Kaj vključuje analiza CSR. CSR - kaj je to v medicini? Kako interpretirati rezultate seroloških študij

Osnova za izdelavo Klasifikatorja gradbenih virov je Akcijski načrt za izboljšanje sistema oblikovanja cen in okvirnega racioniranja v gradbeništvu, ki ga je potrdil podpredsednik vlade. Ruska federacija D.N. Kozak 20. februar 2016 št. 1381p-P9, državna naloga za opravljanje storitev (opravljanje del), ki jo je odobrilo Ministrstvo za gradbeništvo in stanovanjske in komunalne storitve Ruske federacije 30. oktobra 2015

Podatki o klasifikatorju

RAZVIL Ministrstvo za gradbeništvo in stanovanjske in komunalne storitve Ruske federacije

ZASTOPA Ministrstvo za gradbeništvo, stanovanjske in komunalne storitve Ruske federacije

UVELJA Zvezna avtonomna institucija " zvezno središče oblikovanje cen v gradbeništvu in industriji gradbenih materialov«

Klasifikator gradbenih virov (CSR-2016) je zgrajen na podlagi sinhronizacije s statistično klasifikacijo proizvodov po dejavnosti v Evropski gospodarski skupnosti, različica 2008 (CPA 2008) in vseruskim klasifikatorjem izdelkov po vrsti. gospodarska dejavnost(OKPD2) OK 034-2014 (CPE 2008) s povezavo na kode OKPD2 (CPE 2008) (do vključno devet znakov). Lastnosti, ki odražajo potrebe rusko gospodarstvo glede na podrobnosti izdelka se upoštevajo v skupinah OKPD2 s 7-9 mestnimi kodami.

Struktura in načela za izgradnjo razvitega klasifikatorja gradbenih virov ustrezajo splošnim metodološkim načelom za izgradnjo vseruskega klasifikatorja izdelkov po vrsti gospodarske dejavnosti (OKPD2) OK 034-2014 (KPES 2008), ki ga je sprejel in uveljavil ukaz Zvezne agencije za tehnično regulacijo in meroslovje z dne 31.01.2014 št. 14. stol.

Obrazec CSR-2016 vam omogoča samodejno izmenjavo, sinhronizacijo, primerjavo in analizo informacij, ki jih prejmejo različni oddelki in organizacije, vključno z mednarodni sistemi razvrstitev.

Predmeti razvrščanja v CSR-2016 so gradbeni viri (materiali, proizvodi, konstrukcije, oprema, stroji in mehanizmi).

CSR-2016 je zasnovan za zagotavljanje informacijske podpore za naloge, povezane z:

• klasifikacija in šifriranje gradbenih virov (materiali, proizvodi, konstrukcije, oprema, stroji in mehanizmi) za namene oblikovanja cen v gradbeništvu;

• spremljanje stroškov gradbenih sredstev;

• zagotavljanje poenotenja, avtomatizacije izračuna stroškov gradnje objektov z uporabo produktov uporabne programske opreme.

DAC-2016 uporablja metodo hierarhične klasifikacije in metodo zaporednega kodiranja. Koda je sestavljena iz 2-17 (2-15) digitalnih znakov, njena struktura pa je lahko predstavljena na naslednji način:

Prvih 6 števk položaja:

XX.XX.XX CPA 2008

Za materiale, izdelke, strukture in opremo

XX.X del

razdelek XX.X.XX

XX.X.XX.XX skupina

Položaj XX.X.XX.XX-XXXX (posamezna koda vira)

Za stroje in mehanizme

XX.XX razdelek

XX.XX.XX skupina

Položaj XX.XX.XX-XXX (posamezna koda vira)

X - simbol, ki označuje števke digitalnega dela kode

CSR-2016 sestavljajo knjige. KSR-2016 lahko vsebuje do 99 knjig (maska ​​knjige "XX"). Knjige so oblikovane ob upoštevanju specializiranih del in klasifikacije po OKPD2, posebnosti gradbenega območja in s cilji enostavne uporabe CSR-2016 za strokovnjake na področju predračunskih cen. Oblikovanje knjig je potekalo ob upoštevanju logike oblikovanja zbirk GESN-2001 (državni elementarni ocenjeni standardi). Viri, ki se uporabljajo samo pri specializiranem delu (ozko usmerjeno ali posebno področje uporabe), so združeni v ločene knjige. Viri s širokim spektrom uporabe so razvrščeni v knjige po fizikalnih lastnostih (vrsta materiala; fizikalna in kemična sestava).

Knjiga lahko vsebuje dele, do 9 delov (maska ​​dela "X"). Deli v knjigi so razvrščeni glede na uporabo sredstev v tehnološkem procesu gradnje (ni delitve na dele za stroje in mehanizme).

Del vsebuje razdelke, do 99 razdelkov (maska ​​razdelka "XX"). Razdelki v knjigi so deli razvrščeni po imenu razdelka po abecednem vrstnem redu.

Razdelek vsebuje skupine, do 99 skupin (maska ​​skupine "XX"). Skupine v razdelku so razvrščene po imenu skupine po abecednem vrstnem redu. Skupine, ki v imenu vsebujejo elemente "..., niso vključene v skupine", se nahajajo na koncu razdelkov.

Položaj je vezan na knjigo, del, razdelek, skupino. Maska položaja "ХХХХ" ("ХХХ") (največje število položajev v skupini je 9999 (999). Položaji so združeni po imenih po abecednem vrstnem redu.

Obrazec KSR-2016 je sestavljen iz kode CPA, kode KSR, imena položaja in merske enote. Na primer:

Viri v klasifikatorju gradbenih virov so vezani na ustrezne skupinske skupine po šifrantih OKPD2 (CPA 2008) (razdelki, skupine klasifikatorja gradbenih virov so vezani na ustrezne skupinske skupine po OKPD2 (CPA 2008).

Viri, vključeni v klasifikator, so vezani na merske enote v skladu z vseruskim klasifikatorjem OK 015 94 "Vse ruski klasifikator merskih enot".

Pri šifriranju knjig, delov, odsekov, skupin, položajev so zagotovljene rezervne zmogljivosti (proste šifre v klasifikatorju).

Za materiale, izdelke in konstrukcije so na voljo rezervne knjige 28-60, za opremo - knjige 70-90, za stroje in mehanizme - knjige 92-99.

Glavne skupine klasifikatorjev:

I. MATERIALI, IZDELKI IN KONSTRUKCIJE

Knjiga 01. Materiali za gradbena in cestna dela

01.1. Materiali, izdelki in strukture, ki vsebujejo krizotil

01.1.01. Izdelki in konstrukcije iz krizotilnega cementa

01.1.02. Materiali, ki vsebujejo krizotil

01.2. Bitumen in bitumenski izdelki, katran

01.2.01. bitumen

01.2.02. katran

01.2.03. bitumenski izdelki

01.3. Goriva in maziva, plini, kemični izdelki

01.3.01. goriva in maziva

01.3.02. plini

01.3.03. kisline

01.3.04. Olja

01.3.05. Kemični materiali in reagenti

01.4. Materiali za vrtanje in obračanje

01.4.01. Orodja za vrtanje kamnin ali zemlje

01.4.02. Sestavni deli (rezervni deli) strojev za vrtanje in tuneliranje

01.4.03. Materiali in izdelki za vrtanje in tuneliranje

01.4.04. Filtri za vrtanje

01.5. Sredstva za organizacijo prometa

01.5.01. Materiali za označevanje cest

01.5.02. Cestne ovire

01.5.03. Elementi tehničnega predpisa

01.6. Materiali in izdelki za oblaganje in lepljenje

01.6.01. Listi, plošče in plošče

01.6.02. Tapete in drugi premazi

01.6.03. PVC prevleke

01.6.04. Spuščeni in raztegljivi stropi

01.7. Materiali in izdelki za gradbeništvo in posebne namene

1.7.01. Posebne pregrade in mreže

1. 7. 2. Papirji in kartoni

01.7.03. Voda, para, zrak, elektrika

1. 7. 4. Strojna oprema in dodatki

01.7.05. Lak-steklotkanine, steklotekstoliti, tekstoliti

01.7.06. Gradbeni trakovi

1.7.07. Pomožni materiali

01.7.08. Vezivna sredstva in dodatki, kreda

01.7.09. Materiali za peskanje

1.7.10. Materiali za restavriranje in restavratorska dela

1.7.11. Materiali za varjenje

1.7.12. Geosintetični materiali in izdelki

1.7.13. Asfaltni materiali in izdelki

1.7.14. Polimerni materiali

1.7.15. Strojna oprema

1.7.16. Opažni odri, gradbeni odri

1.7.17. Oprema tehnološka in orodna

1.7.18. Tla so topla

1.7.19. Guma in izdelki iz gume

7/01/20. Tekstil in tekstilni materiali

01.8. Gradbeno steklo in izdelki iz stekla

1.8.01. stekleni izdelki

1. 8. 2. Gradbeno steklo

Knjiga 02

02.1. Gline, prsti, mešanice prsti

2.1.01. Gline, tla

2. 1. 2. Mešanice, ki vsebujejo zemljo

02.2. Kamnite granule, drobtine in prah, prodniki, gramoz, drobljenci, mešanice

2. 2. 1. Prodniki, gramoz

2. 2. 2. Kamene granule, drobtine in prah

2. 2. 3. Naravni drobljeni kamni

2. 2. 4. Mešanice

2. 2. 5. ruševine

02.3. Pesek

02.3.01. Gradbeni in dekorativni pesek

02.4. Mešanice žlindre in podobnih industrijskih odpadkov

02.4.01. Pesek iz žlindre

2. 4. 2. Mešanice žlindre

02.4.03. Drobilec žlindre

Knjiga 03

03.1. apna in sadre

03.1.01. Mavec

03.1.02. Apno

03.2. cementi

3.2.01. Splošni gradbeni cementi

3.2.02. Posebni cementi

Knjiga 04

04.1. beton, pripravljen za uporabo

4.1.01. Lahki beton

4. 1. 2. Težki in drobnozrnati betoni

04.2. Mešanice asfaltnega betona

4.2.01. Asfaltno-betonske vroče mešanice

4.2.02. Asfaltne mešanice vroče litine

4.2.03. Asfaltno-betonske vroče zdrobljene mešanice

4. 2. 4. Mešanice asfaltnega betona in hladnega asfaltnega betona

4.2.05. Mešanice asfaltnega betona z uporabo kompozitnih materialov

04.3. Gradbene mešanice in malte

04.3.01. Rešitve

4.3.02. Mešanice

Knjiga 05

05.1. Montažne armiranobetonske konstrukcije in izdelki

5.1.01. Konstrukcije in detajli inženirskih objektov

05.1.02. Konstrukcije in deli za posebne namene

5.1.03. Okvirne konstrukcije zgradb in objektov

05.1.04. Stenske in predelne konstrukcije

5.1.05. Temeljne strukture

5.1.06. Plošče, paneli in obloge za tla in strehe

5.1.07. Strukturni elementi ter arhitekturne in gradbene zgradbe in objekti

05.1.08. Druge gradbene konstrukcije

05.2. Plošče, opeka in podobni izdelki iz cementa, betona ali umetnega materiala

05.2.01. silikatnih blokov

5. 2. 2. Izdelki iz cementa, betona ali umetnega kamna

5.2.03. Gradbena opeka (vključno kamni) iz cementa, betona ali umetnega materiala

5. 2. 4. Plošče iz cementa, betona ali umetnega kamna

05.3. Štukaturni izdelki iz mavca in cementa

5.3.01. Štukaturni izdelki iz mavca

5. 3. 2. Štukaturni izdelki iz cementa

05.4. Gradbeni izdelki iz mavca

05.4.01. Mavčni kamni, plošče in plošče

Knjiga 06

06.1. Opeka in gradbeni izdelki iz žgane gline

6.1.01. Opeka in kamni, keramični neognjevarni objekti

6.1.02. Drugi gradbeni izdelki iz keramike

06.2. Keramične ploščice

6.2.01. Glazirane keramične ploščice za notranje stenske obloge

6. 2. 2. Talne ploščice

6.2.03. Fasadne keramične ploščice in tepihi iz njih

6.2.04. Kislinsko odporne in toplotno kislinsko odporne keramične ploščice

6.2.05. Druge keramične ploščice

Knjiga 07

07.1. Vrata, okna in njihovi okvirji ter pragovi za vrata

7.1.01. vrata

7. 1. 2. Okno

7.1.03. Okenske vezave

7.1.04. Svetilke

07.2. Gradbene konstrukcije in detajli

7.2.01. Konstrukcije hidravličnih konstrukcij

7.2.02. Konstrukcije in detajli daljnovodov in zunanjih transformatorskih postaj

7.2.03. Gradnja okvirnih konstrukcij

7.2.04. Načrti industrijskih peči

7.2.05. Ogradne in vgradne konstrukcije

7.2.06. Elementi obloge

7.2.07. Druge konstrukcije in konstrukcijski detajli konstrukcij

07.3. Mostovi in ​​mostni deli

7.3.01. Galerije in nadvozi

7.3.02. Konstrukcije mostov in umetnih konstrukcij

07.4. Stolpni nosilci in rešetkasti stebri

7.4.01. Stebri in stolpi, radijski stolpi, stebri tipa stolp

7. 4. 2. Nosilci (stebri) kontaktnega omrežja železnic

7.4.03. Nosilci daljnovodov (TL)

07.5. Rezervoarji, rezervoarji, sodi in podobne posode

7. 5. 1. Zmogljivosti

7. 5. 2. cisterne

Knjiga 08

08.1. Kovinski izdelki

8.1.01. Gabionske strukture

8. 1. 2. Kovinski izdelki za splošno gradnjo in posebne namene

8.1.03. Elementi prezračevalnih komor in jaškov

8. 1. 4. Dimniški elementi

8.1.05. Elementi žlebov za smeti

8. 1. 6. Ograjni elementi

08.2. Jeklene vrvi

8.2.01. Vrvi zaprte

2. 8. 2. Vrvi so okrogle

8.2.03. Vrvi so ravne

8. 2. 4. Druge jeklene vrvi

08.3. Valjana kovina

8.3.01. I-nosilci

8.3.02. Jekleni trakovi

8.3.03. Žica

8.3.04. Valjano okroglo in kvadratno

8.3.05. Valjana plošča

8. 3. 6. Valovita pločevina valovita in valovita

8.3.07. Valjani trak

8. 3. 8. najem kota

8.3.09. Profili upognjeni

8.3.10. Oblikovani profili

8.3.11. Kanali

8.3.12. Drugi valjani izdelki in jeklo

08.4. Armaturno jeklo

8.4.01. Podrobnosti o hipoteki in režijskih stroških

8. 4. 2. Okvirji, mreže, paketi

8.4.03. Vroče valjana armatura za armiranobetonske konstrukcije

Knjiga 09

09.1. Vitraji, vitrine, predsobe

9.1.01. Vitraji

9.1.02. Tamburji

09.2. Konstrukcije in dekorativni izdelki za oblaganje

9.2.01. Paneli, plošče, obrobe in dekorativni elementi obloge

9.2.02. Spuščeni stropi

9.2.03. Posebni aluminijasti profili

09.3. Konstrukcije in gradbeni proizvodi

09.3.01. Drogi, vratna krila, pritrdilni elementi

09.3.02. Ograje za balkone, lože, stopnišča

3. 9. 3. Stenske in strešne plošče

9.3.04. Predelne stene

09.4. Okna, vrata, balkonska vrata

09.4.01. Bloki balkonskih vrat in dodatki

09.4.02. Vratni bloki in dodatki

9.4.03. Okenski bloki in dodatki

10. knjiga

10.1. Aluminij in aluminijeve zlitine

10.1.01. Aluminij in aluminijeve zlitine, neobdelane

10.1.02. Polizdelki iz aluminija ali aluminijevih zlitin

10.2. Baker in njegove zlitine

10.2.01. Baker in njegove zlitine, neobdelani

10.2.02. Polizdelki iz bakra in zlitin

10.3. Svinec, cink, kositer in njihove zlitine

10.3.01. Polizdelki iz svinca, cinka in kositra ali njihovih zlitin

10.3.02. Svinec, cink, kositer, neobdelani

10.4. Druge kovine in zlitine

10.4.01. Kovine in zlitine, surove

10.4.02. Polizdelki iz drugih kovin in zlitin

Knjiga 11. Izdelki in konstrukcije iz lesa in plastičnih profilov

11.1. Les

11.1.01. Profiliran les

11.1.02. Les surov

11.1.03. Žagan in skobljan les

11.2. Leseni izdelki in konstrukcije

11.2.01. Balkonska vrata in leseni podboji

11.2.02. Vrata, njihovi podboji in leseni pragovi

11.2.03. Les, stisnjen v obliki blokov, plošč, tramov ali profiliranih izdelkov

11.2.04. Leseni gradbeni in mizarski izdelki

11.2.05. Dizajni vrat in prehodov

11.2.06. Konstrukcije lesene lepljene nosilne

11.2.07. Okna in njihovi leseni okvirji

11.2.08. Vlaknene plošče iz lesa ali drugih olesenelih materialov

11.2.09. Iverne in podobne plošče iz lesa ali drugih olesenelih materialov

11.2.10. Tla so ploščati parketi

11.2.11. Vezan les

11.2.12. Kmetije, loki in leseni tramovi

11.2.13. Ščiti, plošče

11.2.14. Elementi in detajli vgradnih in medetažnih omar

11.3. Plastični izdelki in konstrukcije

11.3.01. Vratni bloki iz PVC profilov

11.3.02. Okenski bloki iz PVC profilov

11.3.03. Gradbeni izdelki iz plastičnih mas

11.3.04. Drenažni sistemi

12. knjiga

12.1. Materiali in izdelki za strešne, hidro in parne zapore

12.1.01. Strešni materiali in izdelki

12.1.02. Rolo materiali

12.1.03. Strešniki

12.2. Toplotno in zvočno izolacijski materiali in izdelki

12.2.01. Toplotnoizolacijske konstrukcije in izdelki

12.2.02. Zvočno izolirani materiali in izdelki

12.2.03. Toplotnoizolacijski materiali

12.2.04. Izolacijske preproge

12.2.05. Izolacijske plošče

12.2.06. Školjke, segmenti

12.2.07. Cevi, zvitki

12.2.08. Cilindri in polcilindri toplotnoizolacijski

knjiga 13

13.1. Marmor, travertin, alabaster, obdelan, in izdelki iz njih

13.1.01. Granule in prah iz marmorja, travertina in alabastra, umetno obarvan

13.1.02. Marmor obdelan in izdelki iz njega

13.1.03. Travertin, apnenec, dolomit, mavčni kamni in izdelki iz njih

13.2. Drugi obdelani okrasni ali gradbeni kamni in izdelki iz njih

13.2.01. Granit in druge kamnine ter izdelki iz njih

13.2.02. Drugi umetno obarvani granulati in prah iz naravnega kamna

13.2.03. Stranski, mostni in zidni kamni iz naravnega kamna

13.2.04. Drugi izdelki in materiali iz kamna

14. knjiga

14.1.01. Lepila živalskega izvora

14.1.02. Lepila na osnovi polimerizacijskih smol

14.1.03. Lepila na osnovi naravnih kemično modificiranih smol

14.1.04. Lepila na osnovi kavčuka (kavčuk)

14.1.05. Lepila iz polikondenzacijske smole

14.1.06. Druga lepila (lepilne mešanice)

14.2. Materiali za protikorozijske in zaščitne premaze

14.2.01. Sestavine

14.2.02. Protipožarni materiali in izdelki

14.2.03. Zaščitni premazi

14.2.04. smole

14.2.05. Sestavine za zaščito

14.2.06. Drugi materiali za protikorozijske in zaščitne premaze

14.3. Barve in laki na osnovi akrilnih ali vinilnih polimerov v vodnem okolju

14.3.01. Primerji na osnovi akrilnih ali vinilnih polimerov v vodnem okolju

14.3.02. Barve na osnovi akrilnih ali vinilnih polimerov v vodnem okolju

14.3.03. Laki na osnovi akrilnih ali vinilnih polimerov v vodnem mediju

14.4. Barvni materiali na osnovi poliestrov, akrilnih ali vinilnih polimerov v nevodnem mediju; 1460

14.4.01. Primerji na osnovi poliestrskih, akrilnih ali vinilnih polimerov v nevodnih medijih

14.4.02. Barve na osnovi poliestrskih, akrilnih ali vinilnih polimerov v nevodnih medijih

14.4.03. Laki na osnovi poliestrskih, akrilnih ali vinilnih polimerov v nevodnih medijih

14.4.04. Emajli na osnovi poliestrskih, akrilnih ali vinilnih polimerov v nevodnih medijih

14.5. Druge barve in laki ter podobni materiali za nanašanje premazov; že pripravljeni sušilniki

14.5.01. Tesnilne mase

14.5.02. kiti

14.5.03. Suhe mešane barve in druge suhe barve

14.5.04. Mastike

14.5.05. Sušilna olja

14.5.06. paste

14.5.07. Pigmenti, pripravljeni

14.5.08. Dekorativni premazi

14.5.09. Topila in razredčila, pralna sredstva

14.5.10. Pripravljeni sušilniki

14.5.11. Kiti

Knjiga 15

15.1. Projektili, inventar in oprema za šport ali igre na prostem

15.1.01. Oprema za športne igre

15.1.02. Drugi izdelki za šport ali igre na prostem

15.2. Elementi za izboljšanje

15.2.01. Elementi urbanega izboljšanja

15.2.02. Ograjni elementi

15.2.03. Elementi izboljšave parka

16. knjiga

16.1. Materiali za urejanje krajine

16.1.01. Materiali za rezervoarje

16.2. Materiali za vrtnarjenje

16.2.01. zemlja, šota

16.2.02. Sadilni materiali

16.2.03. Gozdni nelesni in rastlinski viri

16.3. Materiali za gnojila in sredstva za zaščito rastlin

16.3.01. Fitofarmacevtska sredstva

16.3.02. gnojila

knjiga 17

17.1. Nežgani ognjevarni izdelki in drugi ognjevzdržni izdelki

17.1.01. Nežgani ognjevarni izdelki

17.1.02. Drugi ognjevzdržni izdelki

17.2. Opeke, bloki, plošče in drugi keramični izdelki iz kremenčeve moke ali diatomejske zemlje 1524

17.2.01. Bloki iz kremenčeve kamene moke ali diatomejske zemlje

17.2.02. Izdelki iz silikatne kamene moke ali diatomejske zemlje

17.3. Opeka, bloki, plošče in drugi ognjevzdržni izdelki, razen izdelkov iz silikatne kamene moke ali zemlje

17.3.01. Ognjevarni bloki, razen izdelkov iz kremenčeve moke ali diatomejske zemlje

17.3.02. Ognjevarni aluminosilikatni izdelki, vključno s šamotom, polkisli

17.3.03. Ognjevarni izdelki iz silicijevega karbida, vključno z električnimi grelci iz silicijevega karbida

17.3.04. Magnezitni ognjevzdržni izdelki, vključno s periklazom, kromitom, spinelom, magnezijevim silikatom, magnezijevim apnom 1575

17.3.05. Ognjevzdržni mulit-silicijev dioksid, mulit, mulit-korund in izdelki iz korunda

17.3.06. Ognjevarni izdelki iz ogljika, vključno z ogljikom in grafitom

17.3.07. Izdelki iz cirkona

17.3.08. Ognjevzdržna opeka, razen izdelkov iz kremenčeve moke ali diatomejske zemlje

17.3.09. Ognjevarne plošče, razen izdelkov iz kremenčeve kamene moke ali diatomejske zemlje

17.4. Ognjevarni cementi, malte, betoni in podobne spojine, d.n. 1626

17.4.01. Ognjevarni beton

17.4.2002. Ognjevarni agregati

17.4.03. Ognjevarne malte

17.4.04. Gradbene ognjevarne malte in mešanice

17.4.05. Drugi neoblikovani ognjevzdržni materiali

Knjiga 18

18.1. Priključki za cevi

18.1.01. zaporni ventili

18.1.02. zaprtja

18.1.03. kontrolni ventili

18.1.04. Varnostni ventili

18.1.05. Kontrolni ventili

18.1.06. Ventili za zmanjšanje tlaka

18.1.07. Pribor za pipe, ventile

18.1.08. Krogelni ventili

18.1.09. Pipe, armature, ventili za umivalnike, korita, bideje, straniščne školjke, kopalne kadi in podobne armature

18.1.10. Regulatorji tlaka in nivoja

18.2. Materiali in izdelki za vodovodne in kanalizacijske sisteme

18.2.01. Sanitarni keramični izdelki

18.2.02. Sanitarni kovinski izdelki

18.2.03. Sanitarni plastični izdelki

18.2.04. vodnjaki

18.2.05. Dodatki za bazene (ribnike)

18.2.06. Pribor za sanitarno keramiko

18.2.07. Povečane montažne enote (za cevovode)

18.2.08. Filtri in pribor za vodovodne sisteme

18.3. Materiali in izdelki za sistem za gašenje požara z vodo

18.3.01. Rokavi, stebla in glave za rokave

18.3.02. Požarne omare in ščiti

18.4. Materiali in izdelki za sistem oskrbe s plinom

18.4.01. Materiali in izdelki za sistem oskrbe s plinom

18.5. Materiali in izdelki za sistem oskrbe s toploto

18.5.01. Ekspanzijski rezervoarji

18.5.02. Cisterne, posode in pladnji za vodo

18.5.03. vložki

18.5.04. Glavniki in dodatki

18.5.05. Gryazeviki

18.5.06. Ogrevalni konvektorji

18.5.07. Parne zapore in pribor

18.5.08. Materiali in komponente

18.5.09. Sušilniki brisač

18.5.10. Radiatorji in dodatki

18.5.11. Ogrevalni registri

18.5.12. Rebraste cevi za ogrevanje

18.5.13. Povečane montažne enote, dvigala (za cevovode)

18.5.14. Filtri za ogrevalni sistem

Knjiga 19. Materiali in izdelki za prezračevalne in klimatske sisteme

19.1. Zračni kanali, zračne odprtine, razdelilniki zraka, zbiralniki zraka

19.1.01. Zračni kanali in dodatki

19.1.02. Zračniki in razdelilniki zraka

19.1.03. Zračni zbiralniki

19.1.04. Deflektorji

19.1.05. Difuzorji

19.1.06. Prehodna vozlišča izpušnih prezračevalnih jaškov

19.2. Izolatorji vibracij, dežniki, sesalniki, rešetke

19.2.01. Izolatorji vibracij, fleksibilni vložki

19.2.02. Dežniki in odsesavanje prezračevanja

19.2.03. Rešetke in mreže v okvirjih

19.3. Lopute, ventili, filtri, komponente za prezračevalne in klimatske sisteme

19.3.01. Lopute in ventili za prezračevalni sistem

19.3.02. Materiali in izdelki za klimatske in prezračevalne sisteme

19.3.03. Filtri in dodatki za prezračevalne in klimatske sisteme

19.4. Izdelki in strukture, ki absorbirajo hrup

19.4.01. Dodatki za dušilec zvoka

19.4.2002. Dušilci zvoka

20. knjiga

20.1. Linearna armatura

20.1.01. Linearne spone

20. 1. 2. Linearni ojačitveni elementi

20.2. Električne armature

20.2.01. Rokavi

20.2.02. Zaščitni izdelki

20.2.03. Pribor za kovinske nosilne sisteme kablov

20.2.04. Kovinska kabelska omarica

20.2.05. Plastične kabelske omarice

20.2.06. Montažni nosilci

20.2.07. Kovinski nosilci za kable

20.2.08. Materiali in izdelki za montažo in pritrditev

20.2.09. Kabelske spojke in izdelki za spojke

20.2.10. Objemke za kable in žice

20.2.11. Zaščitni distančniki

20.2.12. Električne izolacijske cevi

20.3. Materiali in izdelki za razsvetljavo

20.3.01. Dodatki za svetila

20.3.02. Svetilke

20.3.03. Lestenci in svetilke

20.3.04. Ostala svetila in svetilne naprave

20.4. Elektroinstalacijski material in izdelki

20.4.01. Stikala za električne napeljave

20.4.2002. Varovalke

20.4.03. Konektorji in vtičnice

20.4.04. Omare, ščitniki, škatle za vgradnjo električnih naprav

20.5. Stikalne in varnostne naprave za električna vezja

20.5.01. Vložki

20. 5. 2. Električne omarice

20.5.03. Mostovi in ​​pnevmatike za pnevmatike

20.5.04. Električni konektorji, kontaktne sponke, kompleti sponk

21. knjiga

21.1. Kabli

21.1.01. Kabli iz optičnih vlaken

21.1.02. Kabli za železniški promet za napetost nad 1 kV

21.1.03. Koaksialni kabli

21.1.04. Komunikacijski kabli

21.1.05. Napajalni kabli za nestacionarno polaganje za napetost največ 1 kV

21.1.06. Napajalni kabli za fiksno polaganje za napetost največ 1 kV

21.1.07. Napajalni kabli za fiksno polaganje za napetost nad 1 kV

21.1.08. Kabli za krmiljenje, nadzor, signalizacijo

21.2. Žice, vrvice

21.2.01. Žice za nadzemne električne vode

21.2.02. Komunikacijske žice in vrvice

21.2.03. Napajalne žice in kabli

22. knjiga

22.1. Materiali in izdelki nelinearnih struktur

22.1.01. Škatle, omare, ščiti in škatle (strukture)

22.1.02. Materiali in izdelki, komponente in pomožna sredstva

22.2. Materiali in izdelki linearnih konstrukcij

22.2.01. izolatorji

22.2.02. Materiali in izdelki za pritrjevanje in montažo linearnih konstrukcij

Knjiga 23

23.1. Podrobnosti cevi

23.1.01. Kompenzatorji

23.1.02. Pribor za cevovode

23.1.03. Podpore za cevovode

23.2. Cevi iz neželeznih kovin

23.2.01. Cevi iz aluminija in aluminijevih zlitin

23.2.02. Cevi iz bakra in bakrovih zlitin

23.2.03. Svinčene cevi

23.3. Votle jeklene cevi in ​​profili

23.3.01. Vrtalne in obložne cevi ter pribor

23.3.02. Visokotlačne brezšivne jeklene cevi

23.3.03. Brezšivne vroče oblikovane jeklene cevi

23.3.04. Brezšivne jeklene cevi za naftovode in plinovode

23.3.05. Brezšivne hladno oblikovane jeklene cevi

23.3.06. Jeklene cevi za vodo in plin

23.3.07. Valovite in spiralne jeklene cevi

23.3.08. Neokrogle jeklene cevi in ​​votli profili

23.3.09. Cevi jeklene elektrovarjene

23.3.10. Druge okrogle jeklene cevi

23.4. Jeklene cevi, izolirane in obrobljene

23.4.01. Izolirane jeklene cevi

23.4.2002. Obložene jeklene cevi

23.5. Varjene jeklene cevi okroglega preseka

23.5.01. Varjene jeklene cevi za naftovode in plinovode

23.5.2002. Druge varjene jeklene cevi okroglega preseka

23.6. Cevi iz litega železa

23.6.01. Litoželezne breztlačne cevi

23.6.2002. Tlačne cevi iz litega železa

23.7. Cevovodi, cevne enote in cevovodi

23.7.01. Cevovodi in cevi

23.7.2002. Cevna vozlišča

23.8. Okovje, oblikovani in spojni deli

23.8.01. Oblikovani in spojni deli iz neželeznih kovin

23. 8. 2. Oblikovani in spojni deli, izolirani

23.8.03. Oblikovani in povezovalni jekleni deli

23.8.04. Deli profiliranih in povezovalnih tehnoloških cevovodov

23.8.05. Deli oblikovani in povezovalni litoželezni

Knjiga 24

24.1. Deli in izdelki za cevovode

24.1.01. Deli in dodatki

24.1.02. Nosilci

24.2. Cevi in ​​cevovodi iz materialov, ki niso polimeri

24.2.01. Keramične cevi

24.2.02. Kovinsko-polimerne cevi

24.2.03. Cevi za posebne namene

24.2.04. Cevi steklo, steklena vlakna, steklo-bazalt-plastika

24.2.05. Cevi iz krizotilnega cementa

24.2.06. Okovje, oblikovani in spojni deli

24.3. Cevi, cevi, cevi iz polimernih materialov

24.3.01. PVC cevi

24.3.02. Polipropilenske cevi

24.3.03. Polietilenske cevi

24.3.04. Cevi iz drugih polimerov

24.3.05. Okovje, oblikovani in spojni deli

Knjiga 25

25.1. Materiali zgornjega ustroja železniških tirov

25.1.01. Leseni izdelki za železnice

25.1.02. Izdelki iz armiranega betona za železnice

25.1.03. Nenavojni pritrdilni elementi za pritrjevanje strukturnih elementov železniškega tira iz črne barve 2870

25.1.04. Navojni pritrdilni elementi za pritrditev strukturnih elementov železniške proge iz črne barve 2872

25.1.05. Profili tirnic za železnice, jeklo

25.1.06. Tirne naprave in njihove komponente (rezervni deli), ki nimajo neodvisnih skupin

25.2. Materiali in izdelki za signalizacijo, centralizacijo, avtomatsko blokado in elektrifikacijo železnic

25.2.01. Armature kontaktnih omrežij

25.2.02. Konstrukcije in deli kontaktnega omrežja železnic, jekleni

Knjiga 26

26.1. Materiali za podzemne železnice in predore

26.1.01. Materiali za tuneliranje

26.1.02. Materiali in izdelki za delo na progi

Knjiga 27: Materiali in izdelki za zelena prometna omrežja

27.1. Materiali zgornjega ustroja tramvajskih tirov

27.1.01. Pritrdilni materiali in izdelki

27.1.02. Tirnični profili za tramvajske tire

27.2. Materiali in izdelki za kontaktna omrežja tramvajev in trolejbusov

27.2.01. Armature in vozlišča kontaktnega omrežja

27.2.02. Izolatorji kontaktnih linij za trolejbuse in tramvaje

27.2.03. Nosilci za kontaktno mrežo

II. OPREMA

knjiga 61

61.1. Oprema in naprave za komunikacijo, oddajanje in televizijo

61.1.01. Antene

61.1.02. Telefonija

61.1.03. Podatkovne komunikacijske naprave

61.1.04. Deli in dodatki komunikacijske opreme

61.2. Naprave in oprema za varnostne in požarne alarmne sisteme ter avtomatsko gašenje

61.2.01. Varnostni detektorji

61.2.02. Detektorji požara

61.2.03. Moduli za avtomatski gasilni sistem

61.2.04. Krmilne naprave, sirene

61.2.05. Varnostni radijski alarmi

61.2.06. Sprejemno-kontrolne naprave

61.2.07. Deli protivlomnih in protipožarnih naprav

61.3. Oprema, naprave in naprave elektronske

61.3.01. Kamkorderji in dodatki zanje

61.3.02. Zvočniki

61.3.03. Domofoni in domofonske naprave

61.3.04. Elektronske komponente in plošče

61.3.05. Računalniki, njihovi deli in dodatki

61.3.06. Mikrofoni in mikrofonske naprave

Knjiga 62

62.1. Distribucijska in krmilna oprema

62.1.01. Avtomatska stikala

62.1.02. Kompleti električne stikalne ali zaščitne opreme

62.1.03. Visokonapetostni odvodniki

62.1.04. Rele

62.1.05. Druge naprave za zaščito električnega tokokroga

62.2. Električni aparati za krmiljenje električnih inštalacij

62.2.01. Kontrolne tipke, krmilne postaje s tipkami, postaje, naprave

62.2.02. Komandne naprave, ročni zaganjalniki

62.3. Stikala in stikala neavtomatska, šaržna, ločilna stikala, nožna stikala in stikala

62.3.01. Stikala in stikala, neavtomatska

62.3.02. Paketna stikala in stikala

62.3.03. Potovalna stikala in stikala, bloki potovalnih stikal, mikrostikala (mikrostikala)

62.3.04. Stikala in stikala univerzalna, mala, križna, drsna, na ključe

62.3.05. Odklopniki

62.3.06. Nožna stikala in stikala

62.4. Napajalniki

62.4.01. Baterije

62.4.02. Napajalniki

62.5. Električna oprema in aparati

62.5.01. Gospodinjski električni aparati

62.5.02. transformatorji

62.6. Kontaktorji, elektromagnetni zaganjalniki

62.6.01. Nizkonapetostni elektromagnetni kontaktorji

62.6.02. Elektromagnetni zaganjalniki

62.7. Sredstva tehnične ureditve prometa

62.7.01. Oprema in naprave za tehnično vodenje prometa

Knjiga 63

63.1. Oprema za ogrevanje vode

63.1.01. Grelniki vode in pribor

63.1.02. Jekleni kotli

63.1.03. Litoželezni kotli

63.1.04. Drugi kotli

63.2. Stojala in vozlišča toplotnih dvigal

63.2.01. Dvigala in pribor

63.2.02. stojala

63.3. Grelne naprave

63.3.01. Električni konvektorji in radiatorji

63.4. Kontrolne in merilne naprave

63.4.01. Merilniki tlaka

63.4.02. merilniki pretoka

63.4.03. Regulatorji temperature in njihove naprave

63.4.04. Merilniki toplote

63.4.05. termometri

63.4.06. Toplotni pretvorniki

Knjiga 64

64.1. Ventilatorske enote in ventilatorji

64.1.01. Ventilatorske enote

64.1.02. Kanalski ventilatorji

64.1.03. Strešni ventilatorji

64.1.04. Aksialni ventilatorji

64.1.05. Radialni ventilatorji

64.2. Klimatska oprema

64.2.01. Prezračevalni bloki

64.2.02. kamere

64.2.03. Klimatske naprave in split sistemi

64.3. Oprema za čiščenje zraka

64.3.01. Enote za zbiranje prahu

64.3.02. Pralniki, cikloni

64.4. Prezračevalne naprave in instalacije

64.4.01. Prezračevalne enote

64.4.02. Avtomatske krmilne enote

64.4.03. Prezračevalne enote

64.5. Grelne enote in grelniki zraka

64.5.01. Enote za ogrevanje zraka

64.5.02. Grelniki zraka

64.5.03. grelci

64.5.04. Toplotni izmenjevalci

Knjiga 65

65.1. Instrumenti in instalacije

65.1.01. Vodomer (števci)

65.1.02. Krmilne naprave

65.1.03. Objekti in naprave za obdelavo

65.1.04. Merilniki vode

Knjiga 66

66.1. Plinske naprave

66.1.01. Plinske peči

66.1.02. Plinomeri

66.1.03. Naprave za plinske gorilnike

Knjiga 67

67.1. Dvigala in pribor zanje

67.1.01. dvigala

67.1.02. Naprave in naprave za dvigala

Knjiga 68

68.1. Črpalke

68.1.01. Črpalke za posebno uporabo

68.1.02. Centrifugalne črpalke

68.1.03. Obtočne črpalke

68.2. Črpalne in zaščitne postaje

68.2.01. Obrambne postaje

68.2.02. Črpalne postaje

Knjiga 69

69.1. Cevni priključki z električnim pogonom

69.1.01. Ventili in naprave za izpiranje

69.1.02. zaporni ventili

69.1.03. ventili

69.2. Lopute, lopute za zračne kanale na električni pogon

69.2.01. blažilniki

69.2.02. ventili

69.3. Termostatski elementi, električni pogoni

69.3.01. Električni pogoni

69.3.02. Termostatski elementi

III. STROJI IN MEHANIZMI

Knjiga 91

91.01. stroji za zemeljska dela

91.01.01. Buldožerji

91.01.02. Grederji

91.01.03. Strgala

91.01.04. Barske instalacije

91.01.05. Bagri

91.02. Stroji in enote za pilote in pločevine

91.02.01. Vibratorji

91.02.02. Ogrodje in zabijalni agregati, razen plavajočih

91.02.03. Kladiva

91.02.04. Instalacije vrtanih pilotov

91.02.05. Stroji in agregati za pilote in pločevine, ki niso vključeni v skupine

91.03. Stroji in enote za gradnjo predorov, rudarstvo in podzemno gradnjo

91.03.01. Polagalci blokov

91.03.02. Oboževalci

91.03.03. Vrtalni vozički

91.03.04. Kompleksi glinene malte

91.03.05. Predorski kompleksi in kombajni

91.03.06. Nakladalni stroji

91.03.07. opaž

91.03.08. Luknjači za jedro

91.03.09. Plezanje

91.03.10. Vrtalni stroji za vrtanje vrtin v podzemnih pogojih

03/91/11. vozički

91.3.12. Potiskalniki vozičkov

03/91/13. Plasti cevi

03/91/14. Cementni vozli

91.03.15. Pnevmatski vrtalni stroji

03/91/16. Pnevmohidravlični jaški vrtalni stroji

03/91/17. Električni vrtalni stroji

91.03.18. Tunelski ščiti

91.3.19. Stroji in enote za gradnjo predorov, rudarstvo in podzemno gradnjo, ki niso vključene skupine

91.04. Stroji in agregati za vrtanje

04/91/01. Rotacijski vrtalni stroji

91.04.02. Naprave za usmerjeno vrtanje

91.04.03. Naprave za vrtanje na vrvi

91.05. Žerjavi, razen plavajočih

91.05.01. Stolpni žerjavi

91.05.02. Portalni žerjavi

91.05.03. Konzolni žerjavi

91.05.04. Mostni žerjavi

91.05.05. Tovorna dvigala

91.05.06. Žerjavi goseničarji

05/91/07. Železniški žerjavi

91.05.08. Žerjavi s pnevmatskimi kolesi

91.05.09. Žerjavi na posebnem podvozju avtomobilskega tipa

05/91/10. Plazeči žerjavi

05/91/11. Portalni žerjavi

05/91/12. Boom žerjavi

05/91/13. Nakladalna dvigala

05/91/14. Žerjavi niso vključeni v skupine

91.06. Dvižni in transportni stroji in mehanizmi, razen žerjavov

91.06.01. Jacks

91.06.02. Tračni transporterji

91.06.03. Vitli

91.06.04. Montažni stebri

06/91/05. Nakladalniki

91.06.06. Dvigala

91.6.2007. Tali

06/91/08. Telferji

06/91/09. Dvižni in transportni stroji in mehanizmi, ki niso vključeni v skupine

91.07. Stroji za pripravo, dobavo in vgradnjo betona in malte

07/91/01. Žlice, silosi za cement

07/91/02. Črpalke za beton

07/91/03. mešalniki betona

07/91/04. Oprema za vibracije

07/91/05. Popis betonarn

07/91/06. Kompleksi za pripravo in čiščenje glinenih raztopin

07/91/07. maltne črpalke

07/91/08. mešalci malte

07/91/09. Fugirne naprave

07/91/10. Pištole za cement, puhalniki za malto

07/91/11. Stroji za pripravo, dobavo in polaganje betona in malte, d.n.

91.08. Stroji za gradnjo cest in letališč

91.08.01. asfalterji

91.08.02. Razdelilci asfalta

91.08.03. valji

91.08.04. Stroji za ogrevanje bitumna in asfaltnega betona

91.08.05. Stroji in enote za polaganje betona

91.08.06. Rezalniki šivov

08/91/07. Distributerji

91.08.08. Pipe

91.08.09. Nabijači in vibracijske plošče

08/91/10. Rezkalniki, rezkalni stroji

08/91/11. Stroji za gradnjo cest in letališč, ki niso vključeni v skupine

91.09. Stroji za gradnjo železnic

91.09.01. Železniški vagoni

91.09.02. Vozički

91.09.03. Vagoni in ploščadi

91.09.04. Železniški vagoni

91.09.05. Železniške lokomotive

91.09.06. Kontaktirajte stroje za namestitev omrežja

91.09.07. Stroji za čiščenje in doziranje balasta

91.09.08. Stroji za nakladanje in transport tirnih členov in materiala

91.09.09. Stroji za montažo, zlaganje in demontažo tirnih rešetk

91.09.10. Stroji za zbijanje, ravnanje, nabijanje in ravnanje tirov

09/91/11. Stroji za urejanje temeljev za nosilce kontaktne mreže

09/91/12. Stroji in orodja za delo s posameznimi elementi zgornjega ustroja tira

09/91/13. Električni in varilni stroji

09/91/14. Stroji za gradnjo železnic, d.n.

91.10. Stroji za gradnjo magistralnih cevovodov

91.10.01. Stroji za polnjenje in stiskanje

91.10.02. Podstavki za varjenje cevi

91.10.03. Tankerji za bitumen

91.10.04. Stroji za čiščenje, polnjenje in izolacijo cevi

91.10.05. Cevopolagalci

91.10.06. Instalacije za ogrevanje cevnih spojev

91.10.07. Stroji za prebijanje cevi

91.10.08. Sušilniki cevi

91.10.09. Naprave in enote za testiranje cevovodov

91.10.10. Centralizatorji

91.10.11. Stroji za gradnjo glavnih cevovodov, ki niso zajeti v skupinah

91.11. Stroji za gradnjo komunikacijskih vodov in daljnovodov

91.11.01. kabelske plasti

91.11.02. Stroji za gradnjo komunikacijskih vodov in daljnovodov, ki niso zajeti v skupinah

91.12. Stroji za vodnogospodarska gradbena in melioracijska dela

91.12.01. brane

91.12.02. Grubbers

91.12.03. Kosilnice

91.12.04. rezalnik ščetk

91.12.05. plugi

91.12.06. Riperji, kultivatorji

91.12.07. Sejalnice, sadilnice in sadilniki

91.12.08. Stroji za vodnogospodarska gradbena in melioracijska dela, ki niso zajeti v skupinah

91.13. Vozila za posebne namene

91.13.01. Vozila za javne službe in vzdrževanje cest

91.13.02. Oprema za odstranjevanje snega

91.13.03. Sredstva motornih vozil za posebne namene, ki niso vključena v skupine

91.14. Transportna sredstva za prevoz gradbenega materiala

91.14.01. Tovornjaki za mešanje betona

91.14.02. Avtomobili na krovu

91.14.03. Tovornjaki prekucniki

91.14.04. Traktorska vozila

91.14.05. Prikolice, polprikolice

91.14.06. Tovornjaki za cevi, tovornjaki za stebre

91.14.07. Prevozna sredstva za prevoz gradbenega materiala, ki niso zajeta v skupinah

91.15. Traktorji, traktorske prikolice

91.15.01. Traktorske prikolice in vozički

91.15.02. Traktorji Caterpillar

91.15.03. Pnevmatski traktorji na kolesih

91.16. elektrarne

91.16.01. Mobilne elektrarne

91.16.02. Mobilne elektrarne za gradnjo magistralnih cevovodov

91.16.03. Stacionarne elektrarne

91.17. Naprave za toplotno obdelavo, varjenje, preizkušanje in kontrolo zvarnih spojev

91.17.01. Varilni usmerniki

91.17.02. Naprave za kontrolo zvarnih spojev

91.17.03. Naprave za toplotno obdelavo

91.17.04. Varilne naprave in enote

91.18. Kompresorske postaje, kompresorji

91.18.01. Prenosni kompresorji

91.18.02. Kompresorske postaje

91.18.03. Kompresorske postaje, kompresorji, ki niso vključeni v skupine

91.19. Črpalke, črpalne postaje, hladilne in zamrzovalne postaje

91.19.01. Ilososi

91.19.02. Oljne črpalke

91.19.03. Oljne postaje

91.19.04. Vrtalne črpalke

91.19.05. Tunelske drenažne črpalke

91.19.06. blatne črpalke

91.19.07. Črpalke hladilne tekočine

91.19.08. Črpalke za pretok vode

91.19.09. Stacionarne črpalne postaje za poglabljanje

91.19.10. Črpališča, razen plavajočih

91.19.11. Hladilne in zamrzovalne postaje

91.19.12. Črpalke, črpališča, ki niso vključene v skupine

91.20. Plovila, plavajoči stroji in enote za podvodna tehnična dela

91.20.01. Enote za podvodna tehnična dela

91.20.02. barže

91.20.03. vlačilci

91.20.04. Plavajoči vibrokompaktorji

91.20.05. uvoz

91.20.06. Vleka čolnov

91.20.07. Plavajoči vodniki

91.20.08. Kopra plava

91.20.09. plavajoči žerjavi

91.20.10. Prizorišča in ploščadi

91.20.11. pontoni

91.20.12. Sesalne lupine

91.20.13. Potapljaške postaje

91.20.14. Plavajoče črpalne postaje

91.20.15. Črpalne postaje za poglabljanje

91.20.16. Čolni, čolni

91.21. Mehanizirana orodja, napeljave, obdelovalni stroji, druge enote

91.21.01. Enote za nanašanje premazov, barvanje

91.21.02. Visokotlačni čistilniki

91.21.03. Peskalniki, peskalniki

91.21.04. Poravnava koncev cevi

91.21.05. Orehi

91.21.06. Svedri

91.21.07. Brusilni stroji, strgala in skobeljniki

Punkcija regionalnih bezgavk

Serološka diagnoza

• Wassermanova reakcija (RV),
• sedimentne reakcije Kahna in Sachs-Vitebskega (citoholične),
• reakcija na steklo (ekspresna metoda),

• imobilizacijska reakcija treponeme pallidum (RIBT),
• imunofluorescenčna reakcija (RIF).

Wassermanova reakcija (RV)

Običajno se RV postavi z dvema ali tremi antigeni. Najpogosteje uporabljana sta visoko občutljivi kardiolipinski antigen (ekstrakt govejega srca, obogaten s holesterolom in lecitinom) in treponemski antigen (sonicirana suspenzija anatogeno gojene treponeme pallidum). Ti antigeni skupaj z reagini bolnikovega krvnega seruma tvorijo imunski kompleks, ki je sposoben adsorbirati in vezati komplement. Za vizualno določitev nastalega kompleksa (reagini + antigen + komplement) se kot indikator uporablja hemolitični sistem (mešanica ovčjih eritrocitov s hemolitičnim serumom). Če se v 1. fazi reakcije veže komplement (reagini + antigen + komplement), do hemolize ne pride - eritrociti se izločijo v lahko opazno oborino (PB pozitivni). Če komplement v fazi 1 ni vezan zaradi odsotnosti reaginov v testnem serumu, ga bo uporabil hemolitični sistem in prišlo bo do hemolize (PB negativno). Stopnja resnosti hemolize v nastavitvi RV je ocenjena s plusi: popolna odsotnost hemolize ++++ ali 4+ (RV ostro pozitiven); komaj začeta hemoliza +++ ali 3+ (PB pozitiven); pomembna hemoliza ++ ali 2+ (PB šibko pozitiven); nerazumljiva slika hemolize ± (DV dvomljiv); popolna hemoliza - (Wassermannova reakcija je negativna).

Poleg kvalitativne ocene RV obstaja kvantitativna formulacija z različnimi razredčinami seruma (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Titer reaginov je določen z največjo razredčitvijo, ki še vedno daje izrazito pozitiven (4+) rezultat. Pri diagnozi nekaterih je pomembna kvantitativna formulacija RV klinične oblike sifilitične okužbe, kot tudi pri spremljanju učinkovitost zdravljenja. Trenutno se Wassermanova reakcija uprizarja z dvema antigenoma (kardiolipin in treponemsko sondiran Reiterjev sev). Praviloma postane RV pozitiven v 5-6 tednih po okužbi pri 25-60% bolnikov, v 7-8 tednih - v 75-96%, v 9-19 tednih - v 100%, čeprav v Zadnja leta včasih prej ali slej. Hkrati se titer reaginov postopoma povečuje in doseže največjo vrednost (1: 160-1: 320 in več) v primeru pojava generaliziranih izpuščajev (sekundarni sveži sifilis). Ko je RV pozitiven, se postavi diagnoza primarnega seropozitivnega sifilisa.
S sekundarno svežo in sekundarno ponavljajoči se sifilis je RV pozitiven pri 100 % bolnikov, pri podhranjenih bolnikih z oslabljenim imunskim sistemom pa lahko opazimo negativen rezultat. Nato se titer reaginov postopoma zmanjšuje in pri sekundarnem ponavljajočem sifilisu običajno ne presega 1:80-1:120.
S terciarnim sifilisom RV je pozitiven pri 65-70% bolnikov in običajno opazimo nizek titer reaginov (1:20-1:40). Pri poznih oblikah sifilisa (sifilis notranjih organov, živčni sistem) pozitiven RV opazimo v 50-80% primerov. Titer reagina se giblje od 1:5 do 1:320.
S latentnim sifilisom pozitiven RV opazimo pri 100% bolnikov. Titer reagina je od 1:80 do 1:640, pri poznem latentnem sifilisu pa od 1:10 do 1:20. Hitro zmanjšanje titra reaginov (do popolne negativnosti) med zdravljenjem kaže na učinkovitost zdravljenja.

Slabosti Wassermannove reakcije- pomanjkanje občutljivosti začetni fazi primarni sifilis je negativen). Negativen je tudi pri 1/3 bolnikov, če so bili v preteklosti zdravljeni z antibiotiki, pri bolnikih s terciarnim aktivnim sifilisom s poškodbami kože in sluznic, osteoartikularnega aparata, notranjih organov, centralnega živčnega sistema, s poznim prirojenim sifilisom. .
Pomanjkanje specifičnosti- Wassermanova reakcija je lahko pozitivna pri osebah, ki še niso bile bolne in nimajo sifilisa. Zlasti lažno pozitivne (nespecifične) rezultate RV opazimo pri bolnikih, ki trpijo za sistemskim eritematoznim lupusom, gobavostjo, malarijo, malignimi novotvorbami, poškodbami jeter, obsežnimi miokardnimi infarkti in drugimi boleznimi, včasih pa pri popolnoma zdravi ljudje.
Zaznana je kratkotrajna lažno pozitivna Wassermanova reakcija pri nekaterih ženskah pred ali po porodu, pri osebah, ki zlorabljajo droge, po anesteziji, uživanju alkohola. Praviloma je lažno pozitiven RV šibko izražen, pogosto z nizkim titrom reaginov (1:5-1:20), pozitiven (3+) ali šibko pozitiven (2+). Pri množičnih seroloških preiskavah je pogostnost lažno pozitivnih rezultatov 0,1-0,15%. Za premagovanje pomanjkanja občutljivosti uporabljajo nastavitev na hladnem (Collardova reakcija) in hkrati nastavijo z drugimi serološkimi reakcijami.

Sedimentne reakcije Kahna in Sachs-Vitebskega

Reakcija imobilizacije treponeme pallidum (RIBT)

Imunofluorescenčna reakcija (RIF)

Reakcija pasivne hemaglutinacije (RPHA)

Tehnika odvzema krvi za serološke reakcije

Serološka odpornost

• Prav(absolutno, brezpogojno) - potrebno je dodatno antisifilično zdravljenje v kombinaciji z nespecifično terapijo za povečanje imunskih sil telesa.
• Sorodnik- po popolnem zdravljenju bledi treponemi tvorijo ciste ali L-oblike, ki so v telesu v nizko virulentnem stanju in posledično dodatno zdravljenje ne spremeni indikatorjev seroloških reakcij, zlasti RIF in RIBT.

Psevdo-odpor- po zdravljenju kljub pozitivnim serološkim reakcijam v telesu ni blede treponeme. V telesu ni antigena, vendar se nadaljuje proizvodnja protiteles, ki se določijo pri postavljanju seroloških reakcij.
Serološka odpornost se lahko razvije zaradi:

• neustrezno zdravljenje brez upoštevanja trajanja in stopnje bolezni;
• nezadosten odmerek in zlasti zaradi neupoštevanja telesne teže bolnikov;
• kršitve intervala med uvedbo zdravil;
• ohranitev bledih treponem v telesu kljub polnopravnemu specifično zdravljenje, zaradi njihove odpornosti na penicilin in druga kemoterapevtska zdravila ob prisotnosti skritih, encimskih lezij v notranjih organih, živčnem sistemu, bezgavkah, ki so nedostopne antibakterijska zdravila(pogosto blede treponeme najdemo v tkivih brazgotine več let po koncu terapije, v bezgavkah je včasih mogoče odkriti blede treponeme 3-5 let po antisifilični terapiji);
• zmanjšanje zaščitnih sil pri različnih boleznih in zastrupitvah (endokrinopatija, alkoholizem, odvisnost od drog itd.);
• splošna izčrpanost (pomanjkanje vitaminov, beljakovin, maščob).

• sočasne nespecifične bolezni notranjih organov, bolezni srca in ožilja, revmatizem, disfunkcije endokrinega in živčnega sistema, hude kronične dermatoze, maligne neoplazme;
• lezije živčnega sistema (hude poškodbe, pretres možganov, duševne travme);
• nosečnost kronična zastrupitev z alkoholom, nikotinskimi drogami; nalezljive bolezni(malarija, tuberkuloza, virusni hepatitis, dizenterija, tifus, tifus in povratna vročica).

Treponemalni testi za sifilis. Splošen opis.

Za zanesljivo diagnosticiranje sifilisa in odkrivanje protiteles proti sifilitu v bolnikovem telesu (v krvnem serumu oz. cerebrospinalna tekočina), uporabljajo posebne tehnologije laboratorijske raziskave- tako imenovane serološke metode.

Pri izvajanju diagnostičnih testov za sifilis se uporabljajo različne serološke reakcije: aglutinacija, precipitacija, imunofluorescenca, fiksacija komplementa, encimski imunski test itd. Vse te serološke reakcije temeljijo na interakciji antigenov in protiteles.

Imenujejo se specifični serološki testi treponema ker ti testi uporabljajo treponemo pallidum ali njene antigene, torej antigene treponemalnega izvora. Namen treponemskih testov je identificirati specifična protitelesa proti antigenskim strukturam povzročitelja sifilisa, to je protitelesa, usmerjena specifično proti sami bakteriji T. Pallidum in ne proti telesnim tkivom, ki jih poškoduje treponema. Specifična antitreponemska protitelesa razreda IgM lahko odkrijemo že ob koncu drugega tedna bolezni.

7. Lažno pozitivni in lažno negativni rezultati

Pozitiven PB test za sifilis pri ljudeh, ki nimajo te bolezni, se imenuje lažno pozitiven. Pogostost lažno pozitivnih rezultatov pri zdravih osebah je 0,2-0,25%. Če je odstotek nespecifičnih lažno pozitivnih rezultatov RV pri zdravih ljudeh zelo nizek, potem je pri nekaterih boleznih lahko visok.

Vse nespecifične rezultate seroloških reakcij lahko razdelimo v naslednje glavne skupine:

1. Bolezni, ki jih povzroča prisotnost skupnih antigenov v podobnih patogenih (spirohetah): recidivna vročina, mravljinčenje, bejel, pinta, peroralna treponema, leptospira.

2. Pozitivne reakcije zaradi sprememb v metabolizmu lipidov in sprememb serumskih globulinov. Sem sodijo pozitivni rezultati pri nosečnicah s protinom, motnjami lipidne sestave zaradi zastrupitve s svincem, fosforjem, po jemanju natrijevega salicilata, digitalisa itd. Te reakcije naj vključujejo tudi pozitivne reakcije pri nekaterih nalezljivih boleznih (tifus, malarija, pljučnica, gobavost, endokarditis, kolagenoza, miokardni infarkt, pretres možganov, onkološke bolezni ciroza jeter itd.)

3. Tehnične napake pri ravnanju. Nepravilna izbira odmerka komplementa, neupoštevanje pogojev in pogojev shranjevanja reagentov, izključitev kontrolnih vzorcev krvnega seruma iz reakcije, uporaba kontaminiranih epruvet in instrumentov.

8. Modifikacija Wassermannove reakcije

Obstajajo modifikacije Wassermanove reakcije v kvalitativni in kvantitativni različici, na mrazu, s cerebrospinalno tekočino.

Predelava avtodoma na mrazu se je izkazalo za bolj občutljivo. Značilnost metode nastavitve Wassermanove reakcije na mrazu so trifazni temperaturni režimi, pri katerih poteka vezava komplementa. To reakcijo izvajamo tudi s kardiolipinom in treponemskim antigenom.

Poleg kvalitativne ocene RW obstaja metoda za njeno kvantitativna nastavitev z različnimi razredčinami krvnega seruma (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Titer reaginov je določen z največjo razredčitvijo, ki še vedno močno daje pozitiven rezultat(4+). Kvantitativna formulacija RV je pomembna pri diagnostiki nekaterih oblik sifilisa in pri spremljanju učinkovitosti terapije.

9. Obseg

V Rusiji je RSKt del kompleksa standardnih seroloških testov za sifilis (SSR).

Uporablja se Wassermanova reakcija s treponemskim in kardiolipinskim antigenom (RSKt).

• diagnoza vseh oblik sifilisa,
• nadzor nad učinkovitostjo zdravljenja,
• pregledi oseb, ki so imele spolni stik z bolnikom s sifilisom,
• pregledi oseb s kliničnim in anamnestičnim sumom na sifilis
• med preventivnim pregledom za sifilis bolnikov v psihiatričnih in nevroloških bolnišnicah, darovalcev in nosečnic, vključno z osebami, napotenimi na umetno prekinitev nosečnosti.

Trenutno je po odredbi Ministrstva za zdravje Ruske federacije priporočljivo zamenjati RSKT z bolj občutljivimi treponemskimi metodami (ELISA ali RPHA).

V tujini se Wassermanova reakcija s treponemskim antigenom že dolgo ne uporablja v klinični laboratorijski praksi in ni vključena v seznam standardnih testov, ki jih priporoča Svetovna zdravstvena organizacija.

Kompleks klasičnih seroloških reakcij (CSR)

DAC- To reakcijski kompleks Uporablja se za serodiagnostiko sifilisa kot standardna metoda. Ta kompleks reakcij vključuje Wassermannovo reakcijo s kardiolipinskim antigenom (izvleček iz srca bika, obogaten z lecitinom in holesterolom) in treponemskim antigenom (suspenzija apatogenih kulturnih bledih treponem, obdelanih z ultrazvokom), ter reakcijo mikroprecipitacije (RMP). ) s plazmo ali inaktiviranim serumom, ki je nameščen s kardiolipinskim antigenom

CSR postane pozitiven sredi primarnega obdobja (njena delitev na seronegativne in seropozitivne je natančno določena s CSR), v sekundarnem obdobju je CSR pozitiven pri 98-100% bolnikov, v terciarnem obdobju pa le pri 60-70. %. To pomeni, da se s podaljševanjem trajanja bolezni pozitivnost CSR postopoma zmanjšuje.

Prednosti KSR:

1) Poceni, enostavnost in hitrost nastavitve. To še posebej velja za reakcijo mikroprecipitacije: RMP je trenutno glavna presejalna (presejalna) metoda;

2) Netreponemski testi so priročni za spremljanje ozdravitve sifilisa.

Slabosti CSR:

1) Subjektivnost ocene rezultatov reakcij ("na oko");

2) Nizka občutljivost pri poznih oblikah sifilisa;

3) Pomanjkanje specifičnosti v primerjavi s sodobnimi testi. Ko se izvajajo, se pogosto opazijo lažno pozitivne reakcije (LPR).

LPR je lahko posledica navzkrižne reaktivnosti med bledo spiroheto in drugimi mikrobi, motenj presnove lipidov in beljakovin, nestabilnosti celične membrane in tvorbe avtoprotiteles. LPR so opaženi pri akutnih (malarija, infekcijska mononukleoza itd.) In kroničnih (tuberkuloza, gobavost, hepatitis, borelioza itd.) Okužbah, miokardnem infarktu, cirozi jeter, kolagenozah (zlasti pri SLE), onkopatologiji, cepljenju, uživanju drog, zloraba alkohola in mastne hrane. Lažno pozitiven je lahko CSR v zadnjih tednih nosečnosti, po porodu in pri nekaterih ženskah med menstruacijo. Lažno negativni rezultati CSR so lahko povezani z okužbo s HIV.

RIT, RIBT - Imobilizacijska reakcija blede treponeme

Treponema pallidum immobilization test (TPI; Treponema pallidum imobilization test, TPI) je klasična metoda za odkrivanje specifičnih treponemskih protiteles. Reakcija RIBT uporablja kot antigen patogeno treponemo pallidum T. pallidum (sev Nichols), gojeno v kunčjih modih. RIBT temelji na izgubi mobilnosti žive blede treponeme po izpostavljenosti protitelesom iz bolnikovega krvnega seruma in komplementa. Rezultati se ovrednotijo ​​z mikroskopijo v temnem polju. Kljub temu, da je bil test RIBT uveden v klinično prakso kot specifičen test za sifilis, je zahteven, tehnično zapleten, dolgotrajen in drag za uporabo.

1. Zgodovina metode RIBT

Imobilizacijski test treponeme pallidum (TPRT) je pravzaprav prvi specifični test za diagnozo sifilisa. To reakcijo sta leta 1949 predstavila ameriška raziskovalca Nelson in Mayer (R. W. Nelson in M. M. Mayer) in podrobno obravnavana v znanstvenih člankih v naslednjih desetletjih. Neuspešni poskusi uporabe živih treponem v testih so bili narejeni že prej. Zaradi dejstva, da je Nelsonu uspelo ustvariti okolje, v katerem so treponeme ostale sposobne preživeti do 8 dni, so bile njegove raziskave okronane z uspehom.

2. Princip metode RIBT

Metoda temelji na pojavu izgube mobilnosti bledih treponem v prisotnosti imobilizirajočih antitreponemskih protiteles proučevanega krvnega seruma in komplementa v anaerobnih pogojih. Antigen je živa patogena bleda treponema, pridobljena iz kuncev, umetno okuženih s sifilisom.

3. Nastavitev testa RIBT

V reakciji sodelujejo testni serum, komplement in antigen. Krvni serum preiskovanca se doda živim treponemam, pridobljenim iz tkiv kunčjih mod po umetni okužbi. V prisotnosti anti-treponemskih protiteles-imobilizinov v serumu se bledi treponemi prenehajo premikati (imobilizirajo). Protitelesa proti imobilizinu so pozna antitreponemska protitelesa.

Reakcijo izvajamo s toplotno inaktiviranimi serumi ali z vzorci serumov, posušenih na povoščenem papirju (suhe kapljice). Inaktivacijo seruma s segrevanjem izvajamo 30 minut pri temperaturi 56°C. Pred odvzemom krvi preiskovanec ne sme dobiti zdravil, zlasti penicilinskih pripravkov. Sprejem zdravil se prekliče za čas njihove morebitne zamude v telesu.

Kot antigen se uporabljajo bakterije seva Nichols, pridobljene iz 7-10-dnevnega kunčjega sifilitičnega orhitisa (vnetje testisov). Obdobje od trenutka, ko je bila reakcija postavljena do registracije njenih rezultatov, traja 18-20 ur, zato je potrebno okolje za preživetje, da se ohrani sposobnost preživetja in dobra mobilnost mikroorganizmov.

RIBT uporablja dopolnilo morskega prašička. Za pridobitev komplementa je treba v sterilnih pogojih odvzeti kri iz več morskih prašičkov.

V primeru bakterijske kontaminacije se komplement zavrže. Ni mogoče uporabiti v reakciji imobilizacije bledo treponema ohranjen komplement, tk. je strupen za mikroorganizme.

Pri imobilizacijski reakciji se uporabi presežek komplementa. Njegova količina je v veliki meri odvisna od okolja preživetja blede treponeme.

RIBT damo v sterilne škatle, predhodno obsevane z baktericidno kvarčno svetilko 45-60 minut. Vsak krvni serum se pregleda v dveh epruvetah: izkušena in nadzor. V obe epruveti dodamo testni serum in antigen v zahtevanih količinah. V epruveto vlijemo aktivni komplement, v kontrolno epruveto pa enako količino inaktiviranega krvnega seruma morskega prašička. Po polnjenju se vsebina epruvet z rahlim stresanjem premeša.

RIBT poteka v anaerobnih pogojih. Epruvete s sestavinami postavimo v mikroanaerostat, iz katerega z vakuumsko črpalko sesamo atmosferski zrak in iz jeklenke vbrizgamo mešanico plinov (95 delov dušika in 5 delov ogljikovega dioksida). Mikroanaerostat z epruvetami postavimo v termostat (35°C) za 18-20 ur.

Vrednotenje rezultatov RIBT se izvede po odstranitvi epruvet iz termostata in mikroanaerostata (tj. po 18-20 urah izkušenj). S Pasteurjevo pipeto nanesemo kapljico vsebine epruvete na objektno stekelce, ki ga pokrijemo s pokrovom in pregledamo v temnem polju mikroskopa (objektiv 40, okular 10X). V različnih delih preparata pregledamo več vidnih polj, pri čemer v vsakem preštejemo število mobilnih in nepremičnih bledih treponem. Štetje se začne z zdravilom iz kontrole in nato iz epruvete.

Pri nastavitvi reakcije se uporablja 5 kontrolnih študij: z očitno pozitivnimi in negativnimi krvnimi serumi, z aktivnim in inaktiviranim komplementom ter medij za preživetje blede treponeme. Za presojo stopnje mobilnosti bledih treponem v tem poskusu se uporablja kontrolni negativni krvni serum. Kontrola pozitivnega krvnega seruma - za oceno stopnje imobilizacijske aktivnosti v pogojih tega poskusa. Študija aktivnega in inaktiviranega komplementa in okolja se izvaja, da se ugotovi njihov učinek na mobilnost bledih treponem.

Zaradi pomanjkanja komplementa v poskusu imobilizacijska protitelesa ne pokažejo pravilno svoje aktivnosti in treponeme ostanejo mobilne. Zato se po poskusu izvede določitev preostalega komplementa, da se oceni, ali je bila mobilnost bledih treponem v epruvetah posledica pomanjkanja komplementa. Za to se uporablja hemolitični sistem - mešanica suspenzije ovčjih eritrocitov in razredčenega hemolitičnega seruma, ki se hrani v termostatu.

Preostanek komplementa se določi z dodajanjem hemolitičnega sistema v zahtevanem volumnu v vsako epruveto. Epruvete postavimo v termostat pri 37° za 45 minut. V poskusnih epruvetah naj bi prišlo do hemolize eritrocitov, v kontrolnih epruvetah naj bi prišlo do zakasnitve hemolize. Odsotnost hemolize v epruvetah kaže na nezadostno količino komplementa, v teh primerih je treba študijo ponoviti. Ponovni pregled krvnega seruma se ne izvaja le, če se ugotovi 100-odstotna imobilizacija bledih treponem.

4. Obračunavanje rezultatov RIBT

Imobilizirane treponeme preštejemo pod mikroskopom s temnopoljsko mikroskopijo. Od raziskovalca se zahteva sposobnost ocenjevanja gibanja treponem. Pozoren mora biti na intenzivnost gibov, ki jih izvaja bleda treponema. Pri tej bakteriji ni vedno mogoče opaziti valovitih kontrakcij in upogibnih gibov, včasih le rotacijskih. Prav tako morate znati razlikovati med aktivnimi gibi treponem in gibanjem s tokom tekočine.

Za oceno rezultatov reakcije se izračuna odstotek imobilizacije bledih treponem, to je razmerje med mobilnimi in nepremičnimi treponimi v poskusu (z aktivnim komplementom) in kontrolo (z neaktivnim komplementom) po formuli:

X \u003d (M - C) × 100 / M

kjer je M število mobilnih treponem v kontroli; C - število mobilnih treponem v poskusu; X - % imobilizacija. IN praktično delo odstotek imobilizacije se določi iz predhodno sestavljene tabele z uporabo zgornje formule.

Reakcija imobilizacije blede treponeme se ocenjuje kot

• pozitivno med imobilizacijo 51 - 100% treponem,
• šibko pozitivno: 31 - 50% nepremične treponeme,
• dvomljivo: 21 - 30% nepremične treponeme,
• negativno: 0 - 20% nepremične treponeme.

Reakcija imobilizacije bledega treponema postane pozitivna ob koncu primarnega - začetku sekundarnega obdobja sifilisa (od 7-8. tedna od trenutka okužbe in več). Hkrati je RIBT malo uporaben za diagnosticiranje zgodnjih faz sifilisa, saj se protitelesa, ki imobilizirajo bledo treponemo in se določijo v reakciji, pojavijo šele 3-6 tednov po okužbi. Protitelesa-imobilizini spadajo v razred imunoglobulinov IgG. V krvi se pojavijo pozneje kot reagini (antikardiolipinska protitelesa), kasneje kot fluoresceinska protitelesa (zaznamo RIF in ELISA) in precipitine (zaznamo RMP).

V prihodnje ostaja RIBT pozitiven. Pri poznih oblikah sifilisa obstaja visoka občutljivost reakcije. Pri sekundarnem, poznem sifilisu, nevrosifilisu, prirojenem sifilisu je pozitiven rezultat RIBT zabeležen v 95-100% primerov. Pri terciarnem sifilisu, s specifičnimi poškodbami notranjih organov, živčnega sistema, ko je RV pogosto negativen, RIBT daje pozitivne rezultate v 98-100% primerov.

RIBT za dolgo časa priznan kot najbolj specifičen test za sifilis. Po literaturi je specifičnost RIBT 99 %, občutljivost se giblje od 79 do 94 %. Po TsNIKVI je občutljivost RIBT (skupaj za vse stopnje sifilisa) 87,7%.

7. Obseg metode

Področje uporabe RIBT se postopoma oži zaradi trajanja nastavitve, visokih stroškov in delovne intenzivnosti. RIBT je precej zapletena in draga analiza, ki zahteva visoko usposobljeno osebje in prisotnost vivarija. V zvezi s tem se je uporaba te metode v zadnjih letih bistveno zmanjšala. V ZDA se ta test trenutno uporablja le v raziskovalnih laboratorijih.

Glede na kompleksnost in visoke stroške RIF in RIBT jih je smiselno uporabljati za diagnozo poznih in latentnih oblik sifilisa. RIBT ohranja svoj položaj "reakcijskega razsodnika" pri diferencialni diagnozi zgodnjih latentnih oblik sifilisa in lažno pozitivnih rezultatov. Ta reakcija je lahko koristna pri diagnosticiranju nevrosifilisa in kadar so drugi serološki testi nedosledni.

RIBT postane pozitiven mnogo kasneje kot RIF in RV. Zato se ne uporablja za diagnosticiranje nalezljivih oblik sifilisa.

RIBT je tako kot RIF v procesu antisifilitične terapije zelo počasi negativen. Zaradi tega ni primeren za spremljanje napredka antisifilitičnega zdravljenja.

Lažno pozitivni rezultati (FPR) pri RIBT so redki in so opaženi predvsem pri številnih treponematozah (frambazija, pinta, bejel), ki jih v Rusiji ni, pa tudi pri gobavosti, sarkoidozi, SLE, tuberkulozi, cirozi jeter. jetra in nekatere druge. redke bolezni ne-sifilične narave. S starostjo bolnikov se povečuje število lažno pozitivnih rezultatov RIBT.

RIBT se lahko izkaže za lažno pozitivno, če testni serum vsebuje treponemicidne snovi (npr. peniciline, tetracikline, eritromicin), ki povzročijo nespecifično imobilizacijo bledih treponem.To je lahko posledica bolnika, ki jemlje treponemocidne antibiotike, zato preiskava ni izvajajo pri osebah, ki so v zadnjem mesecu prejemale antibiotike. Krv za RIBT je mogoče pregledati ne prej kot 2 tedna po koncu antibiotikov in drugih antisifilitičnih zdravil.

9. Spremembe reakcije imobilizacije bledih treponem

Poleg mikroanaerostatične tehnike obstaja melanžna nastavitev RIBT po N.M. Ovčinnikov. Anaerobne pogoje med pripravo reakcije ustvarimo tako, da reakcijsko mešanico postavimo v melanger (mešalnik levkocitov), ​​katerega oba konca zapremo z gumijastim obročem. Tehnika melange reakcije omogoča dispenziranje z vakuumsko črpalko, jeklenko z mešanico dušika in ogljikovega dioksida ter mikroanaerostatom. V primerjalni študiji na velikem kliničnem materialu so bili doseženi rezultati, ki niso slabši od klasične anaerostatske tehnike.

10. Lastnosti, prednosti in slabosti RIBT

RIBT je tehnično zapletena in draga diagnostična metoda. Tehnologija zahteva znatna sredstva za vzdrževanje kuncev in testiranje. Ta zamuden test se trenutno uporablja predvsem v znanstvene namene. V večini tujih držav se RIBT že skoraj 40 let praktično ne uporablja v diagnostične namene, ampak le v raziskovalnem delu.

Slabosti reakcije:

• RIBT zahteva delo z živo patogeno treponemo pallidum seva Nichols, ki kljub prilagoditvi na zajce ostaja kužna za ljudi
• reakcija je kompleksna, dolgotrajna in draga
• potreben je vivarij
• za postavitev reakcije, beleženje rezultatov in vzdrževanje vivarija je potrebno visoko usposobljeno osebje
• subjektivnost vrednotenja rezultatov
• pomanjkanje avtomatizacije
• te serološke metode ni mogoče standardizirati.
• reakcija ni uporabna v ozadju tekoče antisifilitične terapije
• nezmožnost uporabe za nadzor zdravljenja. RIBT pri bolnikih s sifilisom lahko ostane pozitiven več let (in celo življenje), kljub prejetemu popolnemu zdravljenju.
• reakcija lahko daje lažno pozitivne rezultate pri bolnikih z malignimi tumorji, sladkorno boleznijo, gobavostjo, avtoimunskimi boleznimi, pljučnico, hudo kardiovaskularno patologijo.

Prednosti RIBT so:

1) dovolj visoka občutljivost;

2) Visoka specifičnost.

RIF (Imunofluorescenčna reakcija)

Imunofluorescenčna reakcija (RIF) je ekspresna diagnostična metoda za odkrivanje mikrobnih antigenov ali odkrivanje protiteles. Testi, ki temeljijo na detekciji fluorescenčnega signala, veljajo za enega izmed najboljši testi za sifilis.

1. Zgodovina metode

Fluorescentno treponemsko protitelo (FTA) so leta 1957 prvič razvili Deacon in drugi (Deacon, Falcone in Harris).

2. Načelo metode

Metoda RIF temelji na dejstvu, da lahko tkivni antigeni ali mikrobi, obdelani z imunskimi serumi s protitelesi, označenimi s fluorokromi, zasijejo v UV žarkih fluorescenčnega mikroskopa. Bakterije v razmazu, obdelanem s takšnim luminiscenčnim serumom, svetijo po obodu celice v obliki zelene obrobe.

Kot antigen v RIF se uporablja suspenzija živih patogenih bledih treponem seva Nichols iz kunčjega orhitisa, ki se posuši na stekelcu in fiksira z acetonom. Pacientov krvni serum dodamo bledim treponemam, posušenim in z acetonom fiksiranim na steklo.

Po izpiranju pripravek obdelamo s serumom, ki vsebuje protitelesa proti humanim imunoglobulinom, označenim s fluoresceinom. Preparat še enkrat speremo in pogledamo pod fluorescentnim mikroskopom. Če testni serum vsebuje antitreponemska fluoresceinska protitelesa, opazimo rumeno-zelen sijaj treponem.

3. Metoda izvajanja raziskav po metodi RIF

Antigen, fiksiran na stekelcu (patogena treponema pallidum), se obdela s testnim serumom. Po pranju pripravek obdelamo s fluorescentnim antihumanim imunoglobulinskim serumom, označenim s fluorokromom. V tem primeru se nastali fluorescentni kompleks (antihumani globulin + fluorescein tioizocianat) veže na človeški globulin na površini blede treponeme, kar zagotavlja sijaj blede treponeme pod fluorescenčnim mikroskopom.

Za odkrivanje kompleksov antigen-protitelo se uporablja luminiscentni serum, ki predstavlja anti-vrstne (protičloveške) imunoglobuline, konjugirane s FITC. Prisotnost protiteles proti treponem v serumu se določi s sijajem treponem pri pregledu pod fluorescenčnim mikroskopom. Test se izvaja v kvalitativni in polkvantitativni različici.

4. Računovodstvo rezultatov

Vizualizacija rezultatov RIF se izvaja s fluorescentnim mikroskopom. Rezultati se ocenjujejo glede na stopnjo luminiscence treponem v pripravku. V prisotnosti protiteles je viden sijaj treponem, če pa v serumu ni antitreponemskih protiteles, potem treponeme niso vidne. Stopnja luminescence posušene blede treponeme, pritrjene na steklo, je označena s "plusi" (od "–" do "++++"). Negativen rezultat - brez sijaja ali ravni ozadja - 1+.

5. V katerih obdobjih bolezni je bolje uporabiti

Imunofluorescenčna reakcija (RIF) je precej občutljiva v vseh fazah okužbe, od konca inkubacijske dobe do poznega sifilisa. Primarno obdobje sifilisa v klasičnem poteku se začne 3-4 tedne po okužbi. RIF postane pozitiven v prvih dneh primarne menstruacije ali celo na koncu inkubacijska doba, od 3. tedna po okužbi. Rezultati RIF ostajajo pozitivni v vseh obdobjih, tudi v poznih oblikah.

RIF postane pozitiven nekoliko prej kot RW. Po nekaterih poročilih se pozitivni RIF pojavi pri 80% bolnikov s primarnim seronegativnim sifilisom. V sekundarnem obdobju je RIF pozitiven skoraj v 100% primerov. Pri latentnem sifilisu je vedno pozitiven, pri poznih oblikah bolezni in prirojenem sifilisu pa daje 95-100% pozitivne rezultate.

6. Občutljivost in specifičnost

Imunofluorescenčna reakcija (RIF) je skupina metod z visoko občutljivostjo in specifičnostjo. RIF je občutljiv na vseh stopnjah okužbe, od obdobja inkubacije do poznega sifilisa. Po podatkih WHO je občutljivost RIF pri primarnem sifilisu 70-100%, pri sekundarnem in poznem sifilisu - 96-100%, specifičnost - 94-100%. Po TsNIKVI je občutljivost RIF pri vseh oblikah sifilisa 99,1%.

Specifičnost RIF lahko povečamo s predhodno obdelavo testnega seruma s sorbentom - ultrazvočnim treponemskim antigenom, ki veže skupinska protitelesa (RIF-abs).

7. Obseg metode

RIF velja:

• kot potrditvena reakcija pri zgodnjem latentnem sifilisu
• za retrospektivno diagnozo
• za razlikovanje latentnih oblik sifilisa in lažno pozitivnih rezultatov raziskav na sifilis.
• kot potrditveni test za nevrosifilis.

RIF se pogosto uporablja kot potrditveni test, vendar ni namenjen rutinski uporabi ali presejanju, ker ga je tehnično težko nastaviti. Za izvedbo RIF je potreben vivarij ali nakup suspenzije patogenih bledih treponem, kar omejuje možnost reakcije. Vendar pa so se v zadnjih letih na domačem trgu začeli pojavljati testni sistemi, ki omogočajo izvedbo reakcije v odsotnosti vivarija in lastnega laboratorijskega seva patogene treponeme pallidum.

8. Viri in vzroki uprizoritvenih napak, lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov

LPR pri nastavitvi RIF so redki (s kolagenozami, boreliozo).

RIF še vedno velja za enega najboljših testov za sifilis, "zlati standard" serodiagnostike. RIF je v primerjavi z RIBT lažji za nastavitev,

Kljub visoki diagnostični vrednosti, potrebi po uporabi žive T. pallidum, visoki stroški in trajanje študije ovirajo široko uvedbo RIF v vsakodnevno prakso. Nastavitev reakcije je težavna. Poleg tega je ocena rezultatov RIF subjektivna.

Prednosti RIF in RIBT sta:

1) Visoka občutljivost (zlasti za RIF);

2) Visoka specifičnost (zlasti za RIBT).

Slabosti RIF in RIBT:

1) Tehnična zapletenost, visoki stroški metod.

2) Subjektivna ocena rezultatov, pomanjkanje avtomatizacije;

3) RIF in RIBT pri bolnikih s sifilisom lahko ostanejo pozitivni več let (in celo življenje), kljub prejetemu popolnemu zdravljenju. Zato teh reakcij ni mogoče uporabiti za nadzor ozdravitve.

10. Spremembe metode

V praksi se za serodiagnozo sifilisa uporablja in uporablja več modifikacij imunofluorescenčne reakcije:

• RIF-abs- najbolj občutljiva metoda serodiagnostike sifilisa, postane pozitivna prej kot druge reakcije (od 3. tedna po okužbi);
• RIF-200(pacientov serum ob dajanju razredčimo 200-krat) je zelo specifična metoda za serodiagnostiko sifilisa.
• RIF-10(10-kratna razredčitev testnega seruma) - bolj občutljiva metoda kot RIF-200.
• RIF-c izvajajo z alkoholom.
• RIF-abs-IgM- odkrivanje zgodnjih antitreponemskih protiteles razreda IgM.

1. Najbolj razširjena sprememba RIF-abs- imunofluorescenčna reakcija z absorpcijo. Preden postavimo reakcijo, se serum subjekta osiromaši z mešanico nepatogenih treponem, da se izključijo navzkrižne reakcije. Skupinska protitelesa se odstranijo iz preučevanega seruma z ultrazvočno uničenimi kulturami treponem, kar bistveno poveča specifičnost reakcije. Ker se testni serum uporablja v razredčini 1:5, je RIF-abs zelo občutljiv.

Glavne indikacije za uporabo RIF-abs v klinični praksi so:

• diagnoza latentnih in poznih oblik sifilisa,
• odkrivanje lažno pozitivnih rezultatov CSR in RMP, zlasti pri nosečnicah in somatskih bolnikih s sumom na sifilis,
• za postavitev retrospektivne diagnoze bolezni.

RIF-abs ni zelo informativen pri ocenjevanju rezultatov zdravljenja: pri 85% bolnikov, ki so prejeli ustrezno antisifilično terapijo, pozitivni rezultati RIF trajajo več let.

Ta reakcija se imenuje "zlati standard" za serodiagnozo sifilisa. Uporablja se za arbitražne primere, vendar je za zanesljiv rezultat potrebna sveža koncentrirana suspenzija T. pallidum seva Nichols iz 7 dni starega orhitisa pri kuncu, ki je ne smemo zamrzniti.

2. V ZSSR je bil nameščen v dveh različicah - RIF-10 in RIF-200, to je z razredčitvijo testnega seruma za 10- in 200-krat. RIF-200 - testni serum je razredčen 200-krat, da se zmanjša število lažno pozitivnih rezultatov. To zagotavlja visoko specifičnost reakcije, vendar se njena občutljivost nekoliko zmanjša. RIF-10 je bolj občutljiv, vendar pogosteje daje nespecifične pozitivne rezultate kot RIF-200, za katerega je značilna visoka specifičnost. RIF-10 je bolj občutljiv, RIF-200 in RIF-abs pa sta bolj specifična.

Občutljivost RIF-200 in RIF-abs je ocenjena na 84–99 %, specifičnost pa 97–99 %.

3. RIF-c izvajajo z alkoholom. Reakcija se nastavi z uporabo cele cerebrospinalne tekočine za identifikacijo specifičnih lezij CNS.

4. Reakcija RIF-abs-IgM predlagan za odkrivanje zgodnjih antitreponemskih protiteles razreda IgM. To reakcijo lahko uporabimo za diagnosticiranje prirojenega sifilisa, zgodnjih oblik sifilisa in diferencialna diagnoza primeri ponovne okužbe in serorelapsa.

Znani sta dve modifikaciji te reakcije:

– FTA-ABS-IgM, ki temelji na uporabi konjugata anti-IgM (s fluoresceinom označena protitelesa proti humanim IgM) v drugi fazi reakcije namesto antihumanega fluorescentnega globulina;

- ruska različica RIF-abs-IgM, označena s tem, da se testiranemu krvnemu serumu doda sorbent, ki odstrani protitelesa IgG, RIF-abs pa se namesti s preostalimi protitelesi IgM.

Glavne indikacije za formulacijo RIF-abs-IgM so:

- serodiagnoza prirojenega sifilisa v odsotnosti očitnih manifestacij prirojenega sifilisa na koži in sluznicah pri otroku;

- diferencialna diagnoza ponovne okužbe in klinično-serološkega ali serološkega ponovitve sifilisa, pri kateri bo RIF-abs-IgM negativen in RIF-abs - pozitiven;

- ocena učinkovitosti zdravljenja zgodnje pridobljenega ali prirojenega sifilisa: po ustreznem zdravljenju postane RIF-abs-IgM negativen v naslednjih 3-6 mesecih.

To reakcijo lahko uporabimo za odkrivanje prirojenega sifilisa. Znano je, da velike molekule IgM ne morejo skozi zdravo placento. Zato se lahko protitelesa razreda M proti treponemi pallidum pojavijo v otrokovem telesu zaradi kršitve pregradne funkcije posteljice ali pa jih proizvaja telo otroka s sifilisom. Protitelesa razreda IgM se v krvi bolnika s sifilisom pojavijo že v prvih tednih bolezni, protitelesa razreda IgG pa kasneje. Ločeno določanje protiteles obeh razredov je izjemno koristno pri diagnozi prirojenega sifilisa pri otrocih, saj bo prisotnost protiteles razreda IgM pri otroku v prvem mesecu življenja pokazala, da jih tvori telo otroka s sifilisom, samo med odkrivanjem protitelesa IgG bo govoril o materinem izvoru slednjega.

Izjava o reakciji 19S(IgM)-RIF-abs vključuje predhodno ločevanje z gelsko filtracijo večjih molekul 19S IgM iz

frakcije manjših molekul 7S IgG. Nadaljnja študija reakcije RIF-abs krvnega seruma, ki vsebuje samo frakcijo 19S IgM,

odpravlja vse možne vire napak. Toda tehnika nastavitve te reakcije je zapletena in dolgotrajna, zahteva posebno opremo in usposabljanje strokovnjakov.

Imunska adhezijska reakcija (RIP, TPIA - Treponema pallida immunoadherence).

Ta reakcija temelji na uporabi pojava, ki ga je leta 1912 opisal Rieckenberg. RIP temelji na dejstvu, da se virulentne tkivne treponeme, senzibilizirane s serumom bolnika s sifilisom, prilepijo na površino eritrocitov v prisotnosti komplementa in eritrocitov in se med centrifugiranjem odnesejo z njimi v usedlino in izginejo iz supernatant.

Za postavitev reakcije uporabimo naslednje sestavine: testni serum, antigen, komplement, donorske eritrocite, izotonično raztopino natrijevega klorida. Kot antigen se uporablja suspenzija blede treponeme seva Nichols.

Najbolj široko v zvezi s serodiagnozo sifilisa so ta test preučevali domači in tuji avtorji v 50-60-ih letih. Podatki o vrednosti RIP kot diagnostičnega testa so si nasprotujoči. Reakcija je zahtevala največjo natančnost, saj so bili z netočnim vlivanjem sestavin, s presežkom ali pomanjkanjem preskusnega materiala v pripravku pridobljeni nezanesljivi rezultati.

V Rusiji je obsežno raziskavo izvedel L.V. Sazonova, ki je podobne rezultate dosegla pri RIP in RIT z uporabo sveže pripravljene suspenzije patogenih bledih treponem seva Nichols. Vendar pa je uporaba antigena, segretega ali konzerviranega s fenolom, močno popačila rezultate reakcije in naredila antigen nestabilen. Priporočite ta test za zamenjavo RIT L.V. Sazonova je menila, da je to nemogoče.

G.P. Avdeeva je z uporabo drugih temperaturnih in časovnih režimov pri pripravi antigena dobila drugačne rezultate pri študiji RIP. Po njenem mnenju je občutljivost te reakcije višja od občutljivosti KCP in RIT, vendar nekoliko slabša od RIF, specifičnost RIP, RIT in RIF pa je blizu.

Vendar pomanjkanje proizvodnje antigena za RIP ni omogočilo širše študije tega testa in njegove uvedbe v prakso.

RPHA reakcija pasivne hemaglutinacije

Reakcija pasivna hemaglutinacija(RPGA) je pogost serološki test, ki je trdno zakoreninjen v laboratorijski praksi. ima dokaj visoko stopnjo učinkovitosti v študiji.

1. Zgodovina metode RPGA

G.Blumental in W.Bachman (1932) sta prvič poročala o uporabi RPHA za diagnozo sifilisa. Leta 1965 je bila za diagnozo sifilisa predlagana posredna ali pasivna reakcija hemaglutinacije. O modifikaciji reakcije z uporabo različnih antigenov je poročal T. Ratlev v letih 1965 - 1967. Mikromodifikacijo RPGA je predlagal Sokh R.M. in soavtorji 1969. Prvi komercialni testni sistem so razvili japonski znanstveniki Tomisava et. al. leta 1969

2. Princip metode RPGA

Iz pripravljene homogene suspenzije eritrocitov, »nabitih« z antigeni, se ob dodajanju testnega seruma, ki vsebuje protitelesa, izloči oborina v obliki kosmičev. Nastala oborina je sestavljena iz eritrocitov, "zlepljenih" s protitelesi, in se imenuje "hemaglutinirati". Suspenzijo eritrocitov pripravimo vnaprej in jo dobimo kot del diagnostičnih testnih sistemov.

Proces lepljenja rdečih krvničk, na površini katerih so prisotni antigeni, se imenuje "hemaglutinacija". Vezava nastane pod delovanjem specifičnih protiteles (aglutininov). Reakcija se imenuje "pasivno", Ker lastni antigeni eritrocitov ne reagirajo, sami eritrociti pa opravljajo izključno pomožno indikatorsko funkcijo.

Pasivna (posredna) hemaglutinacijska reakcija je vrsta aglutinacijske reakcije, pri kateri se kot nosilci antigenov uporabljajo eritrociti (iz grške háima - kri) in ne drugi delci. Na splošno velja, da se pri reakciji aglutinacije pod delovanjem protiteles mikrobi ali druge celice zlepijo in precipitirajo - ne nujno eritrociti, ampak na primer delci lateksa, bakterije ali drugi korpuskularni delci, ki nosijo antigen.

Pri reakciji pasivne hemaglutinacije za diagnozo sifilisa se kot antigen uporabljajo ovnovi ali ptičji eritrociti, prevlečeni z antigeni bledih treponem. Ob dodajanju seruma, ki vsebuje specifična protitelesa, se eritrociti zlepijo (aglutinacija).

Reakcija RPHA se imenuje imunološke metode, ker. temelji na specifični interakciji antigena patogene treponeme pallidum s protitelesom. V skladu s "mrežno teorijo" je aglutinacija posledica "navzkrižnega povezovanja" površinskih molekul antigena z molekulami protiteles (imunoglobulini).

3. Izjava o reakciji pasivne hemaglutinacije

RPHA se nahaja v plastičnih tabletah ali v epruvetah z razredčinami bolnikovega krvnega seruma, ki jim je dodan eritrocitni diagnostik.

Postopek spajanja antigena z eritrociti imenujemo senzibilizacija, tako dobljeni umetni korpuskularni antigen pa senzibilizirani eritrociti. Eritrocitni diagnostiki se imenujejo eritrociti, senzibilizirani z antigenom.

Za pripravo diagnostikuma uporabimo najprej s formalinom in nato s taninom obdelane ovnove ali ptičje eritrocite (navadno kokošje), ki jih senzibiliziramo z ultrazvočnim antigenom patogene treponeme pallidum (sev Nichols) ali rekombinantnimi proteini treponema pallidum (TpN15, TpN17, TpN47). Uporabimo lahko tudi ovčje eritrocite, senzibilizirane z ultrazvočnim antigenom gojene treponeme pallidum.

Samo serum (ne uporabljajte plazme). Hemolizirani in motni vzorci niso primerni. Nesenzibilizirani eritrociti služijo kot negativna kontrola (za izključitev prisotnosti antieritrocitnih protiteles). V vsaki seriji produkcij uporabite pozitivne in negativne kontrole.

V vdolbinice (celice) imunološke tablete se vnesejo vzorci preiskovanega krvnega seruma in testnih eritrocitov. Če pacientov krvni serum vsebuje specifična antitreponemska protitelesa, se ob dodajanju testnega seruma v jamico z antigenom tvorijo kompleksi antigen-protitelo, ki so povezani s površino nosilcev (eritrocitov). Vizualno se to kaže z lepljenjem rdečih krvničk, to je hemaglutinacijo, ki je vidna s prostim očesom. Imunski kompleksi "protitelo-antigen-eritrocit", ki se pod vplivom gravitacije postopoma spuščajo navzdol, se porazdelijo po celotni površini dna jamice in tvorijo značilno sliko "obrnjenega dežnika".

Odvisno od količine protiteles v testnem vzorcu se slika "obrnjenega dežnika" spreminja od največje, ki zavzema celotno površino dna vdolbinice, do majhnega območja v njegovem osrednjem, najnižjem delu (z osvetlitvijo v središče in tvorba intenzivnejšega obroča usedlih eritrocitov po periferiji).

Imunski kompleksi ne nastanejo, če v vzorcu ni specifičnih protiteles ali ko reakciji dodamo kontrolne (intaktne) eritrocite. Istočasno se eritrociti postopoma zbirajo na najnižji točki dna vdolbinice in tvorijo figuro v obliki kompaktne točke ali "gumba", včasih z rahlim razsvetljenjem v sredini.

Če človeški krvni serum vsebuje protitelesa proti eritrocitom, potem bo "dežnik" nastal v vsakem primeru - tako v reakciji s testnimi eritrociti kot s kontrolnimi eritrociti. V tem primeru se priporočajo druge medicinske tehnologije za odkrivanje specifičnih antitreponemalnih protiteles.

Možen je fenomen prozona (nezmožnost reakcije zaradi presežka protiteles), ki ga odpravimo z redčenjem seruma.

4. Upoštevanje rezultatov reakcije pasivne hemaglutinacije

Rezultati RPGA se vizualno upoštevajo po 60-120 minutah pri nastavitvi mikrometode in po 2-4 urah ali naslednji dan pri nastavitvi makrovariante. Pri uporabi večjih (jedrnih) ptičjih eritrocitov dobimo jasnejšo sliko, rezultate pa zabeležimo prej.

Možno je določiti titer (visok titer TPHA ≥ 1:2 560).

Rezultati študije so ovrednoteni po sistemu 4+ (od "-" do "++++") glede na velikost oblikovanega filma. Ko pride do aglutinacije, se eritrociti nahajajo na površini vdolbinice v obliki "dežnika", z negativnim rezultatom pa eritrociti prosto zdrsnejo navzdol in se kopičijo na dnu v središču vdolbinice v obliki "gumba". ".

Splošno sprejeta ocena rezultatov RPGA:

4+ - pozitiven RPHA. Aglutinirani eritrociti v obliki "dežnika" enakomerno poravnajo celotno površino luknje;

3+ - pozitiven RPHA. Eritrociti obložijo celotno površino luknje, vendar nekateri od njih "zdrsnejo" v sredino. Hkrati se na obodu nanosa oblikuje opazen obroč;

2+ - šibko pozitiven RPHA. Eritrociti tvorijo film na majhnem območju spodnjega dela vdolbinice, ki tvori gost obroč eritrocitnega sedimenta z opaznim razsvetljenjem v sredini;

1+ - nedoločen RPHA, eritrociti tvorijo ohlapno usedlino na dnu jamice z mehkimi robovi in ​​rahlim lumnom v sredini;

(–) - negativen RPHA, vsi eritrociti ležijo na dnu vdolbinice v obliki kompaktne usedline ("gumbi" ali obročki) na čistem okoliškem ozadju (brez okoliške zrnate sedimentacije).

V tuji praksi se rezultati RPGA ocenjujejo tudi kot reaktivni (v primeru tvorbe aglutinata), šibko reaktivni (če so tvorbe nepomembne) in nereaktivni (če ni opaziti aglutinacije).

Obračunavanje rezultatov reakcije se lahko izvede samodejno z uporabo posebnih analizatorjev. Vsi testni sistemi poleg kvalitativne študije omogočajo kvantitativno analizo z določanjem titra.

5. V katerih obdobjih bolezni je bolje uporabiti RPHA

RPHA postane pozitiven sredi primarnega obdobja (7-8 tednov od trenutka okužbe, 3-4 tedne po pojavu trdega šankra) in ostane pozitiven še leta po zdravljenju.

Z zelo visoko vsebnostjo protiteles proti treponemi v preučevanem serumu (kar je najbolj značilno za sekundarni sifilis) je možen lažno negativen rezultat TPHA (tako imenovani "prozonski" pojav).

Specifična aglutininska protitelesa se odkrijejo v krvi ljudi, ki imajo dolgo časa sifilis, zato RPGA ni mogoče priporočiti za diferencialno diagnozo ponovne okužbe ali za določanje resnosti infekcijskega procesa.

RPGA se ne uporablja za nadzor zdravljenja, ker. lahko ostanejo pozitivni še mnogo let po okrevanju. Hkrati se lahko uporablja kot dodatna (k RMP ali RPR) metoda pri spremljanju učinkovitosti zdravljenja, raziskovanje dinamike zmanjševanja titra protiteles. Predpogoj za to je uporaba istega testnega sistema RPGA kot pri prvem (pred zdravljenjem) pregledu bolnika, kot tudi študija v istem laboratoriju.

6. Občutljivost in specifičnost RPHA

RPHA velja za zelo občutljiv in specifičen test. Ta reakcija je dragocen diagnostični test pri vseh oblikah sifilisa, še posebej občutljiva pa je pri napredovalih oblikah bolezni. Občutljivost RPHA se razlikuje glede na stopnjo bolezni. Pri primarnem sifilisu je občutljivost RPHA 76% (in več), pri sekundarnem sifilisu - do 100%. Z latentnim zgodnjim - 97%, s poznim sifilisom - 94%, s specifičnostjo 98-100%. Manjša občutljivost pri svežih oblikah bolezni je posledica poznejšega nastanka aglutininov.

Po podatkih državne ustanove "TsNIKVI Roszdrav" je občutljivost RPHA pri diagnozi različne oblike sifilis je bil 99,4 %. Večina raziskovalcev ugotavlja 98-99% specifičnost RPHA.

Po občutljivosti in specifičnosti RPHA ni slabša, pri poznih oblikah in kongenitalnem sifilisu pa celo prekaša RIF in RIBT.

7. Področje uporabe metode RPGA

TPHA se lahko uporablja kot presejalni in potrditveni test; se lahko uporablja v polkvantitativni različici z izračunom titra protiteles. Razvita je bila kvantitativna metoda za postavitev RPHA, mikrometoda, pa tudi avtomatizirana reakcija mikrohemaglutinacije.

8. Lastnosti, prednosti in slabosti RPGA

Glede na literaturo je RPGA dosledno prevzela vodilno mesto v klinični praksi v večini držav sveta. TPHA je najpogosteje uporabljen test na klinikah za spolno prenosljive bolezni v tujini.

Tehnika RPGA je enostavna za izvedbo, ne zahteva posebne opreme: za postavitev je potrebna le hemaglutinacijska plošča. Študija ne traja dolgo; reakcija je zelo občutljiva in specifična. Preverjanje metode v klinični praksi je pokazalo, da je izjemno enostavna, poceni in občutljiva. Tako kot ELISA je tudi RPHA enostavna za izvedbo, ne zahteva visoko usposobljenega osebja in posebne opreme, možna je tudi avtomatizacija.

Prednosti testa RPGA:

• enostaven za postavitev in interpretacijo,
• ne zahteva posebne opreme,
• čas za pridobitev rezultata - 45 minut,
• primeren za množično presejanje (potrebnih je le 25 µl seruma v razredčitvi 1:20),
• visoka stopnja standardizacije,
• prisotnost notranjih kontrol,
• dolg rok trajanja
• sprejemljiva cena
• možnost avtomatizacije računovodstva.

Opozoriti je treba tudi na slabosti RPGA:

• možnost nespecifičnih reakcij v prisotnosti protiteles proti eritrocitom,
• ni korelacije med titrom in faze sifilisa,
• kasnejša pozitivna reakcija v zgodnjih fazah sifilisa,
• možnost lažno pozitivnih reakcij pri osebah, ki so uživale alkohol, odvisnikih od drog,
• občutljivost na vibracije in temperaturo v laboratoriju.

Prednosti RPGA v primerjavi z RIBT in RIF so:

• uporaba industrijskih testnih sistemov,
• možnost avtomatizacije reakcije,
• ni potrebe po delu z živo bledo treponemo,
• odpravlja potrebo po vivariju.

9. Viri in vzroki napak pri nastavitvi RPHA, lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov

Reakcija pasivne hemaglutinacije je razmeroma preprosta študija; pri izvajanju je potrebno upoštevati vsa priporočila proizvajalcev diagnostikumov in pravila dela v kliničnem diagnostičnem laboratoriju. Napake lahko povzročijo pojav in registracijo tako lažno negativnih kot lažno pozitivnih rezultatov reakcije. Lažno pozitivni rezultati RPGA so lahko posledica vpliva človeškega faktorja in bioloških dejavnikov.

Dobimo lahko lažno pozitivne rezultate

• pri študiji krvnih serumov bolnikov z ne-veneričnimi treponematozami,
• zaradi revmatoidnega faktorja
• zaradi navzkrižne reakcije protiteles s treponemskim antigenom, ki nastanejo ob različnih sistemskih ali z zdravili in z zdravili povzročenih presnovnih motnjah,
• zaradi nenormalnih ravni imunoglobulinov;
• pri novorojenčkih - zaradi tvorbe v telesu ploda ali otroka protiteles IgM proti materinemu IgG, kar otežuje razlago rezultatov in diagnozo prirojenega sifilisa.

Napake, ki jih povzroča vpliv dejavnika človeške udeležbe na študijo:

• kontaminirane mikroplošče
• nepravilno pipetiranje
• vibracije v laboratoriju
• temperatura zraka v laboratoriju je izven temperaturnega območja: 18–25 stopinj

Najbolj značilne tehnične napake pri nastavitvi RPGA, ki vodijo do nezanesljivih rezultatov, vključujejo:

• nepravilno redčenje sestavin,
• kršitev temperature,
• kršitev časa inkubacije reagentov,
• kršitev pogojev nanašanja reagentov na tableto,
• neskladnost pH raztopin z zahtevanimi,
• kontaminacija laboratorijske steklene posode.

Vir napak pri nastavitvi RPGA so lahko tudi naslednje tehnične točke:

• izključitev iz formulacije reakcije kontrolnih krvnih serumov;
• neenakomerna koncentracija eritrocitov v diagnostikumu zaradi nezadostnega mešanja pred uporabo;
• kršitev pogojev shranjevanja diagnostičnih in kontrolnih eritrocitov; uporaba potečenih kompletov;
• uporaba kontaminiranih epruvet, konic pipet, pipet, imunoloških ploščic, raztopin pri postavljanju reakcij;
• netočnosti pri začetni razredčitvi vzorca krvnega seruma;
• nezadostna temeljitost pri izvajanju zaporednih dvojnih razredčitev;
• neupoštevanje temperaturnega režima in časa inkubacije;
• prisotnost tujih vibracij in tresenje imunološke plošče med inkubacijo;
• kršitev metode določanja RPGA, izražena v zavrnitvi izvedbe študije s kontrolnimi eritrociti.

Uporaba krvne plazme, ki vsebuje antikoagulante, ki lahko povzročijo nespecifično aglutinacijo eritrocitov (RPHA), lahko povzroči rezultate, ki jih ni mogoče interpretirati.

Število lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov je manjše kot pri drugih seroloških testih. LPR v okviru RPHA so redke in možne pri treponematozah (frambazija, bejel, pinta). Zabeleženi so bili tudi lažno pozitivni rezultati (skupaj manj kot 1%) pri odvisnikih od drog, pri bolnikih z infekcijsko mononukleozo, boreliozo, gobavostjo, s kolagenozami, cirozo jeter, limfosarkomom in tudi pri nosečnicah.

Lažno negativni rezultati reakcije so lahko posledica tekmovanja med protitelesi IgM in IgG. Lažno negativni rezultati so možni tudi pri bolnikih, okuženih s HIV.

10. Modifikacije metode RPHA

Obstajajo mikro in makro modifikacije nastavitve RPGA, prva se pogosteje uporablja zaradi ekonomičnosti, hitrosti nastavitve in upoštevanja rezultatov.

Poleg tega je bil razvit avtomatski diagnostični kompleks za analizo slike, ki je omogočil kvantitativno avtomatsko oceno rezultatov in odpravo subjektivnosti pri interpretaciji dobljenih podatkov. Strojno-programski kompleks prepozna sliko, obdela podatke in poda odgovor v relativnih enotah.

Za avtomatsko beleženje rezultatov RPGA se uporabljajo tudi čitalci in avtomatski analizatorji.

TPPA (Treponema pallidum particle agglutination) - aglutinacijski test umetnih delcev za odkrivanje protiteles proti Treponema pallidum

Kratek opis testa TPPA

Trenutno se za diagnosticiranje sifilisa uporablja tudi modifikacija metode pasivne hemaglutinacije - TPRA (aglutinacija delcev Treponema pallidum), pri kateri je antigen blede treponeme fiksiran na delce želatine. Ker umetni polimerni delci nimajo lastnih antigenov, ki določajo biološko aktivnost, imajo kompleti za serodiagnostiko sifilisa, ki temeljijo na njih, razlog, da veljajo za naprednejše. Uporaba biološko inertnih umetnih delcev zmanjša nespecifično aglutinacijo, ki je običajno opažena pri drugih nosilcih.

TPPA se uporablja za serološko diagnozo protiteles proti različne vrste in podvrste patogenih treponem. S tem testom je mogoče odkriti protitelesa proti povzročiteljem sifilisa, pinta, bejela in frambezije.

Postopek študije je zelo preprost in ne zahteva posebne opreme - uporabljajo se standardne mikroplošče v obliki črke "U". Test temelji na aglutinaciji delcev želatine, senzibiliziranih z antigeni T. pallidum, protitelesi, ki jih najdemo v bolnikovem krvnem serumu.

TPPA je potrditveni treponemski test, ki se lahko priročno uporablja tako za majhno število vzorcev kot za množično presejanje. TPPA se v tujini uporablja kot potrditveni test in nadomešča mikrohemaglutinacijski test MHA-TP (microhemagglutination assay for antibodies to T. pallidum).

Občutljivost TPPA testa je med 85 % in 100 %, specifičnost pa med 98 % in 100 %. Občutljivost TPPA za primarni sifilis je 88 %, za sekundarni in pozni latentni sifilis 98 %-100 %.

Če se TPPA uporablja za diagnosticiranje sifilisa, lahko protitelesa proti drugim vrstam treponem (kot so T. pallidum endemicum, pertenue ali carateum) povzročijo lažno pozitivne rezultate. Obstaja več metod za odstranitev teh protiteles iz vzorcev seruma pred začetkom testa.

Načelo testa TPPA

TPPA je metoda pasivna aglutinacija delci želatine v človeškem serumu ali plazmi. Serum, ki vsebuje protitelesa proti patogeni treponemi, reagira z delci želatine, senzibiliziranimi z antigenom bledega treponema seva Nichols, izpostavljenega ultrazvoku. Kot rezultat reakcije se v vdolbinici mikrotitrske plošče oblikuje gladek film aglutiniranih delcev želatine.

Če protiteles ni, se delci usedejo na dno jamice plošče in tvorijo kompakten "gumb" neaglutiniranih delcev. Kontrolne vdolbinice z nesenzibiliziranimi delci želatine morajo prav tako pokazati tako kompakten "gumb" za vsak serum, tj. brez aglutinacije.

Uporaba testa TPPA

TPRA je univerzalni test, ki se lahko enako uspešno uporablja tako pri obveznem preventivnem pregledu populacijskih skupin za sifilis (presejanje) kot v specializiranih dermatoveneroloških ustanovah. Prednost TPPA testa je njegova visoka občutljivost, ki ni slabša od klasičnih testov, ki so bili do nedavnega »zlati standard« za serodiagnostiko sifilisa. Druge prednosti testa so visoka ponovljivost, pa tudi enostavnost in hitrost nastavitve reakcije.

Test TPPA se uporablja za potrditev pozitivnih rezultatov netreponemskih presejalnih testov za sifilis, kot je test VDRL, in za oceno bolnikov z negativnimi netreponemskimi testi, vendar imajo znake ali simptome, ki kažejo na pozni sifilis. Uporaba TPPA kot edinega presejalnega testa za sifilis ni priporočljiva.

Poleg tega se lahko aglutinacijski test TPPA uporablja za pregled vzorcev cerebrospinalne tekočine pri diagnozi nevrosifilisa. V tem primeru, tako kot pri drugih seroloških testih, je treba interpretacijo rezultatov opraviti z obvezno kombinacijo z drugimi indikatorji in simptomi bolezni.

Rezultati testa TPPA

Rezultat se ocenjuje po sistemu "plusov" - od (-) do (2+). Rezultati testa so vidni s prostim očesom in se razlagajo na naslednji način:

Rezultati se zabeležijo, da se ugotovi skladnost z zgornjim opisom. Vzorce, ki kažejo nedoločen rezultat (±), je treba ponovno testirati. V primeru, da vzorec pri več testih TPPA pokaže nedoločen rezultat, je priporočljivo izvesti študijo z drugimi metodami.

Rezultatov analize ne bi smeli obravnavati ločeno. Na primer, v zgodnji fazi okužbe je število protiteles še vedno premajhno, zaradi česar TPPA in številne druge metode niso občutljive. Zato je treba v primeru suma na sifilis, tudi če so rezultati testa negativni, vzorce ponovno pregledati. Za postavitev diagnoze je treba upoštevati klinični simptomi bolniku na voljo, klinična anamneza in drugi podatki.

Tako kot pri testu TPHA lahko tudi pri TPPA opazimo pojav prozona in lažno negativen rezultat, če vzorec seruma vsebuje previsok titer protiteles.

ELISA - ELISA

Encimski imunski test (ELISA; Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) je ena od mnogih metod serološke diagnoze. nalezljive bolezni. Encimski imunski test (ELISA) v serodiagnostiki sifilisa je test za protitelesa razredov M, G in A (IgM, IgG, IgA) proti antigenom blede treponeme. Možno je opraviti ELISA s cerebrospinalno tekočino.

Uvedba encimskega imunskega testa (ELISA) v prakso namesto Wassermanove reakcije in drugih kardiolipinskih testov je bistveno izboljšala kakovost laboratorijske diagnostike sifilisa. Bistvena prednost te metode je možnost avtomatizacije raziskovalnega procesa, kar zmanjša vpliv človeškega faktorja.

1. Zgodovina metode ELISA

Osnovne principe encimskega imunskega testa na površini trdnofaznega nosilca so razvili E. Engvar et al. (1971), B.Van Weeman in A.Schuurs (1971). Encimski imunski test, ki so ga razvili, sta leta 1975 za diagnozo sifilisa prvič predlagala J. Veldkamp in A. Visser, ki sta cenila potencial tega avtomatiziranega testa. ELISA se je začela široko uporabljati pri diagnostiki sifilisa v osemdesetih letih prejšnjega stoletja, ko so bili razviti in certificirani diagnostični testi ter standardizirane metode testiranja. V ZSSR so tehniko ELISA za diagnozo sifilisa razvili V. N. Bednova, A. V. Babiy in A. V. Kotrovsky (1982, 1983).

2. Princip metode ELISA

Encimski imunosorbentni test (ELISA) je glede na reakcijski mehanizem blizu RIF (zaznajo se enaka protitelesa). Reakcija encimskega imunskega testa je razvrščena kot imunološka reakcija, ki temelji na visoko specifični interakciji antigenov treponema pallidum s protitelesi bolnika s sifilisom.

V sifilidološki praksi se uporablja predvsem posredna različica ELISA. Načelo najpogosteje uporabljene različice posredne reakcije je naslednje. Na površini vdolbinic polistirenske plošče so fiksirani imunski kompleksi, ki nastanejo med interakcijo protiteles bolnika s sifilisom z antigeni blede treponeme. Nato jih zaznamo v barvni reakciji z uporabo specifičnih konjugatov in ustreznih substratno-kromogenih dodatkov.

Postopek izvajanja testa je sledeč: bolnikov serum položimo na trdnofazni nosilec, na katerega je pritrjen antigen. Ob prisotnosti protiteles v njem se na površini nosilca tvori kompleks antigen-protitelo. Za "manifestacijo" rezultatov reakcije se uporabljajo protivrstna protitelesa proti humanemu Ig, konjugirana z encimskimi markerji. Kdaj pozitivna reakcija encim, vezan na kompleks antigen-protitelo, razgrajuje sistemu dodan substrat, kar ima za posledico razvoj barvnega obarvanja različne intenzivnosti.

Pri reakciji določanje kompleksa AG in AT, adsorbiranega na trdni fazi, poteka z uporabo antiglobulinskih protiteles, označenih z encimom, glede na barvno reakcijo encima s substratom.

Pri reakciji se določitev kompleksa antigenov in protiteles, adsorbiranih na trdni fazi, izvaja z uporabo encimsko označenih antiglobulinskih protiteles.

ELISA predstavlja možnost odkrivanja serumskih Ig različnih razredov. Na trgu obstajajo sistemi, ki omogočajo ločeno določanje IgM in IgG ter skupnih protiteles.

Specifični antigeni, ki se uporabljajo za ELISA, so lahko drugačnega izvora:

ultrazvočno- pridobljeni so kot posledica uničenja bakterijske celice T.pallidum z ultrazvokom ali drugo metodo;

rekombinantni- pridobljeni so s tehnologijami genskega inženiringa z vnosom v genom bakterijske celice (na primer Escherichia coli E.Coli) gena, ki je odgovoren za sintezo določenega antigena T.pallidum, čemur sledi rast bakterijske mase mikroorganizmi, ki proizvajajo, uničenje teh celic, izolacija in čiščenje antigena;

peptid- pridobljen kot rezultat zaporedne kemične sinteze antigenskih epitopov proteinov T. pallidum.

Telo je sposobno tvoriti protitelesa proti skoraj vsem delom molekule antigena. Pri normalnem imunskem odzivu se to običajno ne zgodi. Eden ali več imunogenih peptidov, izoliranih iz proteinskega antigena, ima posebno antigenost in večina protiteles se tvori specifično zanje. Razvijejo najmočnejši imunski odziv. Najbolj informativne v ELISA so pokazale imunodominantne regije proteinov blede treponeme z molekulsko maso 15 kD, 17 kD in 47 kD. Kot antigen smo uporabili izvleček detergenta ali sonikat patogenih treponem seva Nichols.

3. Metoda izvajanja raziskav po metodi

Načelo metode je identificirati specifičen kompleks antigen-protitelo, adsorbiran na trdni fazi (površini vdolbinic plastične plošče) z antiglobulinskimi protitelesi, označenimi z encimom (peroksidazo), z barvno reakcijo s substratom, ki je kvantificirano spektrofotometrično.

Antigeni, ki se uporabljajo za senzibilizacijo vdolbinic polistirenske plošče, so lahko:

• lizat- pridobljen kot posledica uničenja blede treponeme z ultrazvokom;
• peptid- pridobljen kot rezultat kemične sinteze fragmentov beljakovin blede treponeme in ima antigensko reaktivnost, podobno prvotnim proteinom patogena;
• rekombinantni- pridobljeno z metodami genskega inženiringa, ki nosijo antigenske determinante, identične bledi treponemi.

V sifilidološki praksi se običajno uporablja posredna različica ELISA.

4. Računovodstvo rezultatov

Pri ELISA se za vizualizacijo reakcije antigen-protitelo uporablja encimska reakcija (alkalna fosfataza ali hrenova peroksidaza) s substratom, ki spremeni svojo barvo. Intenzivnost barve določa pozitivnost reakcije (od "-" do "++++"). Rezultate ELISA lahko ocenimo vizualno na 4-točkovnem sistemu ali instrumentalno v obliki digitalnih indikatorjev optične gostote, pridobljenih na posebnih čitalnikih (kot je Multiscan) pri valovni dolžini 492 nm. Ker vrednotenje rezultatov je izvedeno spektrofotometrično, kar izključuje subjektivno interpretacijo.

5. V katerih obdobjih bolezni je bolje uporabiti

Pogoji ELISA pozitivnosti - od 4. tedna od okužbe. Rezultati ELISA (kot tudi RIF) postanejo pozitivni v prvih dneh primarnega obdobja ali ob koncu inkubacije in ostanejo pozitivni v vseh obdobjih. ELISA je še posebej dragocen pri zgodnji diagnozi sifilisa - pozitivne rezultate protiteles je mogoče dobiti že ob koncu inkubacijske dobe bolezni (tj. 4-6 tednov po okužbi).

6. Občutljivost in specifičnost

ELISA je zelo občutljiv in specifičen test, kar je njegova prednost. ELISA glede mehanizma reakcije, občutljivosti in specifičnosti je blizu RIF, tk. v obeh reakcijah sodelujejo ista protitelesa. Večina raziskovalcev ugotavlja visoko specifičnost in občutljivost na vseh stopnjah bolezni. Občutljivost različnih variant ELISA po G. A. Dmitrievu doseže 98–100%, specifičnost pa 96–100%. Po TsNIKVI je občutljivost ELISA za sifilis 99,1% (odredba št. 87 M3 Ruske federacije).

Različica trdnofazne ELISA (encimsko-imunski test, ELISA) je ena najobčutljivejših seroloških preiskav, saj omogoča dokazovanje 0,0005 µg/ml protiteles in 0,000005 µg/ml antigenov.

7. Obseg metode

Metodo priporočamo pri pregledu nosečnic, kontaktnih oseb, darovalcev in predstavnikov rizičnih skupin. ELISA se lahko uporablja kot presejalni in potrditveni test. V razmeroma kratkem času svoje zgodovine se je ELISA iz indikativnega testa razvila v potrditvenega. Pri diagnozi sifilisa se test uporablja tudi kot potrditveni test za vzorce, ki kažejo pozitivne rezultate z uporabo različnih netreponemskih testov in TPHA.

Metodo ELISA lahko uporabimo kvantitativno z izračunom indeksa pozitivnosti oziroma reaktivnosti, ki omogoča oceno ravni protiteles v vzorcu.

Trenutno v Rusiji uporabo encimskega imunskega testa za diagnozo sifilisa ureja Odredba Ministrstva za zdravje Ruske federacije št. 87 z dne 26. marca 2001 "O izboljšanju serološke diagnoze sifilisa" (Dodatek št. 1 "Nastavitev presejalnih in diagnostičnih testov za sifilis"). V naročilu je predvidena zamenjava RSK v kompleksu seroreakcij (SSR) z ELISA in RPHA.

8. Viri in vzroki uprizoritvenih napak, lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov

Encimski imunski test je zapletena večstopenjska študija, pri kateri je treba dosledno upoštevati vsa priporočila proizvajalcev diagnostičnih kompletov, pravila za prilagajanje in konfiguracijo opreme, uporabljene v študiji.

Naslednje točke so lahko vir napak pri nastavljanju testa ELISA:

Študija reakcije hiperlipidemičnega, hemoliziranega krvnega seruma ali vzorcev z znaki bakterijske rasti;

Ne izvajajte dvakratnega ali večkratnega zamrzovanja vzorca biološkega materiala, po potrebi ponovnega pregleda uporabite serum iz dvojne epruvete;

Kršitev pogojev shranjevanja imunosorbenta in raztopine za pranje; uporaba pretečenih testnih kompletov;

Uporaba reakcijskih komponent iz drugih diagnostičnih kompletov;

Kršitev časa reakcijskih stopenj;

Sušenje vdolbinic imunološke plošče med reakcijskimi koraki;

Ponovna uporaba plastičnih posodic (plastičnih pladnjev) za pripravo mešanice kromogena in substrata;

Neupoštevanje pogostosti meroslovne kontrole parametrov delovanja uporabljenih naprav (pralnik in spektrofotometer);

Uporaba kontaminirane laboratorijske steklene posode pri postavljanju reakcij: bučke, merilni valji, epruvete, pipete, pipetne konice;

Nezadostna temeljitost pri izvajanju razredčitev vzorcev biološkega materiala;

Napake pri vnosu vzorca biološkega materiala v ustrezno vdolbino tablete;

Napake pri prenosu rezultatov študije v dnevnik registracije, protokol študije ali obrazec za odgovore.

Skrbno izvajanje priporočil navodil za uporabo diagnostičnih testnih kompletov, redno preverjanje točnosti pipetnih razpršilnikov in avtomatskih naprav, uporaba notranjih pozitivnih in negativnih kontrol omogočajo pridobivanje visoko ponovljivih rezultatov ELISA.

9. Lastnosti, prednosti in slabosti

ELISA se nanaša na sodobne, obetavne metode serodiagnostike sifilisa zaradi svoje preprostosti, ponovljivosti in dostopnosti. Dokazovanje protiteles z ELISA je idealna diagnostična metoda, primerna za hkratno preiskavo večjega števila vzorcev. Zaradi svojih prednosti je pridobil popularnost v vseh državah.

Tehnologija raziskave ELISA zagotavlja skladnost z vsemi priporočili proizvajalcev komercialnih diagnostičnih testov in temeljitost raziskovalnega postopka. Za izvedbo raziskav v ELISA je potrebno kupiti dodatno posebno opremo. Tehnika nastavitve traja dlje časa v primerjavi z RMP, RPR in RPGA.

Prisotnost avtomatizacije več stopenj ali celotnega procesa kot celote vam omogoča sočasno raziskovanje veliko število vzorcev biološkega materiala z visoko stopnjo standardizacije študije, minimiziranjem subjektivnega elementa pri vrednotenju rezultatov, možnostjo shranjevanja fiksnih protokolov študije, kar omogoča arhiviranje študijskih podatkov in ponovno sklicevanje nanje za retrospektivno analizo.

Prednosti:

• Omogoča diferencirano in skupno določanje protiteles IgM in IgG proti povzročitelju sifilisa.
• visoka občutljivost in specifičnost, ki se približuje 100 %
• ponovljivost
• možnosti avtomatizacije

Prednosti ELISA vključujejo visoko specifičnost (96-100 %) in občutljivost (98-100 %), ki jo ugotavlja večina raziskovalcev.

Prisotnost avtomatizacije več stopenj ali celotnega procesa kot celote vam omogoča, da istočasno pregledate tok z velikim številom vzorcev biološkega materiala z visoko stopnjo standardizacije študije, kar zmanjša subjektivni element pri vrednotenju rezultati, možnost shranjevanja fiksnih študijskih protokolov, ki vam omogočajo arhiviranje študijskih podatkov in ponovno uporabo za retrospektivno analizo.

Bistvene slabosti ročnih metod, vključno z določanjem protiteles proti antigenom T. pallidum z ELISA testom, so:

~ morebitne napake osebja med študijem (spogled, malomarnost, kršitev tehnologije);

~ nezmožnost popolne standardizacije raziskovalnega procesa z ročno različico ELISA;

~ povečana nevarnost okužbe osebja.

10. Spremembe metode

Poleg klasične indirektne ELISA je poznana tudi metoda. lovljenje ELISA. Leta 1989 so ga predlagali O. E. Ijsselmudien et al. za odkrivanje protiteles razreda IgM proti antigenom Tr. pallidum. Metoda ima visoko specifičnost in občutljivost.

Očiščena protitelesa proti človeškim imunoglobulinom razreda M se sorbirajo na površini vdolbinic tablete in po inkubaciji testnega seruma se vsi IgM vežejo na nosilec. Prisotnost med povezanimi IgM, specifičnimi za antigene Tr. pallidum se odkrije z antigeni Tr. pallidum, konjugiran z encimom.

Ta metoda vam omogoča odkrivanje protiteles ne samo razreda IgM, temveč tudi razredov IgG, IgA. Da bi to naredili, se vdolbinice plošč senzibilizirajo z afinitetno prečiščenimi protitelesi določenega razreda proti človeškim imunoglobulinom. V tem primeru se protitelesa tega razreda ujamejo iz seruma, odkrivanje treponemskih specifičnih protiteles pa se izvede tako, da se združijo s konjugatom, ki je kombinacija treponemskega antigena z encimom.

Uporaba ujetega ELISA zmanjša tveganje lažno pozitivnih reakcij, ki jih posreduje revmatoidni krvni faktor, navzkrižne reakcije med imunoglobulini razredov M in G. Pri pregledu novorojenčkov so v tem primeru lažno pozitivni rezultati testa, povezani z odkrivanjem IgM, usmerjenega proti izključeni so tudi materini antitreponemski IgG.

Kot različice ELISA se v tujini pogosto uporabljajo encimski imunski test (EIA) in sistem ICE sifilis. Pri slednjem smo v vdolbinice plošče adsorbirali mešanico protiteles proti IgM in IgG ter tri rekombinantne proteine ​​T. pallidum. Pozitivne rezultate testiramo v istem testnem sistemu v dveh ponovitvah, da dobimo končni rezultat.

V Rusiji je bilo razvitih več testnih sistemov za serodiagnozo sifilisa z ELISA z domačimi reagenti. Ti sistemi imajo visoko specifičnost in občutljivost.

Poleg zgoraj navedenega obstajajo tudi druge možnosti za ELISA, vključno s tistimi, ki omogočajo neposredno odkrivanje patogena v krvi (direktna ELISA), dot-ELISA z reakcijo na nitrocelulozne trakove, ELISA s kapilarno krvjo, pa tudi imunobloting ali Western Blot s hkratnim odkrivanjem protiteles proti različnim sestavinam patogena.

Sodobna izboljšana modifikacija ELISA je imunobloting.

ICA (imunokemiluminiscenčna analiza), ICL (imunokemiluminiscenca)

Z razvojem laboratorijske diagnostike v okviru modernizacije zdravstvenega varstva v Ruski federaciji je v prakso laboratorijev vstopila avtomatizacija laboratorijskih raziskav, kar omogoča standardizacijo analitičnih faz raziskav. To izboljša kakovost diagnostike. Z uvedbo avtomatizacije so se začele uporabljati nove visokotehnološke metode z visoko občutljivostjo in specifičnostjo, kot je kemiluminescenčni imunski test (CLIA).

Kemiluminiscenca - proces oddajanja fotonov med prehodom elektronsko vzbujenih produktov oksidacije kemične reakcije nazaj v prvotno energijsko stanje. Med reakcijo kemiluminiscence se sprosti znatna količina energije, kvantni izkoristek oddane svetlobe pa je precej visok. Od vseh neizotopskih metod zagotavlja kemiluminiscenca najvišjo občutljivost. Pri imunometričnih metodah je občutljivost kemiluminiscence za rede velikosti višja od občutljivosti radioimunskega testa.

Metoda imunokemiluminiscence (ICL) je zdaj našla svojo uporabo pri diagnostiki tumorskih markerjev, avtoimunskih bolezni, sladkorne bolezni, srčnih markerjev, hormonov (ščitnice, nadledvične žleze, ženskih in moških spolnih hormonov), torch okužb, virusnega hepatitisa, virusov skupine herpes.

Na podlagi metode imunokemiluminiscence so bili razviti številni visoko občutljivi in ​​specifični (98-100%) testni sistemi za diagnostiko sifilisa, ki se uporabljajo predvsem v tujini.

Pri metodi se kot antigeni uporabljajo rekombinantni lipoproteini, pridobljeni z metodami genskega inženiringa, ki so popolni analogi antigenov T.pallidum.

ICA metoda po rezultatih klinično preskušanje je bil priznan in se priporoča za uporabo pri laboratorijski diagnostiki sifilisa v Ruski federaciji kot presejalni in potrditveni test, če imajo laboratoriji ustrezno opremo. Leta 2012 je bil ICA vključen kot presejalni in potrditveni test za diagnozo sifilisa v Klinične smernice o obravnavi bolnikov s spolno prenosljivimi okužbami in urogenitalnimi okužbami

Tako uporaba visokotehnološkega ICA, ki je z uvedbo avtomatizacije vstopila v prakso tako svetovne kot domače laboratorijske diagnostike, zagotavlja naslednje prednosti:

• izključitev vpliva subjektivnih dejavnikov na analitični stopnji študije
• varnost osebja pri izvajanju študij potencialno okuženega biološkega materiala
• povečanje hitrosti pridobivanja rezultatov s strani bolnika
• standardizacija raziskav in nadzor kakovosti raziskav
• zagotavljanje zanesljivih zanesljivih rezultatov bolnikom
• visoko kakovostne klinične laboratorijske raziskave.

Metoda ICA je po občutljivosti primerljiva z radioimunsko metodo, po enostavnosti izvedbe, varnosti za osebje in številnih drugih parametrih pa jo prekaša.

Metoda ICA, ki ima visoko občutljivost in specifičnost (98–100%), omogoča kvantificiranje ravni protiteles proti povzročitelju sifilisa in se lahko uporablja za potrditev sifilitične okužbe in presejanje. Omejitve uporabe: ni mogoče uporabiti za spremljanje učinkovitosti terapije, lahko daje lažno pozitiven rezultat.

Imunokromatografija (ICH).

Relativno nove za uporabo v Ruski federaciji so metode za odkrivanje protiteles, specifičnih za treponeme, ki temeljijo na metodah imunokromatografije (ICH). Tako kot pri ICA metodi se kot antigeni uporabljajo rekombinantni lipoproteini, pridobljeni z metodami genskega inženiringa (na primer: antigeni Tp15, Tp17, Tp47) in biosintetični peptid TmpA. Našteti antigeni se v različnih kombinacijah uporabljajo tudi kot del imunosorbentov pri ELISA in imunoblotingu.

Metoda ICG vam omogoča hitro določanje vsebnosti treponema specifičnih protiteles proti povzročitelju sifilisa v vzorcih seruma in polne krvi brez uporabe posebne laboratorijske opreme in se uporablja pri zagotavljanju primarne zdravstvene oskrbe, vključno z epidemiološkimi indikacijami.

Omejitve uporabe: ni mogoče uporabiti za spremljanje učinkovitosti terapije, lahko daje lažno pozitiven rezultat.

PBT (preprosti hitri testi ob postelji)

Relativno nedavno se je v serodiagnostiki sifilisa začela razvijati smer za razvoj tako imenovanih preprostih hitri testi(PBT), ali testi ob postelji (Point-of-care - ROS). Preprosti hitri obposteljni testi ali imunokromatografski testi omogočajo hitro določanje vsebnosti za treponeme specifičnih protiteles proti povzročitelju sifilisa v vzorcih seruma in polne krvi brez uporabe posebne laboratorijske opreme in se uporabljajo v primarnem zdravstvenem varstvu, vključno z epidemiološke indikacije. Omejitve uporabe: ni mogoče uporabiti za spremljanje učinkovitosti terapije, lahko daje lažno pozitiven rezultat.

Ti testi temeljijo na imunokromatografskem odkrivanju protiteles proti treponemskim antigenom blede treponeme in se izvajajo na trakovih; v tem primeru lahko uporabimo tako polno kri kot serum (Herring A., Ballard R. et al, 2006). Oblika testov vam omogoča izvajanje raziskav brez posebne opreme in brez uporabe električne energije. Vendar pa ti testi zaradi relativno nizke občutljivosti in specifičnosti še niso našli široke uporabe v praksi.

Imunobloting (Western Blot)

V zadnjih letih so se pojavile raziskovalne metode, namenjene odkrivanju in analizi vsebnosti protiteles. za vsak antigen bleda treponema ločeno. Ena takšnih metod je metoda imunskega blotinga (ali blotting, immunoblotting, Western blot), s katero določamo protitelesa IgG ali IgM proti bledi treponemi. Metoda imunoblotinga je modifikacija encimskega imunskega testa - različica ELISA.

Imunobloting je ena najsodobnejših metod serodiagnostike sifilisa in se aktivno uporablja v tujini. Ime ("Western blotting") je dobil kot šaljiv odgovor na imena tehnik odkrivanja DNK ("Southern blotting") in RNA ("Northern blotting").

1. Zgodovina metode

Imunobloting (Western blot) uporabljamo za določanje protiteles IgG ali IgM proti antigenom bledih treponem (Herremans M. et al., 2007).

2. Klasični imunoblot

Klasični imunoblot(Western Blot analiza) združuje encimski imunski test in uporabo elektroforetske metode. Proteinski antigeni povzročitelja sifilisa se predhodno ločijo z elektroforezo in prenesejo na nosilec - nitrocelulozno membrano (trak). Ta prenos se imenuje blotting. Nato ta nosilec z ločenimi točkami (bloti) obdelamo s testnim serumom in z encimi ali radioaktivnimi snovmi označenimi protitelesi proti IgG ali IgM. Metoda vključuje uporabo naravnih ali rekombinantnih proteinov treponeme.

elektroforeza je ločevanje nabitih spojin na podlagi njihove mobilnosti v elektroforetskem polju. Ko se v nekem mediju uporabi potencialna razlika, se pozitivno nabite molekule premaknejo proti negativno nabiti elektrodi, negativno nabite molekule pa proti pozitivni elektrodi.

Večina globularnih proteinov je sestavljenih tako, da se večina nabitih skupin, in sicer hidrofilnih, nahaja na površini proteina, medtem ko so nenabiti, hidrofobni ostanki potopljeni v globulo. V električnem polju se proteini v skladu s svojim nabojem selijo proti nasprotno nabiti elektrodi.

Elektroforetsko ločevanje proteinov poteka v sintetičnem gelnem mediju na osnovi poliakrilamida. Za ločevanje beljakovin glede na njihovo molekulsko maso se pred elektroforezo beljakovinska zmes predhodno inkubira v prisotnosti natrijevega dodecil sulfata (SDS).

Podrobne študije tujih znanstvenikov Weber in Osborn (1969) so pokazale, da je po takšni obdelavi edini dejavnik, ki lahko vpliva na mobilnost proteinov v poliakrilamidnem gelu (PAAG), velikost proteina oziroma njegova molekulska masa. To je omogočilo uporabo metode elektroforeze v SDS-PAGE v prisotnosti SDS za dokaj natančno določanje molekulske mase proteinov in peptidov. V tuji literaturi so to metodo poimenovali SDS-PAGE (sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis).

Profil reaktivnosti v klasičnem WB testu z naravnimi antigeni (metoda elektroforeze v poliakrilamidnem gelu z natrijevim dodecil sulfatom). (1) - kontrola pozitiven rezultat, (2) - kontrola negativen rezultat, (3-6) - klinični vzorci.

Pri testih za sifilis s to metodo, predhodno očiščeno in uničeno na sestavne dele, bledo treponemo podvržemo elektroforezi v poliakrilamidnem ali agaroznem gelu. Hkrati so antigeni, vključeni v njegovo sestavo, ločeni po molekulski masi.

Nato se z navpično elektroforezo antigeni prenesejo na trak nitroceluloze, ki zdaj vsebuje očem neviden spekter antigenskih trakov, značilnih za bledo treponemo.

Med analizo se testni material (serum, krvna plazma bolnika itd.) nanese na nitrocelulozni trak (trak). Če so v vzorcu specifična protitelesa, se v procesu inkubacije močno vežejo na antigenske pasove, ki jim strogo ustrezajo (komplementarni) in tvorijo kompleks "antigen-protitelo".

Po odstranitvi nevezanih imunoglobulinov med pranjem lističa sledi inkubacija s konjugatom - z encimi označenimi protitelesi proti človeškim imunoglobulinom (protitelesa proti človeškim IgG ali IgM), pri kateri se z encimom označena protitelesa vežejo na obstoječi antigen-protitelo. kompleksov na površini membrane.

Po odstranitvi nevezanega konjugata med inkubacijo s substratno raztopino encim interagira s substratom, kar povzroči barvno reakcijo - obarvanje membranskih delov (v obliki trakov), kjer se nahajajo posamezni antigeni bledega treponema, protitelesa proti ki so bili v testnem serumu. Intenzivnost obarvanja je odvisna od količine vezanih protiteles iz seruma. Rezultat reakcije se oceni vizualno.

Prisotnost pasov na določenih območjih nitrocelulozne plošče potrjuje prisotnost protiteles proti strogo določenim antigenom blede treponeme v preučevanem serumu.

Imunodeterminante 15, 5, 17, 44,5, 47 kD, določene s to metodo, imajo diagnostični pomen pri sifilisu. Ig G imunobloting je po občutljivosti in specifičnosti podoben RIF z absorpcijo (RIF abs). Ig M-imunoblotting lahko služi kot diagnostični test za prirojeni sifilis.

3. Imunoblot v obliki linearnega imunskega testa

Linearni imunski test (linijski imunski test, LIA) vam omogoča hkratno določanje protiteles proti antigenom blede treponeme v človeškem serumu ali plazmi. Antigeni so predhodno naneseni na testne lističe (trakove), ki so dobavljeni kot del komercialnih diagnostičnih kompletov.

Trakovi so izdelani iz nitrocelulozne membrane, poliamidne membrane s plastično podlago ali najlonske membrane s plastično podlago. Med proizvodnjo je več diskretnih antigenov nameščenih na testni listič kot ločene antigenske linije. Poleg teh sifilisnih antigenov so na vsako stezo dodane še štiri kontrolne črte: streptavidin in kontrole (3+, 1+ in ± črta reza).

Za trakove se uporabljajo umetni antigeni, pridobljeni z genskim inženiringom - rekombinantni proteini ali sintetični polipeptidni konstrukti. To so analogi površinskih antigenov blede treponeme - TpN15, TpN17, TpN47 in TmpA z molekulsko maso 15, 17, 47 kDa in 44,5 (TmpA), kjer je kDa=kiloDaltonov. Z njihovo pomočjo se določijo serumska protitelesa proti različnim imunodominantnim komponentam patogena.

Inkubacija testnega vzorca poteka v kiveti, kamor je nameščen tudi indikatorski trak. Protitelesa proti T. pallidum se določijo z vezavo na antigene, natisnjene na testnih lističih. Če so v vzorcu za T. pallidum specifična protitelesa, tvorijo vezi s posameznimi antigenskimi linijami. Ko protitelesa v testnem serumu medsebojno delujejo z ločenimi antigeni T. pallidum, nameščenimi na testnem traku, se tvori kompleks antigen-protitelo v obliki vizualno zaznavnih barvnih trakov.

Ob upoštevanju rezultatov imunoblotinga se reaktivnost seruma za vsakega od antigenov oceni ločeno. Popolnoma pozitiven odgovor je izdan, ko je rezultat pridobljen hkrati z dvema ali tremi predstavljenimi antigeni.

Raziskovalni postopki se izvajajo ročno ali na posebnem analizatorju z interpretacijo rezultatov s pomočjo specializiranega računalniškega programa za nalezljive bolezni.

Zaradi visoke stopnje čiščenja rekombinantnih antigenov in hkratnega odkrivanja protiteles proti najbolj imunogenim determinantam povzročitelja sifilisa ima metoda visoko občutljivost in specifičnost.

4. Računovodstvo rezultatov

Za odčitavanje intenzivnosti obarvanja antigenskih trakov na trakovih so razvili fotometre, katerih delovanje temelji na odboju signala, kar odpravlja subjektivno oceno in daje potencialno možnost avtomatizacije.

5. V katerih obdobjih bolezni je bolje uporabiti

Testi z metodo Western blot lahko odkrijejo specifična protitelesa proti antigenom Treponema pallidum že v zelo zgodnji fazi bolezni. Najpomembnejša pri diagnozi sifilisa so protitelesa proti antigenom blede treponeme TpN15, TpN17, TmpA in TpN47. Ti antigeni so membranski proteini z molekulsko maso 15, 17, 44,5 oziroma 47 kDa.

Ko se treponema pallidum vnese v človeško telo, se antisifilitična protitelesa pojavijo v tem vrstnem redu: najprej se razvije imunski odziv na antigene TpN17, nato na TpN47, za TpN15 in kasneje kot na vse TmpA. Ob upoštevanju rezultatov testov se oceni reaktivnost seruma na vsakega od njih posebej. Na primer, če je v linearnem blotu reaktivnost le na antigenski liniji TpN17 in TpN47, to pomeni, da je bolezen v zgodnji fazi. Bolj kot postanejo antigenske linije reaktivne, bolj napreduje okužba. Pri zdravljenju sifilisa se vzorec reaktivnosti v tem testu spremeni.

Določanje IgM na beljakovine z molekulsko maso 15,17, 41, 47 kDa omogoča identifikacijo 29,2% bolnikov s sekundarnim sifilisom, 12,5% z zgodnjim latentnim sifilisom in 8,0% s serorezistentnim. Za iskanje IgG na iste molekule je značilna občutljivost 61,6 % za serorezistenten in 100 % za sekundarni in zgodnji latentni sifilis.

6. Občutljivost in specifičnost

Glede na literaturo sta občutljivost in specifičnost testa zelo visoki - 99,6-100% oziroma 99,3-99,5%. IN klasična metoda to dosežemo z elektroforetično ločitvijo proteinov, gliko- in lipoproteinov ter največjo specifičnostjo detekcije imunskih serumov ali monoklonskih protiteles. Pod optimalnimi pogoji lahko imunobloting zazna antigen v količinah, manjših od 1 ng v volumnu testa.

Tudi občutljivost linearnega blota je 99,6 %, specifičnost pa med 99,3 % in 99,5 %.

Po mnenju strokovnjakov je imunobloting z rekombinantnimi visoko specifičnimi antigeni po občutljivosti in specifičnosti podoben RIF abs.

Po podatkih tuje literature in rezultati študije na TsNIKVI ima metoda imunoblotinga visoko občutljivost (98,8-100%) in specifičnost (97,1-100%) pri diagnozi sifilisa.

7. Obseg metode

Imunobloting (imunoblot) je zelo specifična in zelo občutljiva referenčna metoda. Visoka občutljivost in specifičnost omogočata, da se ta metoda šteje za potrditveni test za sifilis. Metoda se lahko uporablja za potrditev diagnoze, pa tudi, če drugi treponemski testi dajo vprašljive in nasprotujoče si rezultate. Western blot lahko potrdi diagnozo pri bolnikih s pozitivnimi ali nedoločenimi rezultati testa, vključno s tistimi, pridobljenimi s TPHA ali ELISA.

8. Viri in vzroki uprizoritvenih napak, lažno pozitivnih in lažno negativnih rezultatov

Lažno pozitivni rezultati so zelo redki. Tudi lažno negativni rezultati so precej redki in jih opažamo pri bolnikih z imunsko pomanjkljivostjo – pogosteje pri okužen s HIV in z učinkom diagnostičnega "okna" zaradi zamude pri sintezi protiteles, pa tudi napak na stopnji uprizarjanja.

Uporaba sodobnih testnih sistemov narekuje natančno upoštevanje vseh zahtev tako glede materiala kot izvedbe reakcije. V bistvu je vir napak kršitev reda in tehnologije študije (zlasti za klasični Western blot), neupoštevanje priporočil proizvajalcev testnih kompletov. . Napake lahko pride tudi pri odvzemu, dostavi, shranjevanju vzorcev krvnega seruma, pa tudi pri izvajanju preiskav. Poleg pokvarjenih vzorcev med drugim možni vzroki- uporaba pretečenih testnih kompletov, pa tudi napake pri analizi rezultatov študije.

9. Lastnosti, prednosti in slabosti

Edinstvenost imunoblota je v visoki informativnosti in zanesljivosti rezultatov.

Test ne zahteva visoko prečiščenih antigenov, referenčnih in kontrolnih serumov. Identifikacija tarče protitelesa temelji na molekulski masi proteina, s katerim reagirajo protitelesa iz bolnikovega seruma. V eni reakciji lahko zaznamo vezavo protiteles na več antigenov, od katerih lahko vsakega natančno okarakteriziramo. Zaradi tega ima imunobloting številne prednosti pred drugimi metodami za dokazovanje protiteles, katerih rezultati so odvisni od standardizacije, občutljivosti, kakovosti substrata, nestabilnosti ali netopnosti določenih antigenov.

Metoda je lahko ponovljiva, razmeroma enostavna za izvedbo in interpretacijo rezultatov, omogoča določanje spektra protiteles na več antigenov T. pallidum hkrati in ovrednotenje prispevka protiteles različnih specifičnosti k celotni reakciji.

Uporaba visoko prečiščenih rekombinantnih in peptidnih antigenov zmanjša nespecifično reaktivnost serumov. Uporaba metode omogoča izogibanje delovno intenzivnim in subjektivnim metodam, ki so nevarne za raziskovalca (presaditev sevov G. pallidum, delo s patogeno T. pallidum pri postavljanju reakcije). To določa prednost metode imunoblotinga pred drugimi treponemskimi testi (RIF in predvsem RIBT) za diagnozo sifilisa.

10. Spremembe metode

Obstaja več komercialnih testnih sistemov, ki temeljijo na tej metodi. Nekateri od njih so v obliki Western blot, so sestavljeni iz trakov, na katere so prenesene beljakovinske komponente T. pallidum, predhodno ločene z elektroforezo v poliakrilamidnem gelu.

Drugi so v formatu linearni madež, so sestavljeni iz trakov, na katerih so v obliki diskretnih linij adsorbirani rekombinantni in sintetični polipeptidi - analogi površinskih antigenov T. pallidum, TpN15, TpN17, TpN47 in TmpA.

Rezultate Western blota je težje interpretirati, ker trakovi kažejo veliko različnih protiteles, od katerih so mnoga skupinsko specifična. Nasprotno pa je razlaga rezultatov linearnega blota enostavna; poleg tega dodatne kontrolne črte, natisnjene na traku, omogočajo polkvantitativno oceno ravni protiteles proti štirim antigenom T. pallidum.

xMAP tehnologija

xMAP je najsodobnejša tehnologija, ki omogoča izvajanje večparametričnih študij s hkratnim odkrivanjem več analitov v enem biološkem vzorcu. Kot trdna faza se uporabljajo barvne mikrosfere, prevlečene z reagenti za zajemanje (oligonukleotidi, protitelesa, antigeni).

Preskusni vzorec se doda raztopini, ki vsebuje mikrokroglice. V vzorcu odkriti analiti se vežejo na ustrezno mikrosfero, nato pa se raztopini doda sredstvo za odkrivanje (protitelesa za odkrivanje, fluorescenčna oznaka). Za detekcijo analita, ki ga določamo, se uporablja sistem dveh laserjev, ki omogoča tako kvalitativno oceno prisotnosti analita v vzorcu (za to se uporablja rdeči laser, ki razvršča mikrosfere po barvi) kot kvantitativno oceno. vsebnosti analita v vzorcu (za to se uporablja zeleni laser).

Študija se izvaja samodejno na analizatorjih, kot so Bio-Plex 200 (bio-rad), Bio-Plex2200 (bio-rad), Luminex100 (luminex), Luminex200 (luminex), opremljenih s programsko opremo.

Zmogljivost tehnologije xMAP bistveno presega zmogljivost klasičnega encimsko-imunskega testa (ELISA) z bistveno manjšo količino biomateriala.

Trenutno se za reševanje uporablja tehnologija xMAP, ki ima visoko analitično občutljivost širok razpon klinične naloge. Z njegovo pomočjo lahko v enem vzorcu biološkega materiala hkratno detektiramo znane onkomarkerje, srčne markerje, markerje akutne faze in diabetes, širok nabor citokinov, kemokinov, rastnih faktorjev. Hkratna detekcija več analitov v enem biološkem vzorcu lahko bistveno skrajša čas pregleda bolnika. Do danes so bili razviti številni testni sistemi za odkrivanje protiteles proti povzročiteljem SPO, zlasti sifilitične okužbe, z metodo xMAP.

ZDRAVSTVENI DOM"Na Samotechnaya"

Sprejem po dogovoru! Sobota Nedelja.

Zelo pomembno je pravočasno prepoznati bolezen. V določenem trenutku se lahko oseba napoti na krvni test CSR, ki vam omogoča, da ugotovite, ali ima oseba sifilis ali ne.

Kdaj je naročen CSR krvni test?

Obstaja več indikacij, kdaj je treba darovati kri za prisotnost ali odsotnost sifilisa v človeškem telesu.

Takšne indikacije vključujejo:

• Promiskuitetni spolni odnosi (tako naključni kot ne).Ljudje se med spolnim odnosom ne bodo vedno zaščitili, zato se tveganje za nastanek sifilisa večkrat poveča.
• Priprava pred operacijo, ko je za zdravnike zelo pomembno vedeti splošno stanječloveško telo in ali je treba sprejeti kakšne dodatne varnostne ukrepe, da se ne okužimo.
• Nosečnost, med katero je zelo pomembna izvedba popolna diagnostika organizem bodoča mati in razumeli, kako velike so možnosti, da nosite otroka. Poleg tega je sifilis nevaren za otroka, zato lahko v nekaterih primerih povzroči prekinitev nosečnosti.
• Načrtovanje nosečnosti. Ta postopek je zasnovan tako, da zagotovi, da bodoči starši namerno opravijo anketo, da bi resno pristopili k vprašanju spočetja. Med tem dogodkom so vsi možne bolezni, kot tudi obstoječe okužbe, ki jih je treba takoj zdraviti.
• Razjede na genitalijah, ki lahko kažejo na prisotnost resne in nevarne bolezni.
• Obilen izcedek iz genitalij različne narave.
• Povečane bezgavke, predvsem v predelu dimelj.
• Izpuščaj na telesu, ki ga lahko spremlja hudo srbenje.
• Bolečine v kosteh.

Tudi kri za sifilis (KSR) se daruje ob vsakem preventivnem pregledu z edinim namenom, da se težava pravočasno odkrije.

Priprava in interpretacija krvnega testa

Kako se pravilno pripraviti na darovanje krvi za CSR test

Pacient, ki je prejel napotnico za CSR analizo, se mora vzdržati uživanja hrane vsaj 8 (in še bolje 12) ur pred samim posegom, saj lahko včasih povzroči lažno pozitivno ali lažno negativno analizo.

Če oseba nima možnosti, da ne bi jedla tako dolgo (na primer diabetiki ali nosečnice), je treba izključiti čaj, kavo in vse sokove. Dovoljeno je piti samo navadno vodo (kuhano ali filtrirano).

V trenutku, ko so znanstveniki prejeli takšno metodo za diagnosticiranje sifilisa, ga je postalo mogoče identificirati tudi z latentnim potekom.

Wassermanova reakcija je še posebej pomembna za vsakega venerologa, ker:

• Omogoča vam, da določite celo trenutek okužbe, seveda ne z natančnostjo dni, vendar je približen interval in trajanje bolezni precej.
• Prisotnost sifilisa je mogoče ugotoviti tudi, če se pojavi v latentni obliki.
• To je edini normalni pokazatelj, kako učinkovito je zdravljenje in ali obstaja pozitiven trend.

Več informacij o analizi najdete v videu.

Prav tako zdravnika vodijo rezultati analize med preventivnimi ukrepi v žarišču okužbe, kar je prav tako pomembno. Bolniki so navajeni, da je rezultat analize lahko pozitiven ali negativen. Toda pri sifilisu so stvari nekoliko drugačne.

Negativen rezultat je lahko popolna odsotnost okužbe ter pri zgodnjem primarnem ali poznem terciarnem sifilisu.

Kar zadeva pozitiven rezultat, kaže, da je okužba prisotna v telesu (odvisno od točnosti indikatorjev) ali da je oseba v fazi okrevanja ali v prvem letu po zdravljenju. To pomeni, da je ob prejemu rezultata analize nemogoče z natančnostjo reči, ali je oseba zdrava ali ne. Še posebej, če pogovarjamo se o bolnikih, ki se zdravijo.

V primeru, da osebe niso mučili simptomi in ni bil podvržen nobenemu zdravljenju, hkrati pa je njegova analiza negativna, potem to kaže na popolno odsotnost bolezni.

Lažno pozitivna reakcija

Obstaja več bolezni in razlogov, zakaj lahko CSR krvni test pokaže lažno pozitiven rezultat. Seveda to človeka šokira, vendar ne pomeni brezupnosti.

Lažno pozitiven rezultat je lahko v naslednjih primerih:

• Med nosečnostjo, saj je telo v tem trenutku izpostavljeno močni obremenitvi.
• S sladkorno boleznijo.
• S tuberkulozo katere koli oblike.
• V prisotnosti malignih tumorjev v telesu (onkologija).
• Z zlorabo alkoholnih pijač.
• Z virusnim hepatitisom, ko jetra ne delujejo tako, kot zahteva telo.
• S pljučnico, zlasti v hudih oblikah njenega poteka.

Lažno pozitiven rezultat lahko opazimo tudi pri ljudeh po cepljenju, zato morate ob prejemu takega rezultata o tem obvestiti zdravnika. Kar se tiče lažno negativnih rezultatov, je to zelo redko.

Krvni test CSR je zelo pomembna diagnostična metoda, ki vam omogoča pravočasno odkrivanje bolezni in začetek zdravljenja.

Seveda se bolezen ne odkrije vedno v zgodnji fazi. Zato je treba vsako leto, še posebej, če je prišlo do naključnega spolnega odnosa, opraviti krvni test, da bolezni ne bi pripeljali do hude stopnje, ki jo je že težko ozdraviti.

vprašanje dneva

Dober dan doktor! Noseča sem 18 tednov. Zelo me skrbi za svojega otroka. Prvi ultrazvok je bil narejen pri 12 tednih. .

Razumemo vašo zaskrbljenost, a na žalost se ultrazvočna diagnostika izvaja le po indikacijah, po načrtu, trikrat v celotni nosečnosti. Vsak medicinski poseg ima stranski učinki zato ne priporočamo.

VPRAŠAJTE ZDRAVNIKA

CSR (Wassermanova reakcija)

Metoda za prepoznavanje sifilisa z uporabo serološke reakcije. Temelji na lastnosti krvnega seruma bolnikov s sifilisom, da tvori kompleks z ustreznim antigenom, ki adsorbira komplement - del normalnega seruma; eritrociti ovčje krvi služijo kot antigen, človeški krvni serum služi kot protitelo. Če se ob dodajanju hemolitičnega seruma rdeče krvne celice ne raztopijo (hemoliza), se Wassermanova reakcija šteje za pozitivno (obstaja sifilis), ko pride do hemolize, je Wassermanova reakcija negativna (ni sifilisa). Ta metoda vam omogoča, da ugotovite bolezen sifilisa v odsotnosti njegovih kliničnih manifestacij; služi kot merilo za učinkovitost zdravljenja.

Pozitivno Wassermanovo reakcijo lahko opazimo tudi pri nekaterih boleznih nesifiličnega izvora (gobavost, malarija, tifus, tifus, črne koze, škrlatinka, gripa, ošpice, virusna pljučnica itd.), pa tudi pri nekaterih fizioloških stanjih ( med menstruacijo, v drugi polovici nosečnosti pri 2% nosečnic), če se jemlje peroralno zdravila – lažno pozitivne reakcije. Zato je v primeru dvoma nujen ponoven pregled.

Od leta 2010 bo v Rusiji Wassermanovo reakcijo popolnoma nadomestila diagnostika ELISA (encimski imunski test)

Cene krvnega testa za sifilis po metodi CSR (Wassermanova reakcija) najdete v poglavju Cenik.

Kakšni so testi za sifilis?

Če sifilisa ne zdravimo, začnejo po nekaj letih bolnikovi notranji organi propadati. Človek lahko trpi desetletja in smrt bo boleča. Analiza za sifilis vam omogoča pravočasno diagnosticiranje bolezni in predpisovanje zdravljenja, predvsem antibiotične terapije. Koliko časa traja zdravljenje, je odvisno od stopnje bolezni in pravilnega zdravljenja: v začetni fazi je bolezen mogoče odpraviti v treh do štirih mesecih. Sifilisa ni mogoče pozdraviti sam.

Značilnosti bolezni

Sifilis povzroča bakterija Treponema pallidum. V telo lahko vstopi že z manjšimi poškodbami, in čeprav se prenaša predvsem spolno, se človek lahko okuži tudi preko gospodinjskih predmetov. Res je, vedeti morate, da bakterija odmre po pol ure pri temperaturah nad 48 stopinj. Zato je sterilizacija pomembna.

Obstajajo primarna, sekundarna, latentna in terciarna faza sifilisa. Prvi znaki bolezni so razjede na koži, ki izginejo po približno 5 tednih. Dva meseca kasneje se pojavijo znaki sekundarnega sifilisa v obliki izpuščaja, razjed in vozličkov. Eden od hudih zapletov te oblike je okvara ledvic. To stanje spremlja proteinurija - povečana vsebnost beljakovin v testu urina (nad 2-3 g / l). Izpuščaj običajno izzveni po nekaj tednih brez zdravljenja.

Če se bolezen ne zdravi, se razvije terciarni sifilis. Pojavi se pet let kasneje, ko pride do uničenja notranjih organov. Živčni je prizadet srčno-žilni sistemi, hrbtenjača in možgani. Odpovedujejo ledvice, jetra, želodec, črevesje.

Stanje je še posebej nevarno, če je oseba bolna s HIV. HIV se tako kot sifilis najpogosteje prenaša spolno in ga je težko zdraviti. Hkrati so bolniki s sifilisom ogroženi za okužbo s HIV, bolniki s HIV pa so ogroženi za okužbo s sifilisom. Če sifilis pobere oseba, okužena s HIV, je učinkovitost zdravljenja odvisna od stadija bolezni: dlje ko ima oseba HIV, večje je tveganje za nastanek hudih zapletov sifilisa (še posebej, če je oseba, okužena s HIV). ne zdravimo).

Kako opraviti analizo

Če govorimo o tem, od kod se vzame kri za sifilis, potem je odgovor naslednji: pri določanju HIV se material vzame iz vene. Včasih lahko zdravnik naroči vzorec prsta, vendar le za nespecifične hitre teste. To je posledica dejstva, da so razvite številne norme venske krvi: v krvi, vzeti iz prsta, so kazalci drugačni. Poleg tega je mogoče iz prsta pridobiti manj materiala za študij kot iz vene. Če je treba vzeti vzorec za testiranje na sifilis iz prsta, se uporabi enaka laboratorijska tehnika kot pri splošna analiza krvi.

Če je krvni test iz prsta pokazal verjetnost blede treponeme, je potrebna podrobnejša, razširjena študija. V tem primeru se kri za sifilis vzame samo iz vene: le v tem primeru je mogoče dobiti pravilen negativen ali pozitiven rezultat.

Ta vrsta analize, kot je bris, v primeru sifilisa in HIV, je neučinkovita. V brisu je povzročitelj bolezni odsoten v vseh fazah bolezni.

Vrste raziskav

Za določitev protiteles proti bledi treponemi v krvi se uporabljajo naslednji testi:

• RIF ali FTA (imunofluorescenčna reakcija) - določi se reakcija absorpcije fluorescenčnih protiteles.
• TPHA ali TPHA (test pasivne hemaglutinacije) je test za sifilis, ki odkriva protitelesa IgM in IgG.
• ELISA ali ELISA - ime pomeni encimski imunski test, določa kvantitativno vsebnost protiteles IgG in IgM.

Sifilis je mogoče zaznati s treponemskimi in netreponemskimi testi. Prvi test za sifilis zazna protitelesa proti antigenom Treponema pallidum v krvi. Drugi zaznava protitelesa proti tkivom, ki jih je bakterija uničila.

ELISA je učinkovita testna metoda, ki se izvaja ne le za ugotavljanje prisotnosti okužbe, temveč tudi za določitev stopnje bolezni. Poleg tega lahko ELISA odgovori na vprašanje, ali ta oseba kdaj sifilis. Občutljivost ELISA lahko doseže 90%.

Analiza ELISA vam omogoča, da določite protitelesa proti treponemi Pale: imunoglobulini - G, M, A. Njihova koncentracija vam omogoča sledenje procesu bolezni v njegovi dinamiki.

Takoj po okužbi imuniteta za boj proti bakteriji proizvaja protitelesa IgA, dva tedna kasneje - IgM. Mesec dni kasneje se pojavijo IgG. Ko se začnejo pojavljati klinični simptomi bolezni, kri za sifilis pokaže zadostno količino protiteles vseh treh vrst.

Študije kažejo, da se protitelesa IgM, specifična za sifilis, dramatično zmanjšajo po učinkovitem zdravljenju. Posebnost protiteles IgG je, da jih test za sifilis odkrije tudi po daljšem času po ozdravitvi in ​​vse življenje bolnika. Zato pozitiven rezultat ELISA ne pomeni vedno prisotnosti povzročitelja sifilisa. Pozitiven test lahko določi tako stopnjo razvoja bolezni kot tudi tisto, kar je bilo nedavno storjeno. učinkovito zdravljenje in zato protitelesa še vedno krožijo po krvi. Negativen rezultat ELISA lahko pomeni tako odsotnost bolezni kot njeno zgodnjo fazo.

Reakcija pasivne hemaglutinacije

TPHA se nanaša na specifične treponemske metode za odkrivanje povzročitelja blede treponeme. Pri analizi TPHA se med reakcijo protiteles in eritrocitov le-ti zlepijo in izločijo. Koliko oborjenih eritrocitov nastane med RPHA, je neposredno sorazmerno s količino protiteles proti treponemi.

Občutljivost RPGA je veliko bolj učinkovita v sekundarnem in terciarnem obdobju sifilisa - 99%, pri primarni analizi pa je zanesljivost analize 85%.

Specifičnost RPHA omogoča, da se uporablja za potrditev diagnoze drugih testov, kot sta RPR ali MRI. Hkrati RPHA ni tako občutljiv na stopnje sifilisa kot ELISA. Zato je treba RPHA in ELISA obravnavati skupaj. Napačen pozitiven rezultat RPHA je možen v 2,5 % primerov. To je mogoče zaradi podobnosti imunoglobulinov z drugimi protitelesi, ki se sproščajo pri nekaterih drugih boleznih, na primer avtoimunskih.

Wassermanova reakcija

Dragocen je serološki reakcijski kompleks (SCR), od katerih je eden znan kot Wassermannova reakcija diagnostična metoda. Omogoča vam tako prepoznavanje okužbe kot določitev stopnje bolezni. Krvni test za sifilis DAC je treba nujno dopolniti z metodami analize, specifičnimi za treponem (RIBD in ELISA). Za CSR test se uporabljajo antigeni, ekstrahirani iz srčne mišice goveda, ki so po svojih lastnostih podobni antigenom blede treponeme.

CSR ni specifična analiza za sifilis: pozitiven CSR je možen pri bolnikih s tuberkulozo, malarijo, avtoimunske bolezni, onkologija, med nosečnostjo in drugimi stanji. Analiza za sifilis med nosečnostjo je obvezna, saj lahko prisotnost te bolezni pri nosečnici povzroči spontani splav ali rojstvo otroka s prirojeno boleznijo.

Ekspresna metoda je pospešena različica Wassermanove reakcije. Pri izvajanju hitrega testa za sifilis se uporablja tudi kardiolipidni antigen, ki se zmeša s serumom v vdolbini posebne steklene plošče.

Koliko časa traja dokončanje testa, je pogosto odvisno od uporabljene tehnike. Običajno je čas izvedbe ekspresne metode približno pol ure.

Rezultat reakcije ekspresne metode se ovrednoti na enak način kot CSR, s pozitivnimi številkami, od 0 do +4. Občutljivost ekspresne metode, čeprav je boljša od CSR, lahko povzroči lažno pozitiven rezultat zaradi druge bolezni.

ORS in UMSS sta še ena različica Wassermanove reakcije oziroma ekspresne metode. Dešifriranje okrajšave UMSS pomeni pospešeno metodo za latentni sifilis. ARS pomeni presejalno reakcijo na sifilis. Pri izvajanju ORS se uporabljajo isti reagenti kot pri Wassermanovi reakciji.

Kako oceniti rezultat

Da bi dobili natančne podatke, je treba kri za sifilis vzeti na prazen želodec. Koncept na prazen želodec pomeni, da mora biti med obroki vsaj osem ur. Če je pacient prišel na test na prazen želodec, vendar je zadnjič jedel manj kot osem ur, mora počakati. Koncept posta pomeni tudi, da pred analizo ne smete piti nobenih pijač, razen negazirane vode. Testi se jemljejo na prazen želodec ne le za diagnozo sifilisa: to je splošno pravilo.

Negativen test na sifilis je označen z znakom "-". Toda negativen rezultat ne pomeni vedno, da v telesu ni patogena. Pogosteje se pri dešifriranju hitrih testov na podlagi Wassermanove reakcije pojavi lažno negativen rezultat. Zato se lahko sprostite šele, ko podatki vseh analiz dajo negativen rezultat.

Največjo stopnjo zaupanja pri bolnikih s sifilisom ima rezultat PCR. Če je PCR pozitiven, pomeni, da je res pozitiven. Če je interpretacija negativna, potem je negativna. Toda PCR lahko pokaže pozitiven rezultat tudi po uspešno zdravljenje, saj lahko ugotavlja prisotnost živih in mrtvih bakterij. Drugi testi lahko po uspešnem zdravljenju dajo napačen rezultat.

Anonimnost zdravljenja

Ljudje, zlasti moški, le redko izrazijo željo po rednem pregledu pri zdravniku. Kar zadeva sifilis, so lahko razlog za to tako simptomi počasne bolezni, ki se ne manifestirajo, ali sram, nepripravljenost, da bi drugi vedeli za bolezen.

Zato se veliko ljudi pogosto strinja z anonimnim pregledom, hkrati pa želi dobiti zagotovilo, da bo tudi zdravljenje resnično anonimno. Seveda ni težav anonimno opraviti analize za sifilis. Nastanejo, ko bolnik želi anonimno obravnavo. Dejstvo je, da je oseba nosilec nevarne spolne bolezni in lahko okuži tako ljudi, ki so mu blizu, kot tujca. Zato v nobenem primeru ne smete oklevati, med zdravljenjem pa je nujno upoštevati vsa navodila zdravnika.

Vprašanja

V: Krvni test?

Zdravo! Pomagajte pri dešifriranju rezultatov krvnega testa iz vene: ELISA 3,3 št. (0-1,2). Kaj to pomeni?

Prosimo, da dobesedno ponovite vse podatke na laboratorijskem obrazcu. Ime analize, merske enote (če obstajajo). S temi informacijami bo mogoče natančneje odgovoriti na vaše vprašanje.

CSR krvni test. Na hrbtni strani lista je bilo napisano: ELISA 3,3 št. (0-1,2), Wassermanova reakcija je negativna.

CSR, znana tudi kot Wassermanova reakcija, je zastarela laboratorijska diagnostična metoda, ki se je prej uporabljala za odkrivanje sifilisa. Rezultat, ki ste ga dali, je lahko dvomljiv, vendar to nikakor ne pomeni prisotnosti povzročitelja sifilisa v vašem telesu. Za razjasnitev situacije je potrebno opraviti pregled ELISA (preveriti raven protiteles razreda M in G proti sifilisu). Samo na podlagi podatkov te raziskave bo mogoče potrditi ali izključiti sifilis. Za več informacij o povzročitelju te bolezni in o tem, kako se prenaša, klinične manifestacije sifilis, metode laboratorijske diagnoze te bolezni, pa tudi metode njenega zdravljenja, lahko preberete v našem razdelku o ta bolezen: sifilis.

Več o tej temi:

Iskanje vprašanj in odgovorov

Obrazec za dopolnitev vprašanja ali povratne informacije:

Uporabite iskanje odgovorov (baza vsebuje več kot odgovorov). Veliko vprašanj je že odgovorjenih.

Dekodiranje analize CSR

Skupno število strani: 3

Zadnja služba.