hemen ele alınmazsa ciddi sorunlara yol açabilecek doğum kusurlarıyla ilgili araştırmalar özellikle dikkate değerdir (örneğin, genişlemiş bir kalp veya karaciğer veya beyin ödemi). Yenidoğan taraması için HPLC-MS/MS kullanmanın avantajı, tüm amino asitleri ve asilkarnitinleri hızlı, ucuz ve oldukça spesifik bir yöntemle aynı anda analiz edebilme yeteneğidir.

Terapötik ilaç takibi: Nakilden sonra organ reddini önlemek için immünosupresan sirolimusun (rapamisin) geliştirilmesi ve piyasaya sürülmesi, HPLC-MS/MS'nin klinik laboratuvarlara girmesinin ana itici güçlerinden biri olmuştur. Modern Yöntem HPLC-MS/MS, takrolimus, sirolimus, siklosporin, everolimus ve mikofenoik asidin eş zamanlı olarak belirlenmesine izin verir.

HPLC-MS/MS ayrıca sitotoksik, antiretroviral ilaçlar, trisiklik antidepresanlar, antikonvülsanlar ve bireysel doz gerektiren diğer ilaçların analizi için de kullanılır.

HPLC-MSMS yöntemi, varfarinin R- ve S-enantiyomerlerinin 0.1-500 ng/ml konsantrasyon aralığında ayrılmasını ve ölçülmesini mümkün kılar.

İlaçlar ve ağrı kesiciler: HPLC-MS/MS, numune hazırlama kolaylığı ve kısa analiz süresi nedeniyle bu bileşiklerin analizi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Yöntem şu anda klinik laboratuvarlarda çok çeşitli ilaçların varlığını taramak için kullanılmaktadır. Yöntemin benzersiz özgüllüğü ve hassasiyeti, minimum numune hazırlığı ile tek bir numunede çeşitli sınıflardan 500'den fazla bileşiği aynı anda analiz etmeyi mümkün kılar. Bu nedenle, idrar analizi durumunda, numunenin 50-100 kat basit bir şekilde seyreltilmesi yeterlidir. Saç analizi yapılırken 100-200 saç demeti yerine tek bir saç teli ilaç kullanımının gerçeklerini güvenilir bir şekilde tespit etmek için yeterlidir.

Endokrinoloji ve Steroid Analizi: HPLC-MS/MS, testosteron, kortizol, aldesteron, progesteron, estriol ve diğerleri gibi steroidlerin analizi için birçok endokrinolojik laboratuvarda yaygın olarak kullanılmaktadır.

Giderek daha fazla sayıda laboratuvar, D3 ve D2 vitaminlerinin kan düzeylerini belirlemek için HPLC-MS/MS kullanmaya başlıyor.

I. Steroidlerin tanımı (steroid profili).

Hastanelerdeki ve kliniklerdeki laboratuvarlar artık HPLC/MS/MS kullanarak birkaç steroidin eş zamanlı tayinini gerçekleştirme kabiliyetine sahiptir. Özellikle çocukların örneklerini analiz ederken önemli olan büyük bir örnek hacmine gerek yoktur.

Birkaç (profil oluşturma) steroid tayininin yapılmasının tavsiye edildiği durumlar:
• Konjenital adrenal hiperplazi (CAH), steroid biyosentezinde konjenital bir defekttir. Bu, kortizol üretiminde azalmaya yol açan adrenal korteks enzimlerinin uygunsuz aktivitesinden kaynaklanan kalıtsal bir hastalık grubudur. SAN'ın güvenilir teşhisi için kortizol, androstenedion ve 17-hidroksiprogesteronun belirlenmesi önerilir. HPLC/MS/MS, tek bir analizde %100 güvenle üç steroidin tamamının doğru miktarının belirlenmesini sağlar.
• İmmünoanalizler kullanılarak yapılan rutin neonatal tarama, yüksek oranda meme pozitif ve yanlış negatif sonuçlarla karakterize edilir. Sadece kortizolün değil, aynı zamanda aldosteron ve 11-deoksikortizolün de HPLC/MS/MS tayini, birincil ve ikincil adrenal yetmezliği ayırt etmeyi mümkün kılar.
• HPLC/MS/MS, prostatit ve kronik pelvik ağrı sendromunda steroidlerin belirlenmesine izin verir.
• HPLC-MS/MS, steroid profilini belirlemenizi ve küçük çocuklarda adrenal erken ergenliğin nedenlerini belirlemenizi sağlar. Bu çocuklarda testosteron, androstenedion, dehidroepiandrosteron (DHEA) ve sülfat konsantrasyonlarının daha büyük kontrol çocuklarına göre biraz daha yüksek olduğu bulundu.
• Aktif sigara içenler, pasif içiciler ve sigara içmeyenlerden alınan serum, dumana maruz kalan hastalar ile hormon konsantrasyonları arasındaki ilişkiyi araştırmak için 15 steroid hormon ve tiroid hormonunun varlığı açısından analiz edilir.
• HPLC/MS/MS idrarda bazı kadın steroid hormonlarının profilinin çıkarılmasında kullanılır.
• HPLC/MS/MS kullanılarak, diyabetik nöropatiyi önlemek için nöroaktif hormonların konsantrasyonları değerlendirildi.

II. Tiroid hormonlarının belirlenmesi

Tiroid hormonlarını belirlemeye yönelik rutin yöntemler genellikle, pahalı olan ve yalnızca T3 ve T4'ü saptayan ve tiroid fonksiyonunu belirleme ve tam olarak düzenleme yeteneğini sınırlayabilen radyoimmunoassay'e dayanır.

• Şu anda HPLC-MSMS kullanılarak, tiroksin (T4), 3,3',5-triiyodotironin (T3), 3,3',5'- (rT3), 3 dahil olmak üzere kan serum numunelerinde beş tiroid hormonunun eş zamanlı analizi yapılmaktadır. 1-500 ng/ml konsantrasyon aralığında 3'-diiyodotironin (3,3'-T2) ve 3,5-diiyodotironin (3,5-T2).
• HPLC/MS/MS yöntemi, tiroidektomi geçirmiş hastalarda hormonların bileşimini analiz etmek için de kullanılır. Ameliyat sonrası tiroksin (T4), triiyodotironin (T3), serbest T4 ve tiroid uyarıcı hormon (TSH) seviyeleri belirlenir. HPLC/MS/MS'nin, TSH ve tiroid hormonu konsantrasyonları arasındaki ilişkiyi kurmanın mükemmel bir yolu olduğu bulunmuştur.
• Tükürük ve insan kan serumundaki tiroksini (T4) belirlemek için HPLC/MS/MS yöntemi uygulandı. Yöntem, yüksek tekrarlanabilirlik, doğruluk ve 25 pg/ml'lik bir tespit limiti ile karakterize edilir. Çalışmalar, ötiroid denekler ile Graves hastalığı olan hastalar arasında tükürük T4 konsantrasyonlarında tanısal bir ilişki olduğunu göstermiştir.

HPLC/MS/MS yöntemi artık biyolojik sıvılardaki tüm steroidleri güvenilir bir şekilde saptamak için gereken hassasiyete, özgüllüğe ve doğruluğa sahiptir ve bu nedenle, özellikle steroid dizileri söz konusu olduğunda teşhis yeteneklerini artırır.

III. 25-hidroksivitamin D'nin HPLC/MS/MS ile belirlenmesi

25-hidroksi D vitamini (25OD), D vitamininin ana dolaşım formudur ve aktif formunun öncüsüdür. (1,25-dioksivitamin D). Uzun yarılanma ömrü nedeniyle 25OD tayini, hastanın vücudundaki D vitamini durumunun belirlenmesi açısından önemlidir. D vitamini iki şekilde bulunur: D3 vitamini (kolekalsiferol) ve D2 vitamini (ergokalsiferol). Her iki form da ilgili 25OD formlarına metabolize edilir. Çok büyük önem teşhis için, vitaminin her iki formunu yüksek doğrulukla belirleyebilen ve D vitamini bozukluğu olan hastaların izlenmesine olanak tanıyan analitik yöntemlere sahiptir.Şimdiye kadar kullanılan yöntemler, D2 ve D3 vitaminlerinin ayrı ayrı belirlenmesine izin vermiyordu. Ek olarak, yüksek D2 vitamini konsantrasyonlarında, saptanabilir D3 miktarı hafife alınır. Diğer bir dezavantaj, radyoaktif izotopların kullanılmasıdır. HPLC/MS/MS yönteminin kullanılması, yalnızca radyoaktif izotopların kullanımından kaçınmayı değil, aynı zamanda her ikisinin de ayrı ayrı belirlenmesini mümkün kılmıştır. aktif formlar A vitamini

Yöntem aşağıdaki hastalar için geçerlidir:
1. Vücutta D vitamini içeriğinin düşük olduğundan şüpheleniyorsanız;
2. Açıklanamayan bir toksik etkiden şüpheleniliyorsa;
3. Düşük D vitamini içeriği için tedavi gören hastaları incelerken;
4. HPLC/MS/MS kullanımı, hasta izleme sırasında her iki formun da ayrı ayrı belirlenmesine olanak sağlamıştır.

IV. İmmünosupresanların HPLC/MS/MS ile belirlenmesi

Bir organ naklinden sonra, reddedilmeyi önlemek için ömür boyu bağışıklık bastırıcılar alınmalıdır. Çok dar bir terapötik pencere ve yüksek toksisiteye sahip olan bağışıklık bastırıcılar, maksimum etkiyi elde etmek için bireysel dozajlar gerektirir. Bu nedenle, ilacın kandaki konsantrasyonuna bağlı olarak her bir hasta için ilaç dozunu ayarlamak üzere ana immünosupresanları izlemek hayati önem taşır: siklosporin A, takrolimus, sirolimus ve everolimus.

Bu ilaçları izlemek için hala immünolojik testler kullanılmaktadır, ancak bu yöntemler pahalıdır ve özgüllükleri, doğrulukları ve tekrarlanabilirlikleri sınırlıdır. İmmünolojik yöntemlerle elde edilen sonuçlara göre hastalar, immünosupresanların yanlış dozlanmasından öldü. Şu anda, klinik laboratuvarlarda immünolojik testler HPLC/MS/MS ile değiştirilmektedir. Örneğin, Münih Üniversitesi kliniğinde, bir HPLC/MS/MS sistemi kullanılarak sirolimus ve siklosporin A içeriği için günde yaklaşık 70 numune analiz edilir. Tüm numune hazırlama ve cihaz kontrolü tek kişi tarafından yapılır. Laboratuvar da bu yöntemle takrolimus analizine geçiş yapıyor.

• Kanda takrolimus, sirolimus, askomisin, demetoksisirolimus, siklosporin A ve siklosporin G'nin rutin eş zamanlı tayini için HPLC/MS/MS kullanımı açıklanmaktadır. Konsantrasyon tarafından belirlenen aralık 1,0 - 80,0 ng/ml'dir. Siklosporin için 25 - 2000 ng/ml. Laboratuvarda yıl boyunca 50.000'in üzerinde numune analiz edilmiştir.
• Takrolimus ve sirolimusun eş zamanlı kullanımının pozitif bir terapötik etki sağladığı bulunduğundan, bunların klinik analizler için kanda ayrı ayrı belirlenmesi için basit ve etkili bir HPLC/MS/MS yöntemi geliştirilmiştir. Bir örneğin analizi, tüm analitik eğri için takrolimus için %2,46 - %7,04 ve sirolimus için %5,22 - %8,30 doğrulukla 2,5 dakika sürer. Takrolimus alt saptama sınırı 0,52 ng/ml, sirolimus 0,47 ng/ml'dir.

V. HPLC/MS/MS ile homosistein tayini

Homosistein ilgilendiriyor kardiyovasküler hastalıklar(tromboembolizm, kalp hastalığı, ateroskleroz) ve diğer klinik durumlar (depresyon, Alzheimer hastalığı, osteoporoz, gebelik komplikasyonları, vb.). İmmünoanaliz de dahil olmak üzere homosistein analizi için mevcut yöntemler pahalıdır. Çok sayıda numunenin analizinde rutin klinik kullanım için homosistein analizine yönelik hızlı bir HPLC/MS/MS yöntemi geliştirilmiştir. İyonizasyon elektrosprey yöntemi ile gerçekleştirilmiştir. Yöntem tekrarlanabilir, oldukça spesifik ve doğrudur. Yöntemin avantajları ayrıca reaktiflerin düşük maliyeti ve numune hazırlamanın basitliğidir. Günde 500 veya daha fazla numuneyi analiz etmek mümkündür.

Çözüm

Teknik temel sınırlamalar nedeniyle şu anda önemli ölçüde geliştirilmiş immünoanaliz yöntemleri kullanılsa da, bu yöntemin, özellikle metabolitlerin varlığında, HPLC-MSMS ile karşılaştırıldığında asla hedef maddeyle karşılaştırılabilir doğruluğa ve özgüllüğe sahip olmayacağı belirtilmelidir. Bu, ELISA yönteminin düşük doğruluğuna ve yüksek oranda yanlış pozitif ve yanlış negatif sonuçlara yol açtığı gibi, ELISA yöntemi kullanılarak farklı klinik bölümlerde elde edilen sonuçların karşılaştırılmasına da izin vermez. HPLC-MS/MS'nin kullanımı, metabolitlerin varlığında ve plazma ve kanda eşlik eden ve endojen maddelerden etkilenme olmadığında yüksek güvenilirlikle çok sayıda numunenin son derece spesifik, doğru ve hızlı analizine izin vererek bu dezavantajı ortadan kaldırır. hastalar.

Enstrüman kompleksinin görünürdeki yüksek maliyetine rağmen, dünya pratiğinin gösterdiği gibi, doğru çalışma ile bu kompleks 1-2 yıl içinde kendini amorti eder. Bunun başlıca nedeni, onlarca ve yüzlerce bileşiğin eşzamanlı analizi ve pahalı teşhis kitleri satın alma ihtiyacının olmaması nedeniyle bir analizin düşük maliyetidir. Ek olarak laboratuvar, kitlerin üreticisine bağlı olmaksızın gerekli analiz yöntemlerini bağımsız olarak geliştirme olanağına sahiptir.

Doğru enstrümantasyon konfigürasyonunun seçilmesi

var çok sayıda çeşitli metodlar yüz binlerce Dalton ağırlığındaki karmaşık protein makromoleküllerinin yapısal tanımlanmasından küçük moleküllerin rutin yüksek performanslı kantitatif analizine kadar çok çeşitli sorunları çözmek için tasarlanmış kütle spektrometresi ve kütle spektrometresi türleri.

Görevi başarıyla çözmek için ana koşullardan biri doğru ekipman türünün seçimidir. Analitik problemlerin tamamını çözebilecek evrensel bir araç yoktur. Bu nedenle, mikroorganizmaları tanımlama problemini çözmek için tasarlanmış bir cihaz, küçük moleküllerin kantitatif bir analizini gerçekleştirme yeteneğine sahip değildir. Ve tam tersi. Gerçek şu ki, ortak isme rağmen, kesinlikle çeşitli cihazlar farklı fiziksel prensiplere göre çalışır. İlk durumda, bu, bir lazer iyonizasyon kaynağına - MALDI-TOF ve ikinci durumda - elektrosprey iyonizasyona sahip üçlü bir dört kutuplu - HPLC-MSMS'ye sahip bir uçuş süresi kütle spektrometresidir.

İkinci en önemli parametre, doğru sistem konfigürasyonunun seçimidir. Kütle spektrometrik ekipmanın birkaç büyük üreticisi vardır. Her üreticinin cihazlarının yalnızca güçlü yönleri değil, aynı zamanda zayıf taraflar hakkında genellikle sessiz kalmayı tercih ederler. Her üretici kendi cihaz serisini üretir. Bir analitik kompleksin maliyeti 100.000$ ila 1.000.000$ aralığında veya daha fazladır. En iyi üreticiyi ve doğru ekipman konfigürasyonunu seçmek, yalnızca önemli mali kaynakları kurtarmakla kalmayacak, aynı zamanda sorunu daha verimli bir şekilde çözecektir. Ne yazık ki, laboratuvar donanımının bu faktörler dikkate alınmadan gerçekleştirildiği birçok örnek vardır. Sonuç, atıl ekipman, boşa harcanan paradır.

Laboratuvarın başarılı çalışmasını belirleyen üçüncü faktör personeldir. Kütle spektrometreleri yüksek nitelikli personel gerektirir. Ne yazık ki, Rusya'daki üniversitelerin hiçbirinde, özellikle klinik uygulamalarla ilgili olarak, modern pratik kütle spektrometresi dersi yoktur ve her laboratuvarın personelini eğitme görevleri kendi başlarına çözülmelidir. Doğal olarak, ekipmanın piyasaya sürülmesinden sonra üretici tarafından gerçekleştirilen 2-3 günlük alıştırma eğitimi, yöntemin temellerini anlamak ve cihazla çalışma becerisi kazanmak için kesinlikle yeterli değildir.

Dördüncü faktör, hazır analiz yöntemlerinin olmamasıdır. Her laboratuvarın, çözümü için kendi yöntemlerini geliştirmesi gereken kendi öncelikli görevleri vardır. Bu, cihaz üzerinde en az 2-3 yıl çalışma deneyimi olan bir kişi tarafından yapılabilir. Üreticiler bazen tavsiye niteliği taşıyan bir veya iki genel yöntem sunarlar, ancak bunları belirli laboratuvar görevlerine uyarlamazlar.

İÇİNDE BioPharmExpert LLC alanında uzun yıllara dayanan deneyime sahip profesyonellerdir. çeşitli tipler kütle spektrometrelerinin yanı sıra yöntemlerin geliştirilmesi ve yüksek verimli analizlerin formülasyonu. Bu nedenle aşağıdaki hizmetleri sağlamaktayız:

1. Belirli müşteri görevleri için en uygun cihaz konfigürasyonunun seçimi.
2. Tandem kütle spektrometrelerinin önde gelen üreticilerinden ekipman alımı, teslimatı ve lansmanı Ekipmanın lansman tarihinden itibaren bir yıl içinde personelin aşamalı olarak eğitimi.
3. Temel klinik problemleri çözmek için bir dizi hazır yöntem ve veri tabanı.
4. Personelinin katılımıyla laboratuvarında müşterinin belirli görevlerinin analizi ve çözüm yöntemlerinin geliştirilmesi.
5. İşin her aşamasında metodolojik destek.